猪流行性腹泻病毒Nsp5基因的原核表达及生物信息学分析

旨在对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)Nsp5基因进行原核表达,利用生物信息学软件,预测其编码蛋白的结构和功能,为了解PEDV致病机理奠定基础。本研究克隆PEDV/LY/2014/04毒株的Nsp5基因,亚克隆进pET-28a(+)原核表达载体,PCR和酶切验证重组质粒的构建,重组质粒pET-28a(+)-Nsp5转入E.coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE检测Nsp5的表达和His band Ni+纯化情况,Vector NTI Advance等软件对Nsp5蛋白氨基酸组成、抗原表位、二级和三级结构进行预测和分析。结果表明,成功克隆并构建了重组质粒pET-28a(+)-Nsp5,表达重组蛋白大小约22 ku,且主要以包涵体形式存在,His band Ni+纯化后获得高纯度重组蛋白。Nsp5蛋白是由196个氨基酸残基组成的多肽,其分子质量的理论值为21 820.07 u,理论等电点(pI)为8.734,略偏碱;二级结构骨架中α-螺旋(h)占55.61%,β-折叠(t)占7.65%,无规则卷曲(c)占20.92%,延伸链(e)占15.82%;Nsp5蛋白质的三级结构中,中间段以α-螺旋为主作为骨架,C端多个复杂二级结构构成该蛋白的酶活性中心;B细胞抗原表位的预测,表明有15个潜在的B细胞优势表位。本研究为猪流行性腹泻病毒Nsp5蛋白质的生物学功能相关研究提供数据支持。     

猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株侵染Vero细胞特性分析

为了探究PEDV(猪流行性腹泻病毒)流行毒株SHpd/2012侵染细胞的特性,研究采用IFA(间接免疫荧光)及绘制病毒一步生长曲线等方法,对感染PEDVSHpd/2012株后的Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)病变过程进行研究。结果发现,CPE(细胞病变)主要表现为细胞肿胀、变圆、皱缩、聚集成合胞体甚至从培养瓶壁大量脱落。IFA结果显示,接毒后12h病毒开始增殖,在接毒后36h时感染细胞数量最多,其后病毒增殖速度逐步下降,60h时趋于平稳。病毒一步生长曲线结果显示,SHpd/2012株感染细胞后24~60h的毒价一直处于较高水平,60h后开始下降。此外,本研究成功克隆并真核表达了PEDV S蛋白,为研究PEDV与受体蛋白的互作及病毒的致病机制奠定基础。     

益生菌对肠内营养治疗并发腹泻的调节作用

为研究益生菌对行肠内营养治疗患者肠道适应性的调节作用,采用随机数表将157 例患者分为研究组（n＝101）和对照组（n＝56）,进行双盲、随机对照研究。根据Harris-Benedict公式测算基础能量消耗,氮供给量0.2 g/（kg?d）,研究组给予肠内营养＋益生菌,对照组给予肠内营养,治疗期10 d。统计患者的基础人口学资料及临床信息,于肠内营养治疗前和治疗后第10天观察并记录患者的体质量、体质量指数等指标,评价肠道及肾脏等重要脏器的营养代谢状况。结果表明：肠内营养治疗后第10天,2 组患者的营养不良     

猪流行性腹泻病毒研究进展

猪流行性腹泻病毒是引起猪腹泻的重要病原体之一,广泛流行于世界各地,造成了重大的经济损失。文章阐述了猪流行性腹泻病毒的分子生物学特点,概括了病毒的检测方法,并对近年来流行病学及疫苗的研发情况进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒研究提供帮助。     

大黄体外抗猪流行性腹泻病毒的研究

为研究大黄对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染所引起的细胞病变的抑制作用及其机理,本试验采用形态学观察法测定大黄溶液在Vero细胞上的最大安全浓度,建立体外病毒感染Vero细胞模型并利用该模型进行了大黄对病毒抑制作用的研究。结果显示,本试验成功建立了体外病毒感染模型和大黄的抗病毒试验方法;大黄在Vero细胞上的最大安全浓度为3.28 mg/mL;形态学观察法和MTT法均显示大黄不仅能阻断病毒吸附Vero细胞,抑制病毒的合成复制,还可直接灭活病毒。本研究结果表明,大黄具有抗PEDV的作用,为临床上预防和治疗猪流行性腹泻(PED)提供理论基础。     

