动物肠道益生菌抗病毒作用机理的研究

动物肠道益生菌在提高机体免疫力,抑制病原微生物生长,维持肠道微生态平衡,改善机体代谢等方面起着重要作用。随着人们对益生菌的研究不断深入,益生菌的抗病毒功能逐渐被人们所认识,益生菌抗病毒作用机理研究也成为研究的热点。本文对动物肠道益生菌的抗病毒作用机理进行总结概括。     

猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型三重PCR快速诊断试剂盒的研制与应用

为了快速、灵敏、准确的鉴定猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcine parvoviurs,PPV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2),从而为猪病的预防以及诊断提供依据,根据GenBank上发表的核苷酸序列分别设计了三对能特异性扩增PRV、PPV、PCV2的引物,并成功构建了重组质粒作为阳性对照,经过条件优化后建立了检测PRV、PPV、PCV2的三重PCR检测方法,对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保质期进行研究,并进行了初步的临床验证.试验证明,该检测试剂盒能同时扩增出猪伪狂犬病毒219bp的核苷酸片段,猪圆环病毒2型410bp的核苷酸片段以及猪细小病毒71 1bp的核苷酸片段,并通过在PCR缓冲液中添加5％的DMSO和1M的甜菜碱,减少了非特异性扩增,提高了检测试剂盒的灵敏度.该诊断试剂盒为流行病学的研究以及疾病的诊断提供了简单快速的选择.     

大黄体外抗猪流行性腹泻病毒的研究

为研究大黄对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染所引起的细胞病变的抑制作用及其机理,本试验采用形态学观察法测定大黄溶液在Vero细胞上的最大安全浓度,建立体外病毒感染Vero细胞模型并利用该模型进行了大黄对病毒抑制作用的研究。结果显示,本试验成功建立了体外病毒感染模型和大黄的抗病毒试验方法;大黄在Vero细胞上的最大安全浓度为3.28 mg/mL;形态学观察法和MTT法均显示大黄不仅能阻断病毒吸附Vero细胞,抑制病毒的合成复制,还可直接灭活病毒。本研究结果表明,大黄具有抗PEDV的作用,为临床上预防和治疗猪流行性腹泻(PED)提供理论基础。     

猪源植物乳杆菌的诱变选育及其对小鼠免疫性能的影响

To get a Lactobacillus plantarum strain with good acid resistance, cholate tolerance, and in vitro adhesion rate and study its effects on immune function of mice. After screening Lactobacillus plantarum by acid resistance and cholate tolerance after UV mutagenesis, we got BL-15 strain, which was cultured, freeze-dried, dissolved and administered to BALB/c mice orally (gastric perfusion) by three times. Blood, spleen and excrement were collected to detect changes in immune function index.One Lactobacillus plantarum strain BL-15 was selected from 17 mutant strains, with higher acid resistance, cholate tolerance and in vitro adhesion rate. The experimental data of animal tests indicated that IL-2 level and spleen index of mice at early growth stage had been increased. Furthermore, the mice treated with BL-15 as the immunity enhancer revealed higher level of SIgA in intestinal contents compared with control (P<0.05). The results showed that Lactobacillus plantarum strain BL-15 had been proved to be able to elevate immune response and enhance immune function.     

禽流感H9亚型一步法RT-PCR快速检测试剂盒的研制及应用

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的禽流感H9检测方法,本研究根据GenBank中收录的禽流感H9病毒高度保守的基因序列,设计1对H9的特异性引物,建立了一步法快速检测禽流感的PCR,对反应条件进行优化后,组装成快速检测试剂盒,并对临床收集的疑似禽流感病料进行检测。结果显示,试验成功建立了禽流感H9病毒一步法RT-PCR检测方法,在此基础上完成了试剂盒的组装,对30份疑似禽流感病料的检出率高达98%以上,检测灵敏度达10^1.5ELD₅₀,稳定性良好, 冷冻保存期达12个月。经证实该试剂盒具有操作简便、经济、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点,值得推广应用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立一种敏感、特异、快速的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV N蛋白,亲和层析纯化后作为包被抗原,通过对各反应条件优化选择,建立了PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法,并进行了交叉反应和重复性试验,以及同类成品试剂盒间的应用效果对比试验。最终确定了抗原包被最佳浓度为2 μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,血清及酶标二抗孵育时间均为30 min,显色时间为10 min,检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒等5种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该ELISA检测方法批内和批间重复性的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒效果比较显示符合率为94.7%。本研究建立的间接ELISA方法将为猪群感染野毒PRRSV后的快速诊断及流行病学调查提供一种简便易行、快速高效的血清学抗体检测方法。     

中药在vero细胞上的最大安全浓度测定方法的比较

为了测定黄芪、板蓝根、甘草、黄芩、败酱草在vero细胞上的最大安全浓度,将各中药两倍比稀释加入到长满单层的vero细胞板上,通过比较形态学观察法和MTT法,测定各中药在vero细胞上的最大安全浓度。结果显示,黄芪、板蓝根、甘草、黄芩、败酱草通过形态学观察法测得的最大安全浓度分别为78.25、35、12.5、4.688、5.23 mg/mL;MTT法测定的最大安全浓度分别为39.13、35、6.25、0.59、2.62 mg/mL。其中黄芪对细胞的毒性最低,黄芩对细胞的毒性最高。通过MTT法测得最大安全浓度比形态学观察法大约要低,说明MTT法比形态学观察法更加灵敏。     

产朊假丝酵母菌发酵降解棉酚的效果

棉粕经高温高压处理后,利用产阮假丝酵母对棉粕进行固体发酵脱毒,通过对生物量的测定,获得最适发酵脱毒条件,然后进行发酵降解棉酚实验,通过测定发酵终点和起始点棉酚的含量,获得产朊假丝酵母对棉酚的降解率。结果显示最适发酵条件为:发酵底物含水量为37%,发酵时间48h,发酵温度30℃,接种量为5%。对发酵前和发酵48h后的样品按照国家标准测定方法进行棉酚含量的测定,结果显示棉粕在发酵前后,棉酚去除率在85.7%左右。     

猪产毒素大肠杆菌K88黏附素FaeG基因重组乳酸菌对小鼠免疫性能的影响

目的为获得临床对猪大肠杆菌病较好的预防方法,研究猪产毒素大肠杆菌K88黏附素FaeG基因的重组乳酸菌对小鼠免疫性能的影响。方法将重组乳酸菌经口服(灌胃)免疫BALB/C小鼠,加强免疫后7 d处理小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后采用试剂盒及间接ELISA方法,检查小鼠免疫性能变化情况。结果重组乳酸菌经口服免疫小鼠后,提高了小鼠生长初期的脾脏指数及细胞因子(IL-2)的含量,加强免疫后粪便中的sIgA与对照组相比,差异极显著(P<0.01),血清中猪ETEC(K88)的特异性抗体水平高于对照组,差异性达到了统计学上的显著水平(P<0.05)。结论含有猪ETEC K88黏附素FaeG基因的重组乳酸菌,可以诱导小鼠产生良好的针对猪产毒素大肠杆菌的全身体液和黏膜免疫应答。     

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID₅₀,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×2¹⁰ U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。