鸡传染性支气管炎病毒HN99株血清学和免疫学特性的研究

在鸡胚肾细胞上对HN₉₉株病毒进行了克隆纯化，经检测无外源病原污染。应用血清交叉中和试验确定了IBV HN₉₉株的血清型，并用免疫保护试验进行了验证，结果证明HN₉₉株与T株属同一血清型，与TJ、SD、湖北等地方分离株有一定的相关性。不同免疫剂量的效力试验结果表明用0.2 ml剂量的HN₉₉灭活苗接种试验鸡，能够对HN₉₉攻毒提供100%的保护，证明HN₉₉株具有良好的免疫原性。     

鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验

自疑似大肠杆菌病例中分离到大肠杆菌44株，并对其病原特性进行了研究，结果表明这些菌的生化特性基本一致，与文献报道相符。对此44株大肠杆菌进行血清型鉴定，鉴定出血清型39株，其中O血清型13种，以O₇₈、O₃₅、O₂₄、O₁、O₁₅、O₇₆和O₈₈等7个血清型为主，占定型菌株的84.6%。其中血清型为O₇₈的菌株占定型菌株的38.5%，为优势血清型。用9种抗菌药物（头孢唑啉、庆大霉素、阿米卡星、链霉素、环丙沙星、诺氟沙星、青霉素、妥布霉素、红霉素）进行了药敏试验，结果表明分离菌株呈现出不同程度的耐药性，其中青霉素、红霉素的耐药率最高（均为97.7%），其次是环丙沙星（81.8%），大多数为多重联合耐药；而阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素的敏感率较高，其中以阿米卡星（90.9%）最敏感。     

禽流感病毒CH02株(H9)的鉴定及其NS 基因分子特征分析

从疑似感染H9亚型禽流感病毒的病鸡内脏组织中分离到1株能凝集鸡红细胞的病毒,通过血凝抑制试验、鸡胚中和试验、RT-PCR鉴定,确认其为H9亚型禽流感病毒,并命名为CH02株。该病毒HA效价为2^7.67±0.58;其血凝性可被抗H9亚型禽流感病毒阳性血清完全抑制,HI效价为7log2;鸡胚半数感染量(EID₅₀)为10^-8.68 EID₅₀/0.1 mL;最小致死剂量致鸡胚死亡的平均时间(MDT)为85.6 h;1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0.625;其NS基因与香港株、南京株、北京株、汕头株、韩国株、巴基斯坦株的核苷酸同源性为88.6%~100%,经进化分析CH02株与香港株(A/duck/Hong Kong/Y280/97)同属一个分支。     

淮安地区禽大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

从淮安市及8个区县畜牧兽医站动物门诊部临诊的具有典型大肠杆菌病变的150羽病死禽中,分离鉴定出大肠杆菌112株,定型92株,共测出24个血清型,其中O₁₈（20株）、O₇₈（14株）、O₁（11株）、O₅（10株）4种血清型占定型菌株的59.78%,为淮安地区优势血清型。这一结果为制备菌苗预防大肠杆菌病奠定了基础。药敏试验结果表明,所分离的大肠杆菌对氟喹诺酮类、磺胺类、四环素及青霉素类耐药率较高,对庆大霉素、卡那霉素、头孢噻吩有一定的耐药性,而对头孢噻呋、阿米卡星、奥格门丁、氟苯尼考、磷霉素敏感,其耐药率低于16.3%。     

三聚氰胺等4种物质的毒性比较研究

试验旨在通过细胞毒性试验、急性毒性试验对三聚氰胺及其类似物的毒性进行了初步研究。结果表明,三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺、单氰胺的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为10.11、3.17、22.56、0.305 mg/ml,而三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺的半数致死量（LD₅₀）均大于5000 mg/kg,单氰胺的半数致死量（LD₅₀）小于500 mg/kg。表明三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺为微毒或基本无毒,单氰胺为高毒。     

