研究性教学方法在比较解剖学教学中的应用

比较解剖学内容多且容易混淆,学习难度较大。因此,将研究性教学方法应用于比较解剖学教学中。分析了实施研究性教学的意义,并阐述了研究性教学方法在比较解剖学教学中的应用。     

基于GC/TOF-MS技术研究猪健康大卵泡和中等卵泡液的代谢变化

为研究国内猪卵巢卵泡液的代谢组分轮廓特征以及由中等卵泡发育为大卵泡过程中的代谢成分变化,运用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC/TOF-MS)对采自屠宰场三元杂交母猪卵巢中的11份大卵泡液(直径5~8 mm)和12份中等卵泡液(直径3~5 mm)进行代谢物检测,并采用主成分分析(PCA)及偏最小二乘判别法(PLS-DA)分析方法对数据进行多元统计分析。结果显示:猪大卵泡与中等卵泡液的代谢谱明显不同,共有33种差异代谢物与卵泡大小密切相关;与中等卵泡液相比,大卵泡液中α-酮戊二酸、葡萄糖1-磷酸、脯氨酸的浓度极显著升高(P0.01),葡萄糖浓度显著升高(P0.05),其他如氨基酸、脂肪酸在内的绝大多数代谢物浓度均显著性降低(P0.05);代谢物通路富集分析显示差异代谢物主要与三羧酸循环、糖代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢等代谢通路相关。结果表明:应用GC/TOF-MS技术可有效筛选出猪不同大小卵泡之间的卵泡液差异代谢物,这些差异代谢物提示卵泡发育过程涉及很多代谢通路的变化,这为今后利用人工干预手段对卵泡发育进行调控提供参考依据,同时为猪卵母细胞发育潜能和早期胚胎发育研究提供一个新思路。     

热应激对兔下丘脑-垂体-睾丸轴NMB及其受体基因 表达和睾酮分泌的影响

研究热应激对公兔下丘脑-垂体-睾丸(HPT)轴神经介素B(NMB)及其受体(NMBR)基因表达水平及血清皮质醇和睾酮分泌的影响,探讨热应激对神经肽和相关激素分泌的影响。建立热应激模型,采用荧光定量PCR (RT-PCR)检测兔NMB和NMBR m RNA在HPT轴的表达情况,采用放射免疫分析法(RIA)检测兔血清中皮质醇和睾酮浓度的变化规律。结果表明,兔NMB和NMBR基因在HPT轴中表达;NMB和NMBR m RNA在HPT轴的表达模式相似,且热应激后在一定程度上可以促进NMB和NMBR基因的表达,并按时序在下丘脑(热应激0.5 h)、垂体(热应激1.0 h)和睾丸(热应激2.0 h)促进作用最为明显;热应激可以促进皮质醇的分泌,并抑制睾酮的分泌,但这种抑制作用随着热应激时间的增加(热应激2.0 h)逐渐恢复正常。表明热应激可能通过NMB/NMBR系统调节HPT轴的功能,进而影响动物繁殖。     

虚拟仿真技术在动物解剖学课程教学中的应用探讨

动物解剖学是畜牧兽医专业学生的一门入门课程,也是学习其他课程的基础。将虚拟仿真教学技术引入,与传统的教学手段相互补充,能更充分调动学生的学习积极性和自主性,有效提高教学效果和质量。介绍了动物解剖学传统教学中标本的应用,阐述了虚拟仿真技术在动物解剖学课程理论教学和实验教学中的应用。     

