新疆部分地区牛病毒性腹泻病毒的分离、鉴定及分子流行病学调查

【目的】了解新疆地区牛病毒性腹泻(BVD)的流行状况,【方法】采用RT-PCR方法对从新疆16个不同地区采集的样品进行BVD病毒5'-UTR扩增,对扩增出的序列进行测序,构建系统遗传进化树和遗传变异分析。【结果】566份样品中,扩增出21份阳性样品,平均阳性率为3.71℅。通过对分离株序列的同源性比对分析,17株为BVDVI型,4株为BVDVⅡ型。经对PCR扩增阳性样品进行细胞传代,有7株为致细胞病变型(CP),14株为非致细胞病变型(NCP)毒株,所测得的病毒滴度为1.04×103~6.02×108TCID50/0.1 m L,21株分离病毒对BVDV阳性血清的中和效价为1:21~1:25。【结论】BVD在新疆地区均不同程度的发生和流行。研究的成果,为BVD的有效防控提供了技术资料。     

新疆昌吉地区鸡大肠杆菌部分菌株分离鉴定及防治研究

从新疆昌吉州地区10个发生疑似大肠杆菌病的商品肉鸡场，无菌采取病鸡、死鸡的心血、肝、脾、肺、肾等组织进行病原菌的分离培养，经过培养特性、形态、染色特性和生化试验，鉴定出21株大肠杆菌，分离株对7日龄雏鸡均具有致病性。从21株致病性大肠杆菌中共鉴定出8种血清型，分别为O1、O3、O6、O36、O88和O103。其中O1、O2和O78为优势血清型，占分离菌株的77．39％。采用13种常用抗菌药物进行药敏试验，四种药物敏感率在90％以上。但21个分离菌株均具有多重抗药性，至少可以抵抗6种以上抗攻药物的杀菌或抑菌作用，而且同一血清型的菌株其药物的敏感性也不同。在药敏试验基础上，选用敏感药物采用不同方案对5个发生大肠杆菌病的鸡场进行了临床治疗试验，取得了良好的使用效果，治愈率达到94％以上。为建立该地区鸡大肠杆菌病的药物防治模式奠定了基础。     

马鹿产气荚膜梭菌性肠炎的诊治

新疆乌鲁木齐市某养殖场饲养的天山马鹿，突然发病，主要症状为体温升高至41℃，便血，血尿，1周内死亡6只。通过更换饲料，环境消毒，注射抗生素及胃肠机能调整治疗，使疫情基本得到控制。报道如下。     

应用聚合酶链反应检测伪狂犬病病毒DNA

选用标准的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株，经ＢＨＫ２１细胞培养，提取ＰＲＶＤＮＡ作为摸板；合成１对２０－ｍｅｒ寡核苷酸作为引物；选择扩增序列由２６２个碱基对组成的位于编码多糖蛋白ｇｐ５０基因，用耐热的Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶经３０个循环以后，扩增的产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明：以ＰＲＶＤＮＡ作为模板进行扩增，有扩增产物生成，以同科的疱疹病毒ＤＮＡ作为模板在相同的条件下进行ＰＣＲ扩增，无扩增产物生成，说明ＰＲＶＰＣＲ扩增是特异的。ＰＣＲ技术检测ＰＲＶＤＮＡ敏感度为２８．５ｐｇ．ＰＲＶＰＣＲ技术的建立，为伪狂犬病诊断和流行病学研究提供了更敏感、可靠的手段。     

