母马大、小卵泡的卵泡液代谢组学分析及其对卵泡发育的影响

本实验旨在研究母马大、小卵泡液代谢物的差异,从卵泡液代谢组层面初步探讨差异物对卵泡发育的影响及卵泡发育机制。选用8匹山东即墨地区母马的卵泡液进行代谢组学分析,大卵泡直径设为45～60 mm、小卵泡直径设为20～30 mm,采用超高液相色谱-高分辨质谱联用技术,通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘法-判别分析法(PLS-DA)得到大小卵泡液差异性物质质荷比。结果表明:在大卵泡液中含量多的代谢物有睾酮、1-棕榈酰溶血磷脂酸、β-硫酸雌醇、硫酸雌酮,小卵泡液中含量多的代谢物有硫酸吲哚酚、木子塘、水苏糖和3-脲基丙酸酯。综上可知,在大卵泡液中,上调物质主要是类固醇,比较单一集中,但小卵泡中不存在上调的类固醇物质,说明在母马中类固醇激素是促使卵泡发育的主要代谢物;在小卵泡液中,上调物质种类复杂,当优势卵泡出现时,可能有一些代谢物会抑制其余的小卵泡继续发育。     

绵羊卵泡期卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体的表达

为探讨卵泡期卵泡颗粒细胞促卵泡素特异性受体(FSHR)差异剪接体表达的变化,选择30只道寒杂交一代育成母羊肌注PG+埋植CIDR+肌注PG进行同期发情处理,选取9只发情母羊屠宰,取两侧卵巢组织,按小卵泡(≤3.0 mm),中等卵泡(3.0～5.0 mm)和大卵泡(≥5.0 mm)级别分别收集卵泡液和颗粒细胞,采用放射性免疫法测定类固醇激素(E_2和P_4)和FSH浓度,实时定量PCR检测不同直径卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体表达水平。结果表明,小卵泡和中等卵泡中FSHR1和FSHR3 mRNA的表达量极显著高于FSHR2和FSHR4(P0.01),在中等卵泡中FSHR3 mRNA的表达量显著高于FSHR1(P0.01);大卵泡中FSHR2 mRNA的表达量显著高于FSHR1、FSHR3和FSHR4(P0.01),FSHR1、FSHR3和FSHR4 mRNA的表达量差异不显著(P0.05)。大卵泡中雌激素浓度极显著高于小卵泡和中等卵泡(P0.01),孕酮浓度无显著性差异(P0.05),E_2/P_4比值与大卵泡中FSHR3 mRNA的表达量呈极显著负相关(P0.01)。由结果可知,卵泡发育过程中FSHR1和FSHR3可能是小卵泡和中等卵泡颗粒细胞增殖的2种主要剪接形式。     

猪卵泡发育过程中差异表达miRNA的鉴定

本研究旨在探讨miRNAs对猪卵泡发育过程的影响。以卵泡期第4天杜洛克猪中等M1卵泡(直径3.0~4.9 mm)与M2卵泡(直径5.0~6.9 mm)为试验材料,通过miRNA芯片杂交检测筛选到在杜洛克母猪中等M1卵泡与M2卵泡之间的差异表达miRNAs,随机抽选若干个检测到的miRNA用Q-PCR的方法对芯片结果进行验证,并预测差异表达miRNA的靶基因,进行GO及KEGG分析。结果表明:芯片检测出347个猪miRNA的表达,筛选得到表达量高且差异大的34个miRNA;随机筛选出6个差异表达的miRNA经Q-PCR验证,与基因芯片结果一致;分析得到的靶基因涉及最多的为Jak-STAT、细胞因子及其受体的相互作用信号通路,且两个信号通路均与卵泡发育相关。结果提示:检测筛选得到的差异表达miRNA可能对猪的卵泡发育过程具有调控作用。     

水牛卵泡液中雌二醇和睾酮水平变化的初步研究

试验采用ELISA法对离体水牛卵巢不同大小卵泡液中的雌二醇(E2)和睾酮(T3)水平进行了定量分析.结果表明:较大卵泡(直径≥6 mm)液中雌二醇的平均浓度是中小卵泡(直径为2～5 mm)液中的8.5倍;而中小卵泡液中睾酮的平均浓度则是较大卵泡液中的3.3倍;较大卵泡液中雌二醇与睾酮比值显著高于中小卵泡.试验结果说明高浓度的雌激素对卵泡的发育有促进作用,而高浓度的雄激素则发挥抑制作用.     

