10味中药对畜禽支原体敏感性及细胞毒性研究

以70%乙醇回流提取法制备中药提取物,采用微量液体稀释法分别测定10味中药对牛支原体、鸡毒支原体及羊肺炎支原体标准株的体外最小抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration,MIC),并以MTT法测定10味中药对非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)的细胞毒性作用,探讨10味中药对畜禽支原体的敏感性及其细胞毒性。结果表明,10味中药中,两面针、南板蓝根、黄连、黄芩、黄柏、甘草和白鲜皮等7味中药对3种畜禽支原体具有不同程度的体外抑制和杀灭作用,其中两面针、甘草、黄柏有较好的敏感性,MIC分别为3.91~15.625mg/mL,7.81~31.25mg/mL,15.625~62.50mg/mL。其余3味中药广藿香、土槿皮和艾叶敏感性最低,MIC均大于250mg/mL。10味中药中,土槿皮对Vero细胞有一定的细胞毒性,最大安全浓度(the maximum safe concentration,TC0)小于0.49mg/mL,半数抑制浓度(the half inhibitory concentration,IC50)为3.12mg/mL;其余9味中药对Vero细胞毒性很小,TC0在3.91~15.625mg/mL之间,IC50在47.20~104.55mg/mL之间。筛选出7味中药对牛支原体、鸡毒支原体及羊肺炎支原体具有不同程度的敏感性,且其细胞毒性很小,为兽医临床辨证治疗提供试验参考。     

3种中药及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究

为研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用,本试验在研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上,研究3种中药提取物体外抗PRRSV的作用。结果显示,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素3种中药提取物对Marc-145细胞安全浓度分别为为0.03、0.03和0.06 mg/mL,板蓝根、黄芪和青蒿3种中药单方的安全浓度分别为6.25、6.25和3.13 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中,3种中药单方中黄芪的阻断作用最强,能达到100%的保护率,中药提取物中板蓝根多糖对PRRSV的阻断作用最强,在浓度为0.031 mg/mL时对细胞保护率能达到48.03%,青蒿素最差,在0.16 mg/mL时就已不具有阻断作用。板蓝根多糖对病毒不具有直接杀灭作用,黄芪多糖和青蒿素在浓度为0.32 mg/mL时,保护率都是20%左右;黄芪的直接杀灭作用保护率为100%,且非常稳定,青蒿在浓度较高时还有促进细胞生长的作用,但稳定性差,随浓度降低其保护率迅速下降。在对病毒的抑制作用试验中,3种中药提取物的作用相当,浓度为0.01 mg/mL时,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素多糖对细胞的保护率分别为24.57%、24.30%和26.20%;而3种中药单方的细胞保护率都能达到100%甚至以上。综合3种作用方式可知,3种中药提取物中,黄芪多糖的抗PRRSV作用最好,青蒿素次之,板蓝根多糖最差;3种中药单方中黄芪的效果最好,青蒿最差。因此,可知黄芪及其提取物具有非常强的抗PRRSV作用,可对其进行进一步研究,以供临床上使用。     

中药体外对Marc-145细胞的影响及抗PRRSV突变株的作用

将板蓝根、甘草和鱼腥草3种单味中药各含量为100mg/mL的中药粗提物作连续倍比稀释后,采用CPE和MTT法将其在Marc-145细胞上进行最大安全质量浓度和对细胞增殖的影响试验,同时采用体外细胞培养的方法在Marc-145细胞上进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒突变株(PRRSV PX株)作用试验。结果显示,3种中药粗提物最大安全作用质量浓度板蓝根和甘草均为3.125g/L、鱼腥草为1.563g/L;板蓝根、甘草、鱼腥草分别在3.125～0.049、3.125～0.195、1.563～0.391g/L时测得细胞D值大于细胞对照组,对细胞分裂增殖均有促进效果,最佳作用质量浓度均为1.563g/L;3种中药粗提物有不同程度的抗PRRSV PX株作用,板蓝根和甘草粗提物阻断、抑制PRRSV PX株感染及直接灭活PRRSV PX株效果最好的质量浓度;阻断为3.125、3.125g/L、抑制为1.563、0.391g/L:阻断、直接灭活为0.782、0.782g/L,鱼腥草粗提物在0.782g/L时阻断和抑制PRRSV PX株效果为好,但其对PRRSV PX株基本没有直接灭活作用。     

