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41.
布鲁氏菌M5-90△WboA基因缺失株的构建及免疫效果的初步评价 总被引:2,自引:1,他引:1
为获得毒力较弱并能区分自然感染和疫苗免疫的布鲁氏菌候选疫苗株,本研究用PCR方法扩增WboA基因的上下游同源臂序列,构建重组质粒pGEM-7zf-△WboA-Sac,电转化布鲁氏菌M5-90感受态细胞,筛选布鲁氏菌疫苗株M5-90的WboA基因缺失株,并对获得的M5-90△WboA遗传稳定性、毒力、免疫保护性、抗体水平等指标进行检测.实验结果表明M5-90△WboA株的毒力比M5-90株明显减弱,差异极显著(p<0.01),体液免疫和细胞免疫结果表明M5-90△WboA株与亲本M5-90株相比差异不显著(p<0.05),M5-90△WboA株和亲本株的保护率分别为10%和20%,表明M5-90△WboA株与M5-90株具有相似的保护性.凝集试验和western blot试验显示M5-90△WboA株免疫小鼠的血清反应结果为阴性.本研究构建的布鲁氏菌基因缺失株M5-90△WboA具有较好的遗传稳定性,毒力比亲本株更弱,免疫保护性与亲本株相当,并能以血清学检测方法区分野毒株感染和缺失疫苗株免疫的动物. 相似文献
42.
鹅副粘病毒与鹅细小病毒主要免疫原性基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的共表达及其免疫 总被引:1,自引:0,他引:1
根据测得的鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的含F基因的质粒pGF为模板,PCR扩增F基因片段(去除终止密码子),与转座载体pFastBac连接,构建重组质粒pFastBac-F,并进行测序鉴定;根据测得的鹅细小病毒(GPV)GD-01株VP3基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的重组质粒pGVP3为模板,PCR扩增出有Linker的VP3基因(命名为LVP3)。再将重组质粒pFastBac-F与LVP3片段连接,构建重组转座载体pFF-LVP3,转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得重组Bacmid F-L-VP3转染Sf9昆虫细胞,所表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,特异蛋白分子质量约123 000。将表达蛋白免疫雏鹅,经抗体测定证明,表达的F-VP3重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答。 相似文献
43.
嗜水气单胞菌J-1株OmpA融合蛋白的高效表达及免疫原性分析 总被引:3,自引:0,他引:3
以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)J-1株基因组为模板,根据GenBank已发表的嗜水气单胞菌外膜蛋白的基因序列设计1对引物,扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达质粒pET32a(+)中,重组质粒经限制性酶切鉴定后测序。结果表明,插入片段长度为948bp,与NCBI上登录的几个相关序列相比,同源性在93.1%-95%之间,缺失4个氨基酸。将重组原核表达质粒pET32a-OmpA转化至大肠杆菌BL21(DE3),经诱导可表达分子量约57.4kD的蛋白,凝胶薄层扫描显示OmpA在转化菌中表达量占全菌蛋白的50%以上。用兔抗J-1株总外膜蛋白血清进行Western blot,在57.4kD处有明显反应条带。融合蛋白经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后免疫新西兰兔制备抗血清,ELISA效价达1:12800以上。Western blot检测结果显示,该血清与9株具有代表性的气单胞菌的分子量约35kD的外膜蛋白均有较强反应,说明所表达的融合蛋白不仅保持原有外膜蛋白的免疫原性,而且提示OmpA可能是嗜水气单胞菌的共同保护性抗原。[中国水产科学,2008,15(2):301—306] 相似文献
44.
45.
禽大肠杆菌巴氏杆菌融合二联弱毒菌株F4安全性免疫原性研究 总被引:1,自引:1,他引:0
用禽巴氏杆菌C48-1(5∶A)禽大肠杆菌O78的原生质体融合二联弱毒株F4的37℃24h马丁肉汤培养物,以3.45×109~6.90×1010CFU/只的4种不同剂量,分别肌肉注射接种5~40日龄粤黄鸡共216只,观察14d,结果表明F4株对20日龄以上的鸡安全性达100%。F4株的培养物肌注鸡体后4h从肝脏分离,如此连续通过粤黄鸡10代的试验表明,F4株的毒力是稳定的。以F4株的培养物3.45×109CFU/只肌注免疫200只20日龄粤黄鸡,免疫后第14天起每隔2周、直至第12周分别以C48-1、O78标准强毒菌的3×LD50剂量攻击;同时分别制备O78菌的超声粉碎抗原、菌体抗原、荚膜多糖抗原,C48-1菌的超声粉碎抗原、热稳定抗原、荚膜多糖抗原,建立检测血清中抗O78、C48-1的ELISA方法;免疫后每隔1周分别检测免疫鸡血清中的O78、C48-1IgG效价,直至免疫后84d。结果表明:F4株免疫后对O78的免疫保护率为14d50%、28d70%、42d65%、56d50%、84d35%,对C48-1的免疫保护率为14d25%、28d40%、42d75%、56d50%、84d30%。免疫鸡血清中抗O78、抗C48-1的IgG消长曲线均与免疫保护曲线相一致。 相似文献
46.
47.
48.
细粒棘球蚴生发层细胞系可溶性抗原的免疫学及SDS-PAGE分析 总被引:3,自引:0,他引:3
本研究报道了细粒棘球蚴生发展细胞可溶性抗原的免疫学研究结果及SDS-PAGE结果,将原头节可溶性抗原,生发展可溶性抗原,囊液抗原免疫Balb/c小鼠制备抗血清并用原头节人工感染Balb/c小鼠制备阳性鼠血清,再用生发展细胞系可溶性抗原以间接ELISA法进行检测以观察该抗原的反应原性;用pAg,gAg,SHF以及生发展分泌抗在分别对曾反种过细胞系细胞的Balb/c小鼠的血清进行检测,以了解细胞系抗原 相似文献
49.
ST1肠毒素融合蛋白的纯化及部分特性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
用SAephadex G-150凝胶和ED-32离子交换层析,从重组菌PGEMST2株内分离,纯化ST1,肠毒素融合蛋白,回收的ST1肠毒素融合蛋白占细菌总蛋白的31.5%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳条件呈一条蛋白带。ST1肠毒素融合蛋白不溶于甲醇,乳鼠试验阴性。 相似文献
50.
新城疫病毒基因组中F基因的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
新城疫病毒(NDV)的分类位置,据国际病毒分类委员会(ICTV)报告归列于副粘病毒亚科的Avulavirus内,由NP、P、M、F、HN、L等六种基因组成,其中F基因是病毒毒力强弱和免疫原性的主要决定因素之一,是业界研究的热点。 相似文献