O通量特征及排放贡献

：２００３年５月－２００４年４月,利用静态箱－气相色谱法对生长季与非生长季三江平原小叶章湿地N₂O 通量特征及排放贡献进行了研究。结果表明,生长季N₂O 呈脉冲式排放,通量介于０．００５～０．１１１ｍｇ／（ｍ^２·ｈ）,５月较低通量与降水较多有关,６月通量骤然增加与冻层融通有关,７－８月与降水少及蒸发旺盛有关,９月与土壤中较多氮有关。N₂O 通量与５ｃｍ 地温呈显著正相关（P＜０．０１）;非生长季N₂O 表现为“吸收－排放”,通量介于－０．００１５～０．０４９７ｍｇ／（ｍ^２·ｈ）。N₂O 通量与气温、土壤融化时间均呈指数关系（P＜０．０１）,说明在冻结期,温度仍是控制微生物活性的主要因素,而在融化期,温度和冻层融通是导致N₂O 通量迅速增加的重要原因。总之,生长季N₂O 排放量为２０５．５４ｍｇN₂O／ｍ^２,为N₂O 的“源”,非生长季N₂O 排放量为－２６．９７ ｍｇN₂O／ｍ^２,为N₂O 的“汇”,全年N₂O 排放量为１７８．５７ｍｇN₂O／ｍ^２,为N₂O 重要释放“源”。     

生长季与非生长季小叶章湿地N2O通量特征及排放贡献

 ：２００３年５月－２００４年４月,利用静态箱－气相色谱法对生长季与非生长季三江平原小叶章湿地N₂O 通量特征及排放贡献进行了研究。结果表明,生长季N₂O 呈脉冲式排放,通量介于０．００５～０．１１１ｍｇ／（ｍ^２·ｈ）,５月较低通量与降水较多有关,６月通量骤然增加与冻层融通有关,７－８月与降水少及蒸发旺盛有关,９月与土壤中较多氮有关。N₂O 通量与５ｃｍ 地温呈显著正相关（P＜０．０１）;非生长季N₂O 表现为“吸收－排放”,通量介于－０．００１５～０．０４９７ｍｇ／（ｍ^２·ｈ）。N₂O 通量与气温、土壤融化时间均呈指数关系（P＜０．０１）,说明在冻结期,温度仍是控制微生物活性的主要因素,而在融化期,温度和冻层融通是导致N₂O 通量迅速增加的重要原因。总之,生长季N₂O 排放量为２０５．５４ｍｇN₂O／ｍ^２,为N₂O 的“源”,非生长季N₂O 排放量为－２６．９７ ｍｇN₂O／ｍ^２,为N₂O 的“汇”,全年N₂O 排放量为１７８．５７ｍｇN₂O／ｍ^２,为N₂O 重要释放“源”。     

H5N1亚型禽流感病毒鸡胚分离株蚀斑克隆及生物学特性比较

建立了H5N1亚型禽流感病毒（AIV）蚀斑克隆方法，用不加中性红的营养琼脂为覆盖层，在倒置显微镜下挑斑，对3株H5N1亚型AIV鸡胚分离毒株进行了蚀斑克隆纯化，从同一鸡胚分离毒株中纯化得到了蚀斑大小和形态均存在显著差异的毒株，共获得13株蚀斑克隆纯化株。研究结果表明，当小牛血清浓度为2%时，加入终浓度50 μg/ml的胰酶可明显促进和刺激蚀斑的形成，蚀斑的直径和PFU/ml均有显著的增加。通过TCID₅₀、EID₅₀和LD₅₀测定发现，来自同一鸡胚分离株的不同蚀斑克隆纯化株中，蚀斑大、毒力强的克隆毒株占优势，而且蚀斑较大的，其毒力也较强。对得到的13株蚀斑克隆毒株的全基因组各片段序列分析表明，蚀斑克隆纯化株在HA蛋白裂解位点附近的氨基酸序列均符合高致病性通报性禽流感病毒的分子特征。     

鸡传染性支气管炎病毒H52株TaqMan-MGB 荧光定量RT-PCR检测方法的建立

本研究建立了一种快速的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H52株定量检测方法,为进一步研究疫苗的效价检测和质量监控新方法奠定基础。针对IBV核蛋白(N)基因,设计特异的H52株荧光定量PCR检测引物和TaqMan-MGB探针,优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验,探讨荧光定量RT-PCR与EID₅₀方法测定病毒含量的相关性,并通过体外转录技术对病毒基因拷贝数进行定量分析。该方法特异性强,与其他禽源病毒均无交叉反应;该方法可检测到5.60×10¹拷贝/μL的病毒核酸,与常规PCR相比,敏感性高10倍;重复性试验的变异系数为0.9%~3.2%;与EID₅₀检测结果的相关系数r＝0.934,两种方法在检测H52株病毒效价上具有很好的相关性。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法,适合于对鸡传染性支气管炎病毒H52株病毒含量的快速定量检测。     

