虚拟仿真技术在动物解剖学课程教学中的应用探讨

动物解剖学是畜牧兽医专业学生的一门入门课程,也是学习其他课程的基础。将虚拟仿真教学技术引入,与传统的教学手段相互补充,能更充分调动学生的学习积极性和自主性,有效提高教学效果和质量。介绍了动物解剖学传统教学中标本的应用,阐述了虚拟仿真技术在动物解剖学课程理论教学和实验教学中的应用。     

ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达

[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×10~6～10×10~6 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。     

小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别命名为pCD513B-ERO1α-shRNA和pCD513B-NC-shRNA。将构建好的重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液进行浓缩,同时梯度稀释转导HEK 293T细胞,检测病毒滴度。浓缩后的慢病毒转导RAW 264.7细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术进行有效片段的筛选。之后,将筛选的慢病毒转到多种细胞系或者原代细胞,用RT-qPCR和Western blot技术检测ERO1α基因的表达情况。PCR及测序结果表明,重组慢病毒干扰载体pCD513B-ERO1α-shRNA构建成功,所包装的慢病毒其病毒滴度为5×10~7 TU/mL～10×10~7 TU/mL。RT-qPCR和Western blot结果表明,pCD513B-ERO1α-shRNA-3抑制ERO1α表达的效果最好,干扰效率在80%左右。pCD513B-ERO1α-shRNA-3能够转导多种细胞,并显著抑制ERO1α的表达,干扰效率在70%～90%。成功构建针对小鼠ERO1α基因的shRNA重组慢病毒载体,为进一步研究ERO1α功能奠定了技术基础。     

纳米二氧化硅对小鼠睾丸间质细胞的毒性作用

为探讨纳米二氧化硅(silica nanoparticles, SNPs)对睾丸间质细胞的毒性作用及其调控机制，利用St9ber法制备SNPs并通过透射电镜技术(transmission electron microscopy, TEM)检测其物理化学性质；采用尾静脉注射SNPs进入小鼠体内，通过H&E染色检测SNPs对小鼠睾丸的急性毒性作用；体外培养小鼠睾丸间质细胞，通过透射电镜技术、乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)染色、吖啶橙(acridine orange, AO)染色、Lyso-Tracker Red染色、流式细胞术、免疫荧光技术和Western blot方法检测SNPs对小鼠睾丸间质细胞的毒性作用。结果显示，本研究成功制备分散性良好近球形直径为100 nm的SNPs;体内试验结果表明，SNPs能够引起睾丸的急性毒性，导致精曲小管结构异常和睾丸间质减少；体外试验结果表明，SNPs抑制睾丸间质细胞增殖和促进细胞凋亡，在睾丸间质细胞溶酶体内发现SNPs颗粒分布，SNPs通过增大溶酶体膜通透化和改变其酸碱性损伤溶酶体导致睾丸间质细胞的凋亡。...