神经介素B研究进展

神经介素B(neuromedine B,NMB)是1983年从猪脊髓提纯分离的一种神经肽,含10个氨基酸,大分子肽含32个氨基酸,属于蛙肽家族,为铃蟾肽相关肽。NMB通过其受体发挥生物学作用,铃蟾肽受体家族有3～4种(BB1、BB2、BRS-3、BB4或BRS-3.5),NMB优先受体是BB1(NBM-R),与其他受体的亲和力较低。NMB及其受体在中枢神经系统和外周组织广泛分布,具有多种生物学作用,包括刺激平滑肌收缩,改变胃肠道的运动性,抑制垂体促甲状腺素的释放;参与摄食和体温调节,介导应激和恐惧反应,影响行为和记忆,促进肿瘤生长等。     

miR-15a对猪卵泡颗粒细胞BDNF基因表达的影响

为探索miR-15a对猪卵泡发育的影响,选取健康大卵泡、中等卵泡和闭锁卵泡,研究不同卵泡中miR-15a的相对表达量以及其是否对卵巢颗粒细胞中有BDNF表达具有调节作用。分别抽取直径3-5 mm、大于5 mm健康卵泡和3-5 mm闭锁猪卵泡,采用q PCR检测发现闭锁卵泡中miR-15a表达显著升高。免疫组化结果显示中等健康卵泡颗粒细胞上BDNF、Tr KB均有表达,而在靠近卵泡腔的凋亡颗粒细胞BDNF免疫阳性反应较弱。分离培养猪卵巢颗粒细胞,过表达miR-15a能显著上调BDNF基因表达水平,Bcl-2基因表达有下降趋势但差异不显著;抑制miR-15a表达能显著抑制BDNF、bcl-2基因表达水平。Western-Blot结果发现,过表达miR-15a显著下调BDNF蛋白水平,而抑制miR-15a表达则能显著上调BDNF蛋白水平。实验结果显示miR-15a可能经由其靶基因BDNF参与猪卵泡的发育和闭锁。     

猪神经介素B受体基因慢病毒过表达载体的构建与鉴定

【目的】构建猪神经介素B受体(NMBR)基因慢病毒过表达载体,并检测其在猪Leydig细胞中的表达,为研究NMBR基因过表达在猪睾丸间质(Leydig)细胞中的功能提供参考。【方法】根据猪NMBR基因(GenBank登录号:KM058699)CDS序列设计并合成特异性酶切引物,通过RT-PCR扩增获得猪NMBR CDS全长序列,构建pMD19-T-NMBR质粒;通过Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ对pCD513B-1和pMD19-T-NMBR质粒双酶切,构建pCD513B-1-NMBR重组质粒;将pCD513B-1-NMBR重组质粒与辅助质粒共转染人胚肾细胞(HEK-293T),转染48 h后通过荧光倒置显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)情况,收集细胞培养液上清获得猪NMBR基因过表达慢病毒,并通过倍比稀释法测病毒效价;然后将猪NMBR基因过表达慢病毒转染猪Leydig细胞,转染48 h后观察细胞中GFP表达,收集细胞并通过实时荧光定量PCR检测NMBR mRNA的表达情况。【结果】通过RT-PCR成功扩增获得猪NMBR CDS全长序列,大小为1 173 bp;pMD19-T-NMBR重组质粒双酶切为2条特异性条带,条带大小分别与pMD19-T质粒和猪NMBR CDS序列片段大小一致,表明成功构建pMD19-T-NMBR质粒;通过双酶切获得线性化的pCD513B-1和NMBR序列;RT-PCR和测序结果表明,成功构建慢病毒过表达载体pCD513B-1-NMBR;pCD513B-1-NMBR转染48 h后,HEK-293T细胞中呈现大量绿色荧光,表明病毒包装成功,病毒效价约为4×10⁶ TU/mL;NMBR基因慢病毒转染猪Leydig细胞48 h后,80%以上细胞有GFP表达,表明大部分细胞成功转染慢病毒;实时荧光定量PCR检测结果表明,转染慢病毒后能够极显著增加NMBR mRNA的表达(P＜0.01)。【结论】本试验成功构建了猪NMBR基因慢病毒过表达载体,并证实猪NMBR基因过表达慢病毒能够增加猪Leydig细胞NMBR基因的表达,为研究NMBR基因过表达在猪Leydig细胞中的作用奠定基础。