新型鸭呼肠孤病毒DH13株结构蛋白σB的原核表达及免疫原性分析

本研究旨在利用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒（NDRV） DH13株重组σB蛋白,并检测其免疫原性,为NDRV基因工程疫苗研制等提供物质材料。采用RT-PCR方法扩增获得NDRV σB基因,构建原核表达重组质粒pET-30a-σB和pET-32a-σB,将2个重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白,通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式。纯化无His的σB蛋白,并以此蛋白作为免疫原免疫新西兰白兔,制备兔源多克隆抗体。利用Ni²⁺柱亲和层析法纯化含His的σB蛋白,以此蛋白作为检测原,通过间接ELISA方法测定兔源多克隆抗体效价;Western blotting鉴定多克隆抗体与重组蛋白的特异性识别能力。结果显示,PCR扩增获得大小约为1 100 bp的σB基因片段。SDS-PAGE结果显示,高效表达出了2种重组σB蛋白,大小分别约为41和46 ku,均以包涵体形式存在。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶204 800,能特异性地识别原核表达的重组蛋白,表明重组无His的σB蛋白具有良好的免疫原性。Western blotting特异性鉴定结果显示,含His的σB蛋白和无His的σB蛋白均与制备的兔源多克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达得到的重组σB蛋白具备良好的反应原性。本试验利用原核表达系统成功地表达出了重组σB蛋白,并证实了重组NDRV σB蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该结果将有助于后续对NDRV σB蛋白生物学功能的鉴定、NDRV诊断用抗原的制备及NDRV新型疫苗的研制。     

副猪嗜血杆菌D15蛋白的原核表达及免疫原性分析

为了对副猪嗜血杆菌D15蛋白进行原核表达,本试验通过PCR方法扩增D15基因,之后将其克隆入pET-28a(+)载体构建重组质粒,再将重组质粒转化BL21 (DE3)感受态中,使用0.5mM 部PTG经20℃诱导表达了52Ku的D15重组蛋白.经Western blot试验证明D15重组蛋白具有较高的免疫原性,免疫4周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA试验表明制备的血清效价在1∶20000以上,表明D15蛋白具有良好的免疫原性.     

猪链球菌疫苗研究进展

猪链球菌为革兰氏阳性菌,是一种能够引起人和多种动物发病的重要人畜共患病病原。猪链球菌病分布广泛,英国于1954年最早报道该病,此后在养猪业发达的其他国家均有发生。我国最早由吴硕显(1949年)报道,在上海郊区发现本病散发病例。1963年在广西部分地区开始流行,继之蔓延开来。1968年丹麦首次报道了人感染猪链球菌2型导致脑膜炎,1998年、2005年分别在我国江苏省海安县和四川省资阳市暴发猪链球菌病,这两     

柔嫩艾美尔球虫早熟减毒株的免疫原性研究

以柔嫩艾美尔球虫早熟减毒株对鸡免疫两次,效果与5ppm的马杜拉霉素相当,证明该虫株免疫原性良好,在二次免疫的情况下,可不必依赖垫料中卵囊的再循环。     

酶标SPA在鸭病毒性肝炎免疫检测上的应用研究

在酶标ＳＰＡ（金色葡萄球菌Ａ蛋白）的Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓａｙ（免疫斑点试验）中，ＳＰＡ能与鸭血清中ＩｇＧ分子Ｆｃ段结合。这一点，在国内外尚未见报道。用酶标ＳＰＡ的Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ ＥＬＩＳＡ及鸡胚中和试验，分别对ＤＨＶ（鸭肝炎病毒）Ａ毒株、及已知的Ｉ型ＤＨＶＲ毒株，进行交叉试验的结果一致。该试验以及病毒粒子的电镜观察，进一步表明，我们培育的优     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的重组腺病毒的构建及其免疫原性分析

