2018-2020年中国部分省市猪流行性腹泻病毒S1基因的监测及遗传变异分析

【目的】 调查中国规模化猪场猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行情况。【方法】 利用RT-PCR检测方法对2018-2020年采集于全国11个省市318个规模化猪场的2 391份样品进行PEDV核酸检测,对30份阳性样品进行S1全基因扩增与测序,并利用MegAlign、Mega 7.0等软件进行分析。【结果】 2018-2020年,猪场PEDV核酸阳性率分别为48.57%、10.96%和4.72%,样品PEDV核酸阳性率分别为28.97%、8.27%和7.50%,猪场和样品PEDV核酸阳性率呈现逐年下降的趋势。S1基因相似性分析显示,获得的30株毒株全部为GⅡ基因型,其中17株毒株为GⅡa基因亚型、5株毒株为GⅡb亚型、8株毒株为GⅡc亚型,GⅡa基因亚型毒株为2018-2020年流行的主要毒株类型;30株毒株S1基因序列之间核苷酸相似性为93.0%~99.5%, 氨基酸相似性为91.7%~100%,其中22株毒株与2017-2018年流行的GⅡ基因型毒株相比S1氨基酸序列表现出特征性插入和缺失。【结论】 本研究结果为监测和分析中国PEDV的变异和演化提供了临床数据,为猪流行性腹泻防控和疫苗研制提供了参考。     

牛病毒性腹泻/黏膜病(1型+2型)、牛传染性鼻气管炎、牛副流感(3型)三联灭活疫苗(E2蛋白+C1株+HB01株)的研制与免疫效果评价

采用CHO细胞表达牛病毒性腹泻/黏膜病病毒1型（BVDV1）E2蛋白,采用杆状病毒重组表达牛病毒性腹泻/黏膜病病毒2型（BVDV2）E2蛋白,采用MDBK细胞微载体悬浮培养技术培养牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛副流感病毒3型（BPIV3）,收获蛋白表达产物和细胞培养物,经纯化、灭活后与605佐剂混合,制备牛病毒性腹泻/黏膜病(1型+2型)、牛传染性鼻气管炎、牛副流感(3型)三联灭活疫苗(E2蛋白+C1株+HB01株)。将疫苗免疫健康易感牛进行免疫效果评价,结果表明该产品免疫效果良好,免疫牛IBRV和BPIV3中和抗体效价均可达到1∶77以上;BVDV1和BVDV2 E2蛋白琼扩抗体效价均可达到1∶32以上;免疫牛攻毒保护率均可达到4/5以上。     

猪流行性腹泻病毒S2基因B细胞表位的筛选及其单克隆抗体的制备与鉴定

目的 应用生物学软件与单克隆抗体技术相结合的方法鉴定PEDV S2基因B细胞表位肽。方法 利用CLC Sequence viewer 6.8软件及在线数据库IEDB筛选出PEDV S2基因B细胞表位,并人工合成表位肽。将表位肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）耦联后作为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,通过ELISA法筛选出抗体效价较高的小鼠进行1次加强免疫,3 d后取脾脏制备脾细胞悬液进行细胞融合。经HAT选择培养基培养筛选有效杂交瘤细胞,采用ELISA法筛选阳性克隆继续进行扩大培养。将部分阳性杂交瘤细胞进行小鼠腹腔注射,并收集腹水。通过ELISA方法分别检测小鼠腹水和单克隆细胞株培养上清液抗体效价,确定最高效价作为后备细胞株。结果 筛选出B细胞表位肽序列为:MQYVYTPTYYML;免疫多肽抗原后融合前血清抗体效价达到1:2 000;BALB/c小鼠腹水及单克隆细胞株培养物上清液ELISA检测结果显示抗体效价达到1:4 000。结论 筛选出了PEDV S2基因B细胞表位,为PEDV表位肽疫苗载体构建研究提供参考。     

青海省牛传染性鼻气管炎及病毒性腹泻黏膜病血清学调查

从青海省互助、玛多、海晏、玉树、贵德、德令哈、共和等14个地区采集牛血清样品420份,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）调查了青海省牛传染性鼻气管炎和病毒性腹泻黏膜病的感染情况。结果在被检牛血清420份样品中,共检出阳性血清样品228份,平均阳性率为50.67%（228/420）;在被检牦牛血清180份样品中,共检出阳性血清样品1份,平均阳性率0.56%（1/180）。     

