猪流感病毒多表位融合蛋白对小鼠的免疫原性分析

作者拟利用表位多肽的抗原性及黏膜佐剂免疫增强作用,设计可通过黏膜途径免疫接种的猪流感病毒通用型疫苗.体外合成H1N1、H3N2亚型猪流感病毒表位抗原基因,C末端串联大肠杆菌热敏性肠毒素LTb基因,构建pET30(a)-ep-LTb表达载体,利用SDS-PAGE、Western blot分析重组融合蛋白表达及生物学特性,小鼠免疫试验分析融合蛋白免疫原性.SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量约38 ku,主要以包涵体形式存在.重组蛋白可与抗His-tag抗体和CTB抗体发生特异性反应.ELISA及HI试验检测,经黏膜途径免疫的小鼠产生了针对重组表位模拟抗原蛋白及H1N1、H3N2亚型猪流感病毒的血清抗体及局部黏膜分泌型IgA抗体.利用猪流感病毒表位抗原与LTb基因串连获得的融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,且在黏膜接种局部产生理想的分泌型IgA抗体,能有效阻断病原由黏膜局部感染,为研制猪流感病毒通用型疫苗奠定了基础.     

猪流感病毒表位抗原设计与串联表达策略

兽用疫苗的研发,一方面已经从传统减毒的或灭活的病原微生物发展到基因重组疫苗、亚单位疫苗、表位疫苗,从传统的病原学发展到细胞、分子乃核酸水平;另一方面,疫苗的功能已从单一的预防作用发展为预防性疫苗及治疗性疫苗。对疫苗进行设计与优化,已发展成为一门独立的新兴学科。新型疫苗的设计与研制,需要的是庞大的生物信息,如基因组学、蛋白组学、核酸与蛋白相互作用等信息。随着生物信息学的迅猛发展,计算机分析与生物学技术结合得越来越紧密,为生物疫苗设计提供了技术平台。2000年,Hagmann在《Science》上率先提出了“计算机辅助疫苗设…     

猪流感病毒分离株的特性及致病性

为了解猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)分离株A/Sw/SH/1/2007(H1N2)的特性,对毒株的抗原位点、受体位点、潜在糖基化位点进行比较分析,并进行雏鸡、小鼠致病性试验.结果表明,A/Sw/SH/1/2007与北美经典株A/Sw/Tennes/1455/1977(H1N1) HA抗原位点最接近,HA1蛋白4个抗原位点中只有Ca位点有2个氨基酸改变,发生抗原变异,Sa、Cb抗原位点均只有1个氨基酸发生改变,不影响其抗原性;受体位点高度保守,只有183位发生改变;A/Sw/SH 1/2007有6个潜在的糖基化位点,在276位丢失了1个潜在的糖基化位点,但同时在274位出现了1个新的糖基化位点.NA蛋白抗原位点序列与广西分离株A/Sw Guangxi/13/2006(H1N2)同源性最高,除401位氨基酸发生G→R改变外,其余抗原位点均保守.耐药性分析显示,该病毒对金刚烷胺、扎那米韦药物均敏感.致病性试验结果表明,A/Sw/SH/1/2007对雏鸡无致病性,ICPI为0;肌注小鼠2周内死亡100％,滴鼻小鼠死亡80％,存活小鼠血凝效价为27,而与经典H1N1亚型SIV毒株只有较低的交叉凝集,HI为2 3.4～3.6.     

大肠杆菌不耐热肠毒素突变体免疫佐剂活性研究

黏膜是病原体人侵的主要门户,黏膜表面有高度集中的淋巴组织,一个黏膜部位的免疫反应可以诱发所有黏膜效应组织免疫反应的出现。黏膜免疫还可以诱导全身免疫应答,是目前疫苗研究的新方向。但多数通过黏膜途径免疫的可溶性蛋白免疫原性都很弱,而且通过口服或滴鼻免疫还可能引起特异性免疫耐受,因此黏膜免疫中使用合适的佐剂以提高免疫原性和降低免疫耐受成为主要手段。大肠杆菌热敏性肠毒素（LT）是目前比较有发展前景的佐剂之一。     

多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型

根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。