【目的】 利用腺病毒AdMax系统表达载体表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）核衣壳蛋白（nucleocapsid protein）,并研究其免疫原性。【方法】 参考GenBank中已公布的PRRSV N基因序列（登录号：KT945017.1）,人工合成PRRSV N基因,并将其连接至腺病毒穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建重组穿梭质粒pDC316-N。将重组穿梭质粒pDC316-N与AdMax腺病毒系统的骨架质粒PBHGLOX （delta） E1,3Cre共同转染293A细胞,获得重组腺病毒rAd-N,对获得的重组腺病毒液进行PCR和测序鉴定,用鉴定正确的rAd-N病毒液感染293A细胞,对该重组腺病毒进行扩大培养,检测病毒的TCID₅₀,并用RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的表达和反应原性。用重组腺病毒免疫小鼠,收集血清用PRRSV抗体检测试剂盒检测其抗体水平,初步评价其对小鼠的免疫效果。【结果】 PCR扩增出1条大小为400 bp的PRRSV N基因条带,测序结果正确,表明重组腺病毒构建成功,浓缩后测得其半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）为10^-10.239。RT-PCR和Western blotting检测结果证实目的基因在基因和蛋白水平上均可得到正确表达,蛋白分子质量约为14 ku。小鼠特异性抗体检测表明,重组腺病毒rAd-N免疫小鼠后可使小鼠快速产生PRRSV特异性抗体,与对照组差异显著（P<0.05）,其中重组腺病毒与Gel佐剂配合使用时效果最好,最高可达7.84 U/L。【结论】 本研究成功构建表达PRRSV N蛋白的重组腺病毒,其具有良好的免疫原性,为建立针对PRRSV抗体的间接ELISA检测方法和进一步研发PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。     

大豆抗原蛋白的组成及其致敏作用机理

本文综述了大豆抗原蛋白的分类、组成和特征,以及大豆球蛋白与β -伴大豆球蛋白可能的致敏作用机理.     

猪流感病毒多表位融合蛋白对小鼠的免疫原性分析

作者拟利用表位多肽的抗原性及黏膜佐剂免疫增强作用,设计可通过黏膜途径免疫接种的猪流感病毒通用型疫苗.体外合成H1N1、H3N2亚型猪流感病毒表位抗原基因,C末端串联大肠杆菌热敏性肠毒素LTb基因,构建pET30(a)-ep-LTb表达载体,利用SDS-PAGE、Western blot分析重组融合蛋白表达及生物学特性,小鼠免疫试验分析融合蛋白免疫原性.SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量约38 ku,主要以包涵体形式存在.重组蛋白可与抗His-tag抗体和CTB抗体发生特异性反应.ELISA及HI试验检测,经黏膜途径免疫的小鼠产生了针对重组表位模拟抗原蛋白及H1N1、H3N2亚型猪流感病毒的血清抗体及局部黏膜分泌型IgA抗体.利用猪流感病毒表位抗原与LTb基因串连获得的融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,且在黏膜接种局部产生理想的分泌型IgA抗体,能有效阻断病原由黏膜局部感染,为研制猪流感病毒通用型疫苗奠定了基础.     

基因疫苗免疫佐剂的研究进展

随着基因疫苗深入的研究,推动了用于提高基因疫苗免疫效果的免疫佐剂的研究.免疫佐剂不仅可以增强抗原的免疫原性而且还可以提高免疫效果,研究人员正不断地积极探索寻找新型免疫佐剂,以适应时代需求,现将近几年来基因疫苗免疫佐剂研究进展做一下概述,并简要的分析了研究新型免疫佐剂的存在问题、安全性、研究意义和未来发展前景.     

HSV-2gD融合gB CTL表位重组蛋白的原核表达及免疫原性评价

为研制具有较强细胞免疫作用的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)疫苗,将HSV-2糖蛋白D(gD)序列与糖蛋白B(gB)上两种CTL表位序列连接,人工合成重组基因gD-gBCTL,通过PCR扩增,将其克隆后连接至原核表达栽体pET-22b(+),构建重组基因表达质粒pET-22b(+)-gD-gBCTL,转化E.coli B...