辽宁省禽大肠杆菌血清型分布与大肠杆菌病防治措施研究

以病原菌分离、血清型鉴定及本动物致病性试验对流行于辽宁省致病性禽大肠埃希氏菌的血清型分布、致病性以及用蜂胶苗防治该病进行了研究。2001至2005年从14市的病死禽和死胚中分离出大肠杆菌226株,定型105株,其中078型占29．52％（31／105）;0109型占10．48％（11／105）。结果证明078、0109血清型是流行于本省致病性禽大肠埃希氏菌的绝对优势血清型。致病性试验研究证明,0109型菌对鸡的致病性强于01、02、078居第一位。用2001年分离的优势菌株的11个血清型大肠杆菌蜂胶苗和大肠杆菌新城疫二联蜂胶苗对鸡免疫,从2005年分离的优势菌株中选078、0109、01、0142、093型菌分别以致死量进行攻毒,保护率均达100％。免疫鸡与发病鸡同居感染试验,100％健康存活。     

H9N2亚型禽流感病毒抗原性变异的研究

对1998—2002年间在河南省豫北地区分离到的5株H9N2亚型禽流感病毒的抗原性变异进行了研究。经HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验及攻毒保护试验证明，5株H9N2亚型间已经发生了抗原性漂移。98A5和99S毒株间的保护力接近100％，HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验的相关性均在0．74以上。表明2毒株间的抗原性相近；用00Y毒株攻击其他4株免疫的鸡，其保护率仅为60％～80％；而02Y株对除00Y株外的4株的免疫保护率分别为60％、75％、80％、100％，与分离年代呈负相关性，HI、鸡胚中和试验、细胞中和试验也取得类似结果，说明2000年后的毒株间已发生抗原性变异。     

水牛生长性能研究

 对摩本杂F₁水牛在昆明小哨的全放牧条件下3年的生长性能进行研究，结果表明：初生体重平均36.40 kg，成年牛平均体重558.90 kg。     

禽大肠杆菌病免疫保护机理的研究

以禽病原性大肠杆菌O18、O78分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫14日龄鸡，以相同或不同外膜蛋白型（Outer membrane protein pattern,OMP型）的O18、O78分离株攻毒。结果表明：O78血清相同和不同OMP型分离株间能获得最大保护；O18血清型相同OMP型分离株间获得最大保护，而不同OMP型分离株间不能保护；上述两个血清型的分离株间不论OMP型是否相同，均缺乏保护。以间接ELISA试验、间接血凝试验分别测定了试验鸡临攻毒前针对大肠杆菌OMPs和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS）的抗体。结果表明：免疫组鸡血清上述两种抗体明显高于攻毒对照组；在免疫组，存活鸡临攻毒前血清中上述两种抗体滴度恒高于死亡鸡，但除3个组外，多数组差异不显著。攻毒对照组这一关系不稳定。结果说明：禽大肠杆菌疫苗的免疫保护，主要与O血清型有关，部分与OMP型有关，如O18分离株，免疫保护性抗原含OMPs,LPS等多个抗原表位。     

猪卵母细胞的体外成熟影响因素的研究

本试验研究了猪卵母细胞的体外成熟体系，着重研究了季节因素、FCS、pFF、胰岛素和17β-E₂对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①3月~4月和10月~11月卵母细胞成熟率最高，与其它月份相比差异显著（P<0.05）；②卵泡期卵母细胞成熟率和卵裂率均显著高于黄体期；③添加10%FCS、10% pFF、20% FCS和10% FCS+10% pFF的卵裂率差异不显著（P>0.05），添加10% FCS或10% pFF的成熟率差异不显著，与添加20% FCS或10% FCS+10% pFF成熟率差异显著；④培养液中添加一定量的胰岛素和17β-E₂有助于提高成熟率和卵裂率。     

鸡传染性支气管炎病毒山西地方分离株的血清学分析

应用病毒感染的鸡胚材料免疫兔的方法制备抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单因子血清,然后在鸡胚上对山西分离的6个毒株和6个参考株进行交叉病毒中和试验。结果显示,这6株病毒与参考毒株不属于同种血清型,但分离株之间存在部分交叉免疫保护,证实了鸡传染性支气管炎病毒毒株在山西地区存在变异。     