中药黄芩苷对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响

为了研究中药黄芩中有效成分黄芩苷对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长的影响,应用细胞病变观察法(CPE)观察黄芩苷对CEF细胞生长的影响,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定黄芩苷对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度。黄芩苷浓度在312.5μg/m L时为最大安全浓度,低于此浓度时黄芩苷能促进CEF的贴壁及生长,细胞生长良好,呈梭形,折光性强。结果表明,黄芩苷在中、低浓度能促进CEF细胞的贴壁和生长且对CEF细胞的作用都具有时效性,应用细胞病变观察法与MTT法,最终得出黄芩苷对CEF的最大安全浓度为312.5μg/m L。     

金英汤及其活性成分体外对鸡胚成纤维细胞最大安全浓度的测定

为了评价中药方剂"金英汤"及其主要活性成分绿原酸、连翘苷和黄芪多糖的细胞毒性,利用鸡胚成纤维细胞来检测药物的细胞最大安全浓度。中药方剂"金英汤"的细胞最大耐受量为0.488 mg/mL(生药浓度),而其主要活性成分绿原酸、连翘苷和黄芪多糖的细胞最大耐受量分别为0.031,0.244和0.488 mg/mL。     

大黄体外抗猪流行性腹泻病毒的研究

为研究大黄对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染所引起的细胞病变的抑制作用及其机理,本试验采用形态学观察法测定大黄溶液在Vero细胞上的最大安全浓度,建立体外病毒感染Vero细胞模型并利用该模型进行了大黄对病毒抑制作用的研究。结果显示,本试验成功建立了体外病毒感染模型和大黄的抗病毒试验方法;大黄在Vero细胞上的最大安全浓度为3.28 mg/mL;形态学观察法和MTT法均显示大黄不仅能阻断病毒吸附Vero细胞,抑制病毒的合成复制,还可直接灭活病毒。本研究结果表明,大黄具有抗PEDV的作用,为临床上预防和治疗猪流行性腹泻(PED)提供理论基础。     

抗羊传染性脓疱病毒中药组方的筛选

为了给临床兽医提供可靠的抗羊传染性脓疱病毒中药组方,试验从甘草苷、绿原酸、黄芩苷、咖啡酸、栀子苷、黄芪多糖及板蓝根多糖中选取三种中药成分按照一定比例组成10个中药组方,利用细胞病变(CPE)观察和MTT比色相结合的方法,在细胞上筛选出抗羊传染性脓疱病毒作用较强的组方。结果表明:通过细胞筛选,组方Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的抗病毒效果最好,并且不同组方加入方式和组方浓度均对其抗病毒能力有一定影响。     

6种中药醇和水提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌效果评价

本文针对甘草、黄连、板蓝根、黄芩、黄芪、大青叶6种中药醇和水提取物,研究其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌作用效果。采用醇提法和水提法获得6种中药醇和水提取物;通过药敏试验,筛选对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有抑菌效果的中药提取物;通过试管2倍稀释法探明该中药提取物对金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC);进而探明该中药提取物对金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的最低杀菌浓度(MBC)。结果表明,6种中药醇水提取物中仅黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌表现较强的抑菌效果,浓度在0.5 mg/mL时,黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌分别达高敏和极敏。黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.08 mg/mL和0.04 mg/mL,MBC结果显示,黄连醇和水提取物对金黄色葡萄球菌均表现杀菌作用,MBC分别为0.16 mg/mL和0.08 mg/mL。表明黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌具有抑制作用,且黄连水提物的抑菌效果优于黄连醇提物。     

10种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究

为了研究穿心连、夏枯草、黄柏、黄芩、板蓝根、黄芪、黄连、连翘、芦根、青蒿共10种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用,试验采用MTT法对病毒分别进行阻断、抑制、直接杀灭3种作用方式的测定。结果表明:10种中药体外应用3种作用方式均有不同程度的抗PRRSV作用,其中阻断作用明显的有板蓝根、黄芪、青蒿;除了黄柏、黄芩外,其余8种中药均有明显的抑制病毒作用;直接杀灭病毒作用明显的有青蒿、连翘,而芦根、板蓝根、黄芪、黄芩、穿心莲次之。综合比较3种作用方式,板蓝根、黄芪、青蒿和芦根4种中药具有明显抗PRRSV作用,其次是连翘、穿心莲和夏枯草。     