湖羊不同发育阶段卵泡内代谢产物和激素含量的比较研究

本试验旨在研究代谢产物、代谢激素和生殖激素在湖羊黄体期不同发育卵泡内的变化。选用体质量40kg左右的湖羊11头,同期发情结束后第12天屠宰,按不同大小卵泡分离卵泡液。试验结果表明,与≤2.5mm卵泡相比,>2.5mm卵泡内的葡萄糖浓度显著提高(P<0.05),胰高血糖素浓度显著降低(P<0.05),乳酸脱氢酶(LDH)活性和睾酮浓度极显著降低(P<0.01),雌二醇浓度极显著提高(P<0.01),而血氨、游离脂肪酸、尿素、胰岛素和孕酮浓度差异不显著。雌二醇浓度与LDH活性呈极显著负相关(P<0.01),与葡萄糖浓度呈显著正相关(P<0.05),与胰高血糖素浓度呈显著负相关(P<0.05),与睾酮浓度呈极显著负相关(P<0.01),与孕酮浓度接近正相关(P=0.051)。试验结果表明代谢产物和激素共同参与调节卵泡发育。     

亚临床酮病奶牛肝脏脂质代谢组学变化对卵泡发育的影响

为了研究奶牛产后亚临床酮病(SCK)导致的脂质代谢紊乱对卵泡发育的影响，本试验应用代谢组学技术探究奶牛产后肝脏脂代谢紊乱影响卵泡发育的机制。根据奶牛血清中葡萄糖、β-羟丁酸含量，将产后14～21 d奶牛分为SCK组和健康对照组，跟踪至产后45～60 d。SCK组中无发情表现的奶牛被选为N组(无优势卵泡，n=6);健康对照组中有发情表现的奶牛被选为C组(有优势卵泡，n=6),在产后45～60 d采集N组和C组奶牛肝脏组织样本，应用非靶向代谢组学技术分析奶牛肝脏代谢质谱，应用靶向代谢组学定量分析奶牛肝脏中38种中长链脂肪酸含量。非靶向代谢组学结果显示，在N组和C组奶牛的肝脏中鉴定出35种差异代谢物，差异代谢物富集通路包括氨基酸生物合成、cAMP信号通路、丙酮酸代谢、组氨酸代谢等。靶向代谢组学结果显示，与C组相比，N组奶牛肝脏中有30种脂肪酸含量升高。因此，本试验确定了SCK奶牛肝脏脂质代谢变化影响产后卵泡发育，肝脏差异代谢物主要通过胆碱能突触、组氨酸代谢、氨基酸生物合成、丙酮酸代谢等途径影响产后奶牛卵泡发育。     

miR-15a对猪卵泡颗粒细胞BDNF基因表达的影响

为探索miR-15a对猪卵泡发育的影响,选取健康大卵泡、中等卵泡和闭锁卵泡,研究不同卵泡中miR-15a的相对表达量以及其是否对卵巢颗粒细胞中有BDNF表达具有调节作用。分别抽取直径3-5 mm、大于5 mm健康卵泡和3-5 mm闭锁猪卵泡,采用q PCR检测发现闭锁卵泡中miR-15a表达显著升高。免疫组化结果显示中等健康卵泡颗粒细胞上BDNF、Tr KB均有表达,而在靠近卵泡腔的凋亡颗粒细胞BDNF免疫阳性反应较弱。分离培养猪卵巢颗粒细胞,过表达miR-15a能显著上调BDNF基因表达水平,Bcl-2基因表达有下降趋势但差异不显著;抑制miR-15a表达能显著抑制BDNF、bcl-2基因表达水平。Western-Blot结果发现,过表达miR-15a显著下调BDNF蛋白水平,而抑制miR-15a表达则能显著上调BDNF蛋白水平。实验结果显示miR-15a可能经由其靶基因BDNF参与猪卵泡的发育和闭锁。     