益生素及其在防治仔猪腹泻中的应用

抗生素的耐药性以及药物残留问题引发了人们对新型饲料添加剂的研究,益生素为人们解决这一问题带来了希望。文章就益生素及其对仔猪腹泻的防治进行了综述,首先阐述了益生素的特点、分类和组成成分以及作用机理,然后介绍了引起仔猪腹泻的各种因素,进而分析了益生素如何能够降低仔猪腹泻,维护仔猪肠道健康。     

猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌抗M蛋白MAb.MAb亚类鉴定为IgG2b型,轻链为к链,杂交瘤细胞培养上清和诱导的小鼠腹水抗体效价分别为1:3000和1:2×105.Western blot试验表明该MAb能够识别重组及天然的PEDV M蛋白.间接免疫荧光试验表明该MAb能够与PEDV感染的Vero E6细胞产生特异性免疫荧光.     

Development of a novel diagnostic test for detection of bovine viral diarrhea persistently infected animals using hair

The purpose of this study was to determine whether manually plucked hairs might serve as an alternative sample for a quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) testing. Twenty three, 1~3 week old, non-bovine viral diarrhea virus (BVDV) vaccinated calves, found to be positive for BVDV by immunohistochemical staining, were selected and hairs were manually plucked from the ear. qRT-PCR was performed on samples consisting of more than 30 hairs (30~100) and whole blood. All 23 animals were positive for the virus by qRT-PCR performed on the whole blood and when samples of more than 30 hairs were assayed. Additionally, qRT-PCR was performed on groups of 10 and 20 hairs harvested from 7 out of 23 immunohistochemical staining-positive calves. When groups of 20 and 10 hairs were tested, 6 and 4 animals, respectively, were positive for the virus.     

女贞枸杞散预防断奶仔猪腹泻效果和对血液白细胞数的影响

为探讨以女贞子、枸杞子、穿心莲、大青叶等多味中药组成的"女贞枸杞散"对断奶仔猪腹泻的预防效果和对外周血各类白细胞数量的影响。根据体重相近、公母各半的原则选用80头体重为10kg左右的"杜长大"三元杂交断奶仔猪,随机分4组,分别为试验Ⅰ组(日粮中加0.4%"女贞枸杞散"),Ⅱ组(添加0.6%),Ⅲ组(添加0.8%)和对照组(普通日粮)。详细记录仔猪腹泻情况,计算腹泻率、腹泻频率、腹泻指数等。试验结束后采血,测定各类白细胞数量,结果表明,"女贞枸杞散"能有效地降低断奶仔猪的腹泻率,改善仔猪的生长性能,促进血液中的白细胞尤其是淋巴细胞的的生成,提高机体免疫力。     

重组人乳铁蛋白对断奶仔猪生产性能及血清生化指标的影响

【目的】研究重组人乳铁蛋白对断奶仔猪生长性能及血液生化指标的影响。【方法】选取 28 日 龄,体重均匀的断奶仔猪 180 头,试验设 6 个处理,每个处理 3 次重复,每个重复 10 头仔猪（公母各半）。A 处理饲喂基础日粮,作为对照;B 处理添加抗生素,在基础日粮中添加 1 g/kg 10% 的杆菌肽锌 +200 mg/kg 10% 的抗敌素;C、D、E、F 处理在基础日粮基础上分别添加 160、320、480、640 mg/kg 重组人乳铁蛋白。试验为 期 28 d。【结果】（1）试验末重与日均增重 B、C、D、E、F 处理均显著高于 A 处理,日均采食量 B、E 处理 显著高于 A 处理,料重比 B、D、E、F 处理显著低于 A 处理,腹泻指数 B、D、E、F 处理显著低于 A、C 处理。 （2）E 处理血清白蛋白、总蛋白含量显著高于 A 处理,B、E 处理血清尿素氮含量显著低于 A 处理。（3）血 清总抗氧化能力,C、D、E、F 处理显著高于 A 处理。D、F 处理血清谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于 A 处 理,E 处理血清总超氧化物歧化酶活性显著高于 A、B 处理,MDA 浓度 A 处理显著高于 C、D、E、F 处理。【结 论】断奶仔猪日粮中添加重组人乳铁蛋白能提高断奶仔猪生长性能、改善血清生化指标及提高抗氧化能力。 综合试验结果,重组人乳铁蛋白添加量为 480 mg/kg 的效果最好。