断奶仔猪腹泻病因分析

为了解云南省断奶仔猪腹泻的致病性原因,通过对30个发生断奶仔猪腹泻猪场的210份粪便、60份饮用水,总计270份样品,进行病毒及致病性细菌分析。研究结果表明,致病性大肠杆菌严重污染饮用水,致病性大肠杆菌在饮用水中检出40株,阳性率为66.7%,粪便中检出100株,阳性率47.6%;致病性沙门氏菌在饮用水中检出10株,阳性率为16.7%,粪便中检出24株,阳性率为11.4%,均对亚胺培南敏感。在粪便中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirous type 2,PCV2)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)及猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)的PCR扩增阳性率为5.2%~13.0%,在饮用水中未检出。通过对云南省断奶仔猪腹泻进行病因分析,了解断奶仔猪腹泻的具体原因,本试验结果为从病因入手防制该病提供更合理、更切合实际情况的理论依据与试验参考。     

仔猪断奶腹泻大肠杆菌鉴定及其血清型分析

从浙江省规模化猪场采集仔猪断奶腹泻病料,经细菌分离纯化、G染色、生化试验和小鼠致病性试验等,鉴定得到56株病原性大肠杆菌。通过11种主要致病性大肠埃希氏菌O抗原的血清型鉴定,56株致病性大肠杆菌中定型了33株,共覆盖了11种血清型,其中O149、O139、O8为优势血清型,共17株,占定型菌株的51.52%。通过棉籽糖发酵试验、甘露糖血凝抵抗试验(MRHA)和血凝抑制试验(MRHI),确定37株为K88,占66.07%(其中K88ab有8株,占K88菌株的21.62%),其余的未能定型。这些血清型与已报道的常见血清型间存在一定差异。     

新疆部分地区犊牛腹泻病大肠杆菌的分离、鉴定与血清型分析

[目的]为新疆犊牛腹泻病的预防提供理论依据.犊牛腹泻多是1月龄以内的犊牛出现一种以消化不良、腹泻为主要症状的消化道疾病,是造成犊牛死亡的主要疾病之一,同时引起犊牛腹泻的细菌种类不同,细菌的血清型也可能存在着地区差异型.[方法]选取新疆四个地方犊牛腹泻的粪便69份,进行细菌常规分离鉴定和血清型鉴定分析.[结果]大肠杆菌99株,沙门氏菌45株,克雷伯菌39株及未鉴定菌株20株.同时对分离的99株大肠杆菌进行血清型诊断和分析多为:O55、O44、O86和O125.[结论]新疆部分地区引起犊牛腹泻的病原菌和大肠杆菌优势血清型均存在地域性差异,为该不同地区犊牛腹泻防治提供理论依据.     

不同蛋白和锌水平对早期断奶仔猪结肠蛋白质腐败产物和腹泻的影响

采用2×2因子设计(蛋白水平23%或17%,ZnO100mg/kg或3000mg/kg),选用21日龄断奶的杜长大三元杂交猪32头,体质量(6.3±0.4)kg,随机分为4组,每组设4个重复,每个重复2头猪,试验期4周。试验结束后,从每个重复中随机挑选1头试猪进行屠宰,收集结肠内容物。结果表明,玉米-豆粕型基础日粮中添加3000mg/kg饲料级ZnO,对高蛋白诱发的高腹泻发生率有极显著的抑制作用(P0.01),这可能是由于高锌可明显降低结肠内容物挥发性盐基氮和氨氮含量(P0.01),显著提高高蛋白日粮的胰蛋白酶(P0.05)、胃蛋白酶活性(P0.05)和CP表观消化率(P0.05)所致。     

欧美牛病毒性腹泻防控措施及对我国的启示

牛病毒性腹泻是牛的重要疫病,导致产奶量下降、肉产量降低、繁殖障碍、生长迟缓、继发其他病原几率增加甚至死亡等,给养牛业造成较大的经济损失。欧美国家在牛病毒性腹泻防控方面形成了一套行之有效的方法,有效地控制并逐步根除了BVD。借鉴欧美牛病毒性腹泻防控策略可对我国该病的防制提供一定的指导。