卵泡液中总蛋白含量与卵泡直径的关系

通过检测不同直径卵泡的卵泡液中总蛋白含量的变化,从而进一步阐明卵泡液中蛋白成分在卵泡发育过程中的作用。将直径为3~5、5~8、8~10mm的卵泡和囊肿卵泡(>21mm)分为4组(n=10),分别抽取卵泡液。通过TCA/丙酮方法进行样品处理;根据Bradford法检测原理,利用分光光度计对其进行蛋白定量研究。结果表明:3~5mm为4440μg/mL,5~8mm为976μg/mL,8~10mm为686μg/mL,囊肿卵泡(>21mm)为537.2μg/mL。经SPSS13.0软件分析,3~5mm卵泡液中蛋白平均浓度高于其他组(P<0.01);其他3组间差异均不显著(P>0.05);囊肿卵泡中蛋白含量最低。由此可得出,卵泡液中总蛋白浓度随着卵泡直径的增加而降低,表明卵泡液中的蛋白含量与卵泡发育的成熟度呈负相关。而囊肿卵泡的发生很可能和蛋白含量降低有关,为卵泡囊肿发病机制的研究提供新的理论参考。     

猪circ0001651的鉴定及其在卵泡中的表达研究

本实验旨在探究circRNA在猪卵泡发育过程中的作用,通过生物信息学分析预测其可能的调控机制,为进一步探索circRNA对卵泡发育的调控机制奠定基础。采用RNA-Seq技术对卵泡中差异性表达的circRNA进行筛选,用Real-time PCR进行组织表达谱分析,并分析其在梅山猪和杜洛克猪卵泡中的表达情况。结果表明:circ0001651在肌肉、脂肪、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、卵巢、输卵管、子宫、子宫角、垂体、下丘脑中均有不同程度表达,其中在下丘脑、垂体、输卵管、卵巢表达量相对较高;circ0001651在梅山猪M2卵泡(M2卵泡直径:5.1～7.0 mm)中的表达量极显著高于杜洛克猪(P <0.01),在杜洛克猪M1卵泡(M1卵泡直径:3.1～5.0 mm)中的表达量极显著高于梅山猪(P<0.01);其潜在靶基因CCR2、EGFL7、TNFRSF12A、CFL1、EGR1、GADD45G、SLIT2等与猪的卵泡发育相关。生物信息学分析显示,circ0001651部分靶标基因参与细胞周期、细胞增殖凋亡及卵巢发育等相关信号通路,提示其可能通过对靶基因的调控作用间接参与卵泡发育过程。     

基于液质联用技术的卵巢静止奶牛血浆代谢轮廓分析

旨在应用代谢组学技术筛选产后卵巢静止奶牛血浆中差异代谢物,探究差异代谢物与奶牛卵巢静止的关系。试验选取了产后45～60 d卵巢静止奶牛和正常发情奶牛各15头,应用LC/MS技术检测两组奶牛血浆样品,运用多元统计分析与单变量分析,结合生物信息学分析,筛选出血浆差异代谢物,揭示不同代谢通路中的差异代谢物与奶牛卵巢静止的关系。结果显示:LC/MS分析共筛选出14种血浆差异代谢物。与发情组奶牛相比,卵巢静止组奶牛有11种差异代谢物明显升高:分别是D-塔格糖、L-亮氨酰-L-脯氨酸、L-鹅肌肽、脯氨酸-缬氨酸、赖氨酸-亮氨酸、N-(3-苯基丙酰基)甘氨酸、7-烯胆(甾)烷醇、γ-生育酚、β-隐黄素、视黄醛和鞘磷脂;3种差异代谢物降低:分别是胞嘧啶、1-棕榈酰溶血磷脂酰胆碱和1-硬脂酰-SN-甘油-3-磷酰胆碱。代谢通路分析代谢组学所获得的奶牛卵巢静止血浆差异代谢物,提示奶牛产后糖代谢、脂类代谢、氨基酸代谢和谷胱甘肽代谢等的异常会阻碍卵泡发育,从而导致奶牛产后发生卵巢静止。本试验获得了卵巢静止奶牛血浆差异代谢物,探究了奶牛产后卵巢静止发生中差异代谢物在糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢以及其他代谢的变化,为今后深入研究奶牛卵巢静止的发病机理及防治新策略提供了方向。     

