大肠杆菌疫苗研究进展

大肠杆菌是引起幼畜腹泻的主要病因之一,尤以初生幼畜特别易感,并可导致生长发育迟缓,生产能力低下,甚至造成死亡,给畜牧业的发展造成重大损失.按目前国际上的分类,大肠杆菌大致有6种致病型,包括肠产毒性大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)、肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic E.coil,EPEC)、肠出血性大肠杆菌(enterohaemrrhagic E.coli,EHEC)、肠侵袭性大肠杆菌(enteroinvasive E.coli,EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(enteroaggregadve E.coli,EAggEC)和弥散性黏附大肠杆菌(difuse adherence E.coil,DAEC).     

鸭坦布苏病毒SYBR Green qPCR检测方法的建立

通过BLAST比较已公布的鸭坦布苏病毒核酸序列,在其E基因保守区域设计了4对引物,并用鸭坦布苏病毒培养物核酸筛选出最佳的一对引物建立了SYBR Green qPCR。用构建的重组质粒建立标准曲线,扩增效率为90.5%,在2.0×10~1~2.0×10~8copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低检测限为100拷贝/反应。该qPCR方法可以检测5个鸭坦布苏病毒分离株以及WF100活疫苗,灵敏性比文献已发表的其他3对引物高10倍;且特异性很好,不与其他常见禽类病毒交叉反应。由此表明本研究新建了一种高度灵敏和特异的鸭坦布苏病毒的SYBR Green qPCR检测方法。     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株的基因序列,设计U1和U6两套PCR引物和荧光探针,建立了扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR用于检测美洲型PRRSV。用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟（HCV）、猪伪狂犬（PRV）等7种病毒进行特异性检测。结果显示建立的扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR可用于检测PRRSV,其灵敏度为10个拷贝的质粒DNA,而与HCV等非PRRSV无交叉反应。本研究所建立的荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可用于PRRSV样品的检测。     

牛传染性鼻气管炎病毒套式PCR检测方法的建立

利用套式PCR技术建立一种快速检测牛传染病鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheitis virus,IBRV)并能区分野毒株和gB基因缺失疫苗的方法。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒的gB和gE基因序列,应用pri mer5.0软件设计了gB/BN和gE/EN的2套套式PCR引物,分别对IBRV标准株进行PCR扩增,结果表明,这2套引物均能扩增出与设计目的片段大小一致的特异性条带;用此引物对同属的伪狂犬病毒、马立克氏病毒、鸭瘟病毒进行扩增,具有良好的特异性。引物gB/BN和gE/EN的检测灵敏度分别为0.01TCID50和0.1TCID50。     

囊素对鸡传染性法氏囊病弱毒苗免疫的影响

为了研究囊素对鸡传染性法氏囊弱毒苗免疫效果的影响,将囊素按不同剂量与法氏囊弱毒苗混合滴鼻接种雏鸡。对接种后7,14,21和51日龄的鸡进行抗体琼扩效价检测、抗体转阳率检测和囊指数测定。结果显示:中等剂量(10μg/羽)囊素添加的鸡传染性法氏囊弱毒疫苗组抗体效价产生和持续时间高于其他剂量组和疫苗对照组(低毒力),囊指数值也高于其他组;鸡传染性法氏囊弱毒疫苗(中等毒力)接种试验鸡,能长时间维持较高抗体,但对鸡的法氏囊损伤较大。试验证明,适当剂量的囊素对鸡传染性法氏囊弱毒疫苗具有免疫增强作用和减少法氏囊损伤作用。     

检测马西尼罗热病毒抗体的重组E蛋白-ELISA的建立

摘要：重组质粒pET-E转化宿主菌 BL21，经1.0mmol/L IPTG 诱导，外源基因以包含体的形式获得高效表达。通过Western blotting 检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测WNV抗体的间接ELISA方法。结果表明，抗原的最佳稀释度为8.6ug/mL，血清的最佳稀释度为1：100，待检血清阳性标准初步定为：OD490nm＞2.1×OD490阴性。用此方法检测了450 份血清样品，结果全为阴性。     

进口牛在出口隔离场免疫牛病毒性腹泻疫苗对后续检疫工作的影响及应对策略

本文分析了进境种牛在境外出口隔离场免疫牛病毒性腹泻灭活疫苗后,对该病后续检疫工作的影响:从血清样品中进行病毒分离会受到干扰;对出口隔离场检疫所用的抗原捕捉ELISA几乎没有影响;对种牛在国内进口隔离场检疫及后续检疫时,如使用针对结构蛋白Erns的抗原捕捉ELISA试剂盒,则影响较小,如使用针对非结构蛋白的NS2-3抗原捕捉ELISA试剂盒,则影响很大;免疫导致无法区分自然感染和免疫反应。进而提出了取消免疫该疫苗的建议,并得到了进出口国政府主管部门的认同并付诸实施。     

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因序列、猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪博卡病毒(PBoV)NP1基因序列,设计合成3对引物。通过优化反应条件,对TGEV、PEDV RNA反转录获得的cDNA模板和PBoV的DNA模板进行多重PCR扩增,同时得到3条与试验设计相符的1 060bp(TGEV)、462bp(PEDV)及258bp(PBoV)特异性条带,建立了同时检测TGEV、PEDV和PBoV的多重PCR方法。结果表明,在同一PCR反应体系中,可以同时检测这3种病毒核酸片段,而对其他病毒的检测均为阴性;敏感性分析表明,该方法的最低检测限分别为35、20、10pg的核酸。采用该方法对60份临床样品进行检测,TEGV阳性率为1.6%,PEDV阳性率为6.7%,PBoV阳性率为21.7%,表明建立的方法可以应用于临床检测。     

西尼罗病毒的基因进化分析

为更好的了解西尼罗病毒在世界各地的流行特征,从GenBank中随机选取45株西尼罗病毒的全基因或部分基因序列,进行同源性分析构建了基因进化树.发现西尼罗病毒可以分为两个谱系,1系病毒广泛分布在非洲西部、中东、东欧、印度、美国和澳大利亚等地,2系病毒分布在非洲亚撒哈拉、马达加斯加等地.1系的西尼罗病毒可进一步分为3个分支.对其中的22株西尼罗病毒部分基因序列进行同源性比较,发现1系病毒之间核苷酸同源在76.8%以上,氨基酸同源性在78.3%以上,而2系病毒与1系病毒核苷酸同源性约为64.7%～76.2%,氨基酸同源性约为64.7%～93.0%.     

1例鹅痛风的临床治疗

正近年来养鹅业迅猛发展,养殖场户在缩短饲养周期、提高经济效益的目标刺激下,盲目添加高蛋白饲料,加上养殖空间有限、饲养密度暴增、圈养缺乏运动等因素,导致了痛风等营养性疾病的发生常常可见。本文就笔者临床诊治过程中接收的1例仔鹅痛风为例,试探讨该病的病因、治疗和预防措施等,为养殖者在今后的饲养中少走弯路提出一些建议。1发病情况