山羊疱疹病毒Ⅰ型的分离鉴定与致病性

为了查明引起2013—2014年江苏多地育肥羊出现呼吸道症状为主的疾病的病因,通过采集发病羊场鼻拭子,采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒形态结构观察和病毒核酸鉴定,分离到一株山羊疱疹病毒Ⅰ型(caprine herpesvirus 1,CpHV-1),命名为JSHA1405;并对其进行了致病性试验。分离鉴定结果表明:病料接种MDBK细胞后,盲传至第3代时产生明显细胞病变;电镜下可见直径约100nm有囊膜的病毒粒子;gB全基因测序表明其为CpHV-1,序列比对显示JSHA1405株与CpHV-1瑞士分离毒E/CH株相似性最高,为99.2%。致病性试验表明,JSHA1405分离株可导致山羊发热持续一周以上,体温最高可达41.8℃。山羊感染后临床症状明显,表现为精神沉郁、流浆液性或脓性鼻涕,可通过鼻腔/粪便排毒。山羊感染后第7天出现中和抗体,第28天达到最高。这是国内首次报道CpHV-1的分离鉴定及致病性,分离毒JSHA1405具有较强的致病性,为CpHV-1病原学及防控技术研究提供依据与参考。     

反向疫苗学在猪病疫苗研究中的应用

反向疫苗学是通过对病原基因组测序和计算机预测,筛选出可能编码疫苗抗原的基因,通过高通量克隆、表达纯化技术及免疫原性的检测,制备具有保护力的疫苗,为传统方法无法制备疫苗的病原微生物提供了一种新的研究思路与方法。本文介绍了反向疫苗学的基本流程,并对近几年反向疫苗学在猪病病原微生物方面的研究进展进行了综述。     

替米考星对猪肺炎支原体 最小抑制浓度的测定试验

本试验对国产的替米考星进行了体外抗支原体活性最小抑制浓度的测定，结果报道如下。     

Ghrelin对大鼠胃蛋白酶和H+-K+-ATP酶活性的体外作用

从断奶大鼠中获得新鲜的胃粘膜,分离培养胃粘膜上皮细胞,培养30 h后,试验组换为分别含有1×10^-4、1×10^-3、1×10^-2和1×10^-1μmol/L生长素（Ghrelin）的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h,收集培养液和细胞,分别测定培养液中胃蛋白酶活性和细胞中H^＋-K^＋-ATPase活性。试验结果表明：1×10^-3μmol/L的Ghrelin可显著提高胃蛋白酶的活性（P〈0.05）,1×10^-4、1×10^-3和1×10^-2μmol/L的Ghrelin显著提高胃黏膜上皮细胞中H^＋-K^＋-ATPase的活性（P〈0.05）。表明Ghrelin体外作用于胃粘膜上皮细胞可刺激胃蛋白酶和胃酸的分泌。     

无土栽培蔬菜根腐病的防治措施

由于无土栽培自身的生态系统特点，病害一旦侵入即迅速发展，尤其是一些水生病原苗会随营养液的循环扩散到所有植株上，引发根部病害，成为无土栽培蔬菜的突出问题，由腐霉菌引起的根腐病尤为难治。     

高温季节猪高热病的重要防控原则

猪高热病是近年来严重影响我国养猪业健康发展的重要疾病,本文通过对我国猪高热病发生的历史回顾,探索发病原因,提出猪瘟控制的核心是免疫,蓝耳病的控制要用疫苗免疫,细菌病、气喘病与圆环病毒感染在高热病控制中不可忽视,而高热病防制的根本策略是加强猪场管理与执行。这些重要的防控原则,可为该病的防控提供参考和帮助。     

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法.结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min.对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%.     