黄体期短期优饲对道寒杂交羊卵泡发育的影响

为研究母羊黄体期短期优饲对其卵泡发育的影响。选择60只道寒杂交羊随机分为试验组和对照组,每组30只。试验羊均先饲喂基础日粮(DE 11.72 MJ/d,DP 79.71 g/d),并对试验羊进行同期发情处理(肌注PG 0.1 mg,3 d后阴道埋置CIDR 12 d,撤栓再次肌注PG 0.1 mg),同期发情处理埋栓2 d后试验组羊饲喂试验日粮(DE 18.75 MJ/d,DP 108.44 g/d),饲喂期10 d,并于饲喂开始第1,2,4,6,8,10天分别采集试验组和对照组羊颈静脉血,测定血浆中葡萄糖,胰岛素,瘦素等含量。在撤栓注射PG后,埋栓第13,14,15天每组随机选择6只羊进行屠宰,采集卵巢,按小卵泡(≤3.0 mm)、中等卵泡(3.0～5.0 mm)和大卵泡(≥5.0 mm)进行卵泡数量统计及卵泡液、颗粒细胞收集。采用实时定量PCR技术,分析不同大小卵泡颗粒细胞中OB-R和IGF-1基因mRNA表达水平。结果显示,与对照组相比,试验组小卵泡数量显著下降(P<0.01),中等卵泡和大卵泡数量显著升高(P<0.01),同时血浆和大卵泡中葡萄糖(P<0.01)、胰岛素(P<0.01)和瘦素(P<0.05)的平均浓度均显著升高,中等卵泡和大卵泡颗粒细胞中OB-R和IGF-1基因的表达显著上升(P<0.05)。结果表明,母羊黄体期短期优饲可提高血浆中葡萄糖、胰岛素、瘦素浓度和颗粒细胞中OB-R和IGF-1基因表达量,促进卵泡期的卵泡优势化数量。     

基于GC/TOF-MS技术对流感感染小鼠粪便代谢组学的研究

为了探讨小鼠感染流感病毒后粪便代谢物的变化情况,寻找潜在生物标志物及相关的代谢通路,本研究运用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC/TOF-MS)检测对照组和病毒组小鼠的粪便。结果显示:在正交偏最小二乘法分析(OPLS)模型中,对照组与病毒组的得分图呈现明显差异,病毒组中一些代谢物发生了显著性的改变。α-酮戊二酸、甲硫氨酸、果糖-6-磷酸、苯丙氨酸、草酸、乳糖、棕榈酸、正缬氨酸、腺嘌呤、胆固醇、葡萄糖-6-磷酸、油酸、甘油、十五烷酸、β-丙氨酸等代谢物显著降低,而L-苹果酸、天冬氨酸、乳酸等代谢物显著上升。结论:病毒组与对照组之间存在脂类代谢、氨基酸代谢及糖代谢的差异,代谢组学的研究可以为流感病毒引起的肠道损伤机制提供新的依据。     

黄体期不同营养水平对湖羊卵泡发育及相关葡萄糖代谢途径的影响

旨在研究黄体期短期营养水平对湖羊卵泡发育、卵巢细胞凋亡率、葡萄糖转运蛋白及葡萄糖代谢途径关键基因表达量的影响,以探讨黄体期营养水平调控绵羊卵泡发育的可能机制。本研究选择经产湖羊30只进行同期发情处理,撤栓后使用调教公羊试情,发情结束当日定义为下一个情期的第0天,随后6d对所有试验羊给予1.0倍维持需要量水平饲喂,在情期的第7~14天,将试验羊随机分为1.0倍维持需要组(1.0M;n=10);0.5倍维持需要量组(0.5M;n=10)和1.5倍维持需要量组(1.5M;n=10);第15天分别从3组随机挑选屠宰6只试验羊并取卵巢组织待用,剩下的12只湖羊按1.0倍维持需要量词喂,并对原有各组试验羊进行发情鉴定观察,用以统计发情周期。结果表明,与1.0M组和1.5M组相比,限饲导致0.5M组试验羊出现显著的发情延迟现象(P0.05),并伴随着2.5mm直径卵泡/总卵泡比例升高和≥2.5mm卵泡/总卵泡比例的降低(P0.05);TUNEL结果显示,0.5M组试验羊卵巢胞凋亡率显著高于1.0M组和1.5M组(P0.05);葡萄糖转运蛋白-4(GLUT4)蛋白在卵巢组织上各级卵泡中均有表达,且其在1.5M组2.5 mm卵泡中的表达量显著高于1.0M组和0.5M组(P0.05);通过对卵泡细胞葡萄糖代谢途径:多元醇途径(Polyol pathway)、糖酵解途径(Glycolysis pathway)、己糖胺生物合成途径(Hexosamine biosynthesis pathway;HBP)和磷酸戊糖途径(Pentose phosphate pathway;PPP)关键基因进行qRT-PCR检测后发现:HBP途径关键酶GFPT2基因表达量在2.5mm卵泡中随采食量水平升高而降低(P0.05),但其在≥2.5mm卵泡中则随营养水平的升高而显著升高(P0.05);0.5M组试验羊≥2.5mm卵泡细胞PPP途径关键酶G6PDH基因表达显著低于1.0M组和1.5M组(P0.05)。综上表明,黄体期限饲造成湖羊发情延迟,推测其可能与其卵巢细胞凋亡率的升高,2.5mm卵泡细胞GLUT4蛋白表达量的降低和HBP途径的增强,≥2.5mm卵泡细胞中HBP途径的减弱及PPP途径的增强有关。本研究通过分析湖羊发情周期、卵巢组织不同直径卵泡分布、卵巢组织细胞凋亡率;卵泡细胞葡萄糖转运蛋白及葡萄糖代谢通路关键基因表达量随黄体期营养水平的变化规律,丰富黄体期卵泡发育的营养调节机制,为空怀母羊繁殖力调控提供理论依据。     