鸭肝炎病毒A66株部分cDNA文库的构建与序列分析

本研究根据已发表的小核糖核酸病毒（picornavirus）核苷酸序列设计4对引物。以RNAiso Reagent试剂抽提含DHV A₆₆鸡胚尿囊液总RNA ，用TakaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver3.0试剂盒进行RT-PCR扩增，将所得PCR产物回收并克隆于pMD18-T 载体、转化感受态细菌DH5а，利用氨苄青霉素筛选阳性克隆子, 经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切鉴定重组质粒。取重组阳性质粒进行测序，测序结果与近期GenBank登录的3株Ⅰ型DHV核苷酸序列比对，结果显示与03D株、H株、5886株鸭肝炎病毒的核酸序列同源性分别为96.8%、96.3%、96.2%，表明成功构建了DHV A₆₆ 株部分cDNA文库。     

副鸡嗜血杆菌的分离鉴定及我国鸡传染性鼻炎的流行状况分析

从不同地区免疫失败鸡场的鸡传染性鼻炎疑似鸡体内共分离到19株细菌，经回归试验、PCR等方法鉴定为副鸡嗜血杆菌。又将分离株用血清平板凝集试验、血凝抑制试验和型特异性单抗进行了血清型的鉴定，结果表明分离菌有15株为A型，4株为B型，说明我国鸡传染性鼻炎的流行已经出现了新的特点，在疾病预防和控制中应加以注意。另外大多数鸡场的免疫失败是由于免疫效果不良所致，但也有相当一部分鸡场的免疫失败是由于B血清型的出现引起的。     

滨海地区鸡致病性大肠埃希菌的分离鉴定

为了控制滨海地区鸡大肠埃希菌病的发生,对大肠埃希菌污染严重的部分鸡场进行了病原分离培养、血清型鉴定以及田间试验.结果表明,14株分离菌中有11株属于大肠埃希菌;分离株血清型主要有O78、O24、O93和O11 4种;免疫保护试验使大肠埃希菌病死率降低了6％.     

胁迫下星星草幼苗叶片电解质外渗率与PSⅡ光能耗散的关系

用荧光动力学的方法探讨Ｎａ_２ＣＯ_３ 胁迫下星星草幼苗叶片电解质外渗率与ＰＳⅡ 光能耗散的关系。结果表明,随着星星草幼苗叶片电解质外渗率的增大,ＰＳⅡ 的最大光化学效率（Fu／Fm）和潜在光化学效率（Fv／Fo）呈逐渐减小的趋势。同时,当电解质外渗率小于０．２时,ＰＳⅡ 实际光化学效率（ΦＰＳⅡ）、电子传递速率（ＥＴＲ）、光化学淬灭系数（qP）、光化学速率（ＰＲ）、捕光色素的光能被用于热耗散的相对份额（ＨＤ）、热耗散速率（ＨＤＲ）都随着电解质外渗率的增大而增大;而当电解质外渗率超过０．２ 时,ＰＳⅡ 实际光化学效率（ΦＰＳⅡ）、电子传递速率（ＥＴＲ）、光化学淬灭系数（qP）、光化学速率（ＰＲ）却随着电解质外渗率的增大而减小。另一方面,电解质外渗率在小于０．１５时,非光化学淬灭系数（qNP）一直在增加,但是当电解质外渗率超过０．１５时,qNP却减少。本试验结果说明当电解质外渗率在一定范围内,星星草通过增加热耗散以及增加捕光色素吸收的光能被用于热耗散的相对份额（ＨＤ）和热耗散速率（ＨＤＲ）来改善ＰＳⅡ的功能,由此引起的活性氧增加则由体内较高的保护酶来清除,若超过了一定阈值则抑制了ＰＳⅡ的功能,或者说ＰＳⅡ系统可能遭受了不可逆损伤。     

评价传染性鼻炎疫苗保护效力的“金标准”

传染性鼻炎是鸡的一种呼吸道疾病,多种日龄的鸡群都会发病。墨西哥和澳大利亚的科研人员对免疫传染性鼻炎疫苗鸡群的HI抗体水平与疫苗保护效力之间的关系进行了研究。其中一个试验,试验鸡群分别免疫墨西哥分离株Hpg6制备的单价疫苗以及包含鸡副嗜血杆菌A、B、C3个血清型的油佐剂多价疫苗,免疫后11周出现了显著的保护水平。另一个试验中,鸡群分别在4周龄和12周龄免疫Hpg6株疫苗,