脂肪细胞膜抗血清对猪胴体品质和肉品质的影响

将36头5周龄的断奶上海大白猪随机分成6组.对照组C1和C2、皮下免疫试验组S1和S2、腹腔免疫试验组A1和A2,每组6头猪.试验周期为11周和17周.试验组A1和A2腹腔注射5.0 ml/kg BW山羊抗猪脂肪细胞膜抗血清,试验组S1和S2皮下注射5.0 ml/kg BW山羊抗猪脂肪细胞膜抗血清,对照组C1和C2以相同剂量注射正常山羊血清.11周末和17周末屠宰结果显示:①各试验组猪板油重和背膘厚都显著低于对照组(P＜0.05);11周末,与对照组相比,试验组S1和A1中猪眼肌面积均显著升高;17周末,腹腔免疫组猪眼肌面积显著高于对照组(P＜0.05).②11周末,腹腔免疫组猪半腱肌和里脊、皮下免疫组猪背最长肌和里脊中脂肪含量均明显低于对照组(P＜0.05);17周末,与对照组相比,腹腔免疫组猪半腱肌中脂肪含量显著下降(P＜0.05).③11周末,腹腔免疫组猪背最长肌和里脊中蛋白质含量显著高于对照组(P＜0.05);17周末,各试验组背最长肌和里脊中蛋白质含量与腹腔免疫组半腱肌中蛋白质含量均显著高于对照组(P＜0.05).表明,山羊抗猪脂肪细胞膜被动免疫具有较好改善猪胴体品质和肉品质的作用.     

猪流行性腹泻病毒G2a变异株CH-HK-2021的分离鉴定及其遗传进化分析

【目的】明确猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株的遗传进化关系及变异株各亚型间的抗原性差异位点,为PEDV新型疫苗及诊断试剂盒的研发打下基础。【方法】将采集的3份PEDV阳性仔猪肠道组织样品接种至非洲绿猴肾细胞（Vero）上进行PEDV分离,分别采用间接免疫荧光试验（IFA）、 Western blotting、 RT-PCR和电镜观察进行鉴定,通过TCID50测定病毒滴度及绘制病毒体外增殖动态曲线;将分离毒株基因组分成33段进行RT-PCR扩增,使用Lasergene中的SeqMan拼接序列,然后以MEGA 7.0进行遗传进化分析,并以Protean中的Jameson-Wolf算法进行抗原性分析。【结果】其中1份PEDV阳性仔猪肠道组织样品在Vero细胞上盲传至第6代时出现典型的细胞病变,将其命名为CH-HK-2021毒株; IFA和Western blotting鉴定结果表明CH-HK-2021毒株能与小鼠抗PEDV N蛋白单克隆抗体发生特异性反应,且RT-PCR能扩增获得预期的目的条带,证实分离毒株即为PEDV。CH-HK-2021毒株的直径在80~120 nm,且病毒粒子表面带有刺突样的形状,属于冠状病毒;其在Vero细胞上能稳定传代,目前已传至100代。CH-HK-2021毒株在感染Vero细胞24 h后,其病毒滴度达最高值,为105.6 TCID₅₀/mL。CH-HK-2021毒株全基因组除去poly （A）尾结构为28034 bp,与PEDV参考株在全基因组水平上的核苷酸序列相似性为96.0%~98.9%,与参考毒株S基因核苷酸序列的相似性为93.1%~99.0%,其中与变异株CH/JX/01（KX058031）的核苷酸序列相似性最高,与经典毒株AVCT12（LC053455）的核苷酸序列相似性最低。CH-HK-2021毒株属于G2a变异株,为我国当前的流行毒株。G2a毒株与G2b变异株在S基因上存在42个核苷酸差异位点,在S蛋白上则存在6处抗原性差异位点,且主要的差异位点位于S2亚基上。【结论】分离获得的CH-HK-2021毒株属于PEDV G2a变异株,为我国当前的流行毒株,与PEDV经典毒株的亲缘关系相对较远。G2a毒株和G2b变异株在S2亚基上存在多处抗原性差异位点,故推测S2亚基是导致G2a毒株与G2b变异株抗原性差异的主要原因。