繁殖季节德州驴卵泡大小与子宫颈状态对应分析

为了确定繁殖季节发情期内母驴子宫颈形态与卵泡直径的关系,试验随机选择3～7岁的健康能繁德州母驴267头,采用触诊及B型超声波检测,分析了德州驴504个发情期中子宫颈成熟、软化、扩张及闭合状态下的最大卵泡平均直径及黄体对最大卵泡平均直径的影响。结果表明:子宫颈打开和关闭时,母驴最大卵泡平均值径分别为(32.08±5.61)mm和(23.57±7.24)mm,两者之间差异极显著(P0.01)。子宫颈处于打开状态下,卵巢有黄体和无黄体时的最大卵泡直径分别为(30.84±5.90)mm,(32.38±5.55)mm,两者之间差异不显著(P0.05);发情期子宫颈关闭时,卵巢无黄体和有黄体时的最大卵泡平均直径分别为(27.02±7.50)mm和(24.60±5.93)mm,两者之间差异显著(P0.05)。子宫颈关闭时黄体与卵泡同为左侧、右侧和异侧时的最大卵泡平均直径分别为(24.47±5.30)mm、(26.48±5.66)mm和(24.45±4.93)mm,三组间差异不显著(P0.05)。说明人工输精时,不仅需对卵巢卵泡直径大小、黄体状态进行检测,还需对子宫颈成熟、软化状态进行检查,以便在最佳时期完成配种。     

牦牛乏情期卵泡发育与17β-雌二醇含量相关分析

选择乏情期牦牛30头,进行卵巢卵泡发育与血浆17β-雌二醇含量相关的分析。结果表明:当卵泡大小在1.0~5.9mm(替补卵泡)时,左右两侧卵巢卵泡数与血浆17β-雌二醇含量呈负相关(P>0.05);当卵泡大小在6.0~8.9mm(选择卵泡)时,左侧卵泡数与血浆17β-雌二醇含量呈显著正相关(P<0.05),而右侧卵巢卵泡数与血浆17β-雌二醇含量呈极显著的正相关(P<0.01);当卵泡大小在9.0~15.0mm(优势卵泡)时,左右两侧卵巢泡数与血浆17β-雌二醇含量呈显著正相关(P<0.05)。     

胚胎移植时卵泡和黄体对妊娠率影响的分析

本试验探讨在受体羊的卵巢上同时存在卵泡和黄体时进行胚胎移植对移植后妊娠率的影响。经试验得出:(1)胚胎移植时受体羊卵巢上有卵泡(卵泡的直径小于3mm)和无卵泡的移植后妊娠率差异不显著(P>0.05);(2)卵巢上有功能性黄体存在时,卵泡的直径(小于2mm)对胚胎移植妊娠率的影响差异不显著(P>0.05)。同期发情处理对卵巢上的黄体和卵泡有很大影响,处理效果直接影响受体羊的利用率和胚胎移植后的妊娠率,而当卵巢上有功能性黄体存在时,卵巢上卵泡的有无及其大小(直径小于3mm)对胚胎移植后的妊娠率影响不显著(P>0.05)。     