增益素对肉鸡抗大肠杆菌感染和促进增重的作用

研究了增益素对肉仔鸡抗致病性大肠杆菌的作用及对肉仔鸡增重的影响。将150只艾维因肉仔鸡随机分成5组,每组30只。1～4组为实验组,5组为对照组。第1、2组鸡在1～14日龄以每天0.2mg/kg体重的量饮水饲喂增益素,第3、4组在1～7日龄以同等量饮水饲喂增益素,所有鸡在7日龄时以3亿/只的含菌量人工感染致病性大肠杆菌。待有发病症状后,第2、3组喂庆大霉素,1、4组不喂庆大霉素,第5组不用增益素也不用庆大霉素,观察各组发病及死亡情况,记录各组鸡的日增重并计算料肉比。结果表明,饲喂增益素后的鸡对致病性大肠杆菌的感染具有一定抵抗力,可降低发病率,还可以促进鸡的生长,增加日增重,从而提高饲料转化率。     

猪流感病毒分离株A/Swine/Fujian/F1/2001(H5N1)表面蛋白基因序列分析

对猪流感病毒株A／swine／Fujian／F1／2001（H5N1）（简称SW／FJ／FI／01）的表面蛋白基因进行序列测定，并与GenBank中的A型流感病毒HSN1亚型毒株参考序列进行比较。遗传进化分析表明，猪流感病毒SW／FJ／F1／01的血凝素基因（HA）和神经氨酸酶基因（NA）均与2000年浙江鸭源毒株A／Duck／zhejiang／52／2000（H5N1）（简称DK／ZJ／52／00）的亲缘关系最近，其HA蛋白的裂解位点为-RRKKR＊G-，受体结合位点226位为Q，228位为G，识别唾液酸α-2，3-半乳糖，与人流感病毒H3亚型的受体结合位点不同，分析表明该病毒来源于禽源流感病毒。     

发酵液中维生素B12检测方法的比较

为建立准确检测发酵液中微量维生素B12的检测方法,采用对照薄层层析法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）以及色谱一质谱联用（LC—MS）检测发酵液中维生素B12的含量。结果表明,TLC和HPLC在检测发酵液中维生素B12时结果误差较大,LC—MS能够精确检测出发酵液中存在的微量的维生素B12。     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2基因的克隆及表达

为了获得副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2分泌性蛋白分子,克隆了该蛋白编码序列,约1 081bp,成功构建pET28a-OmpP2原核表达质粒,并将其转化到大肠埃希菌BL21(DE3)菌株.经0.4 mmol/L终浓度IPTG、32℃诱导5 h后,目的蛋白表达量最高.Western blot检测表明,该蛋白与副猪嗜血杆菌阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白有良好的反应原性,为今后研究OmpP2的生物学特性及对HPS的血清学诊断、亚单位疫苗的开发奠定了基础.     

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒核酸疫苗的构建及其免疫效果研究

为提高牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)核酸疫苗的免疫效力,本实验应用PCR方法扩增BVD病毒(BVDV) E0基因,构建真核表达质粒pVAX1-E0,转染293T细胞,经RT-PCR和western blot分析显示,转染细胞能够瞬时表达E0蛋白.并分别将pVAX1、pVAX1-E0或将pVAX1-E0分别与一种表达细胞因子基因的重组质粒作为佐剂(pVAX1-IL-2、pVAX1-IL-4及pVAX1-IFN-γ)免疫小鼠,采用间接ELISA法检测免疫小鼠BVDV抗体效价,以MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖活性.实验结果表明,与pVAX1-E0相比,接种pVAX1-E0/pVAX1-IL-2小鼠血清E0抗体水平及淋巴细胞增殖水平显著提高(p＜0.01),表明细胞因子基因佐剂IL-2能够有效提高BVDV E0核酸疫苗免疫效果,可以刺激小鼠产生良好的免疫应答.     

牛结核病监测与分析研究

[目的]掌握牛结核病的感染情况及其感染原因,逐步控制包括人在内的结核病的发病率,帮助奶牛养殖业持续健康发展.[方法]2010年下半年对乌鲁木齐周边地区部分牛用“提纯结核菌素皮内变态反应”方法进行了结核病监测.[结果]对监测结果数据进行统计分析显示:此次共监测牛1 052头,其中检出结核阳性牛5头,阳性率为0.47;.[结论]牛结核病零星散发,应做好检疫和扑杀工作.