川中黑山羊和雷州山羊大小卵泡转录组学分析

试验旨在通过比较两个品种山羊大小卵泡的mRNA表达图谱来挖掘影响山羊卵泡发育的基因,为进一步阐述山羊卵泡发育机制提供数据基础。使用氯前列醇钠对川中黑山羊和雷州山羊进行同期发情处理,屠宰后采集卵巢并在体视显微镜下分离单个卵泡(大卵泡6 mm;小卵泡3 mm),提取卵泡组织总RNA进行RNA-seq,利用生物信息学方法检测mRNA表达谱,筛选差异基因,并对其进行GO功能、KEGG通路富集分析。结果显示,川中黑山羊大小卵泡差异基因共4 451个,雷州山羊2 355个,二者共有差异基因1 771个。分析筛选出两个品种共有(INHBA、INHA、CYP19A1、KITLG、LHCGR和STAR)及各自特有(IGFBP6、BMP6和BMPR2)的已报道与卵泡发育相关的基因,此外还筛选出可能与这两种山羊繁殖性能相关的基因(GADD45B、TC2N和MSMO1)。GO功能分析显示,两个品种共有差异基因主要与各种物质的跨膜转运活性有关;KEGG通路分析显示,类固醇生成、细胞因子受体相互作用和cAMP信号通路在两个品种中均存在显著变化。类固醇生成过程中细胞色素P450代谢差异可能是川中黑山羊高产仔数的一个潜在因素。本研究结果为进一步探究山羊卵泡发育的基因功能及不同山羊品种繁殖性能差异提供参考。     

利用MALDI-TOF质谱比较水牛卵泡液多肽变化的研究

为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4 mm)、中等卵泡(直径4~8 mm)和成熟卵泡(直径>8 mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液存在12个显著差异多肽,其中在成熟卵泡内上调6个,下调有5个;在中等卵泡内上调4个,下调5个。其中分子质量约为1746 u的多肽在成熟卵泡中特异性表达,可作为卵泡成熟的潜在生物标志物之一。     

青年母牛在发情周期中卵泡发育波变化规律的研究

为揭示青年母牛卵泡生长发育的动态模式,作者利用B-型超声波诊断仪,对青年母牛在发情周期中卵泡生长发育的过程进行了连续观察。结果表明,卵巢上小卵泡(1~4 mm)、中卵泡(5~7 mm)和大卵泡(≥8 mm)的数量和直径均呈动态变化。大、中、小卵泡的数量、卵泡的发育要经历征集期、选择期、优势化、成熟期和闭锁退化的过程。青年母牛在整个发情周期中,优势卵泡的平均直径为13.6 mm,成熟卵泡的平均直径为13.80 mm,一个发情周期有3~4个卵泡发育波,其中有3个卵泡发育波的为多数(71.43%),有4个的为28.57%。     

牛卵巢卵泡Smad9表达模式的研究

本研究旨在探究Smad9在牛卵巢卵泡中的表达模式,为研究Smad9的功能奠定基础。从屠宰场获取牛卵巢,分离得到小卵泡(2 mm≤直径≤4 mm)、中卵泡(4 mm直径8 mm)、大卵泡(直径≥8 mm),用免疫组织化学技术对不同直径卵泡的Smad9蛋白进行定位分析;通过机械分离法分离卵泡颗粒细胞,用qPCR和Westernblotting技术检测Smad9在小卵泡、中卵泡、大卵泡颗粒细胞中的相对表达量。结果显示:在牛的卵泡中,Smad9在颗粒细胞和膜细胞层中表达;小卵泡和中卵泡颗粒细胞中Smad9mRNA转录本相对丰度低于大卵泡颗粒细胞(P0.01),而中卵泡颗粒细胞内Smad9 mRNA转录本相对丰度低于小卵泡(P0.05);中卵泡和小卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白的表达量低于大卵泡(P0.01),中卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白表达量是小卵泡的0.9倍(P0.05)。综上,Smad9主要在牛卵泡颗粒细胞层中表达,且大卵泡表达量极显著高于小卵泡和中卵泡。