几种天然药物成分在体外CEF中最大安全浓度的测定

采用组织细胞培养方法，测试了板蓝根多糖、当归多糖、黄芪多糖、黄芪皂甙、人参皂、淫羊藿多糖、蜂胶多糖、蜂胶黄酮、黄芪黄酮、羊藿黄酮共10种天然药物成分在鸡胚成纤维细胞（CEF）体外培养中的最大安全浓度。结果表明：黄芪多糖、当归多糖对鸡胚成纤维细胞毒性最低，最大安全达1562.5μg/mL，其后依次是板蓝根多糖、人参皂甙、黄芪黄酮、黄芪皂甙、蜂胶黄酮的毒性最大，其最大安全浓度仅4.883μg/mL。多糖成分的毒性较黄酮成分小。     

黄芪、板蓝根对猪细小病毒体外抑制作用研究

为研究中草药黄芪、板蓝根作为抗病毒药物的效果及初步机理，利用细胞病变（CPE）抑制实验测定黄芪、板蓝根单独使用及1：1联合使用在PK-15单层细胞上对猪细小病毒（PPV）的抑制作用。结果表明：板蓝根单独使用时体外对PPV有明显的抑制作用，其对PPV的最小直接杀灭浓度为0．62mg／mL，最小阻断浓度为0．31mg／mL；而黄芪单独使用时对PPV无明显的抑制作用。板蓝根、黄芪1：1联合使用时对PPV的抑制作用显著增强，其对PPV的最小直接杀灭浓度提高为0．31mg／mL，最小阻断浓度提高为0．075mg／mL。     

板蓝根、黄芪对猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外抑制作用

为了解中草药黄芪、板蓝根对病毒增殖的抑制作用,对黄芪、板蓝根及二者联合使用在Marc-145的单层细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的抑制作用进行了研究。结果表明,板蓝根能够显著抑制PRRSV体外增殖,对PRRSV的最小直接杀灭浓度为0.195 mg/mL,最小阻断浓度为0.097 mg/mL;黄芪对PRRSV增殖的抑制作用较弱。板蓝根、黄芪联合使用时对PRRSV的抑制作用显著增强,板蓝根对PRRSV的最小直接杀灭浓度降为0.097 mg/mL,最小阻断浓度降为0.049 mg/mL。     

中药对奶牛乳房炎6种主要病原菌的体外抗菌活性筛选试验

目的:筛选对奶牛乳房炎主要病原菌抗菌活性较强的中药。方法:选取治疗乳房炎常用的中药20味进行超声提取,用微量肉汤法对6种奶牛乳房炎主要致病菌进行体外抗菌活性筛选试验。结果:当环丙沙星对金黄色葡萄球菌标准株ATCC29213的最小抑菌浓度都在要求抑菌范围内,说明菌数符合要求;对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度小于6.25 mg/mL的中药有甘草、黄连、大黄、黄芩、连翘、地肤子、远志、知母和丹参;对大肠杆菌最小抑菌浓度小于6.25 mg/mL的中药有黄连、黄芩和连翘;对无乳链球菌和副乳房链球菌最小抑菌浓度小于6.25 mg/mL的中药有黄连、甘草和知母;对停乳链球菌,最小抑菌浓度小于6.25 mg/mL的中药有甘草、黄连、知母、地肤子、远志和大黄;对肺炎克雷伯菌,20味中药的最小抑菌浓度均大于50 mg/mL。结论:不同中药提取物对不同细菌的最小抑菌浓度不同,其中黄连、甘草、黄芩、大黄、知母、连翘、丹参等对奶牛乳房炎6种病原菌抗菌活性均较强,且抗菌活性强的中药大多为清热解毒类。     

抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选

试验旨在检测抗病毒药物对猫传染性鼻气管炎病毒的有效性。利用F81细胞建立抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选模型,采用MTT法检测,计算病毒的抑制率。结果显示,阿昔洛韦、利巴韦林、L-赖氨酸、板蓝根和黄芪多糖的半数有效浓度（IC₅₀）分别为9.5、3.3、3.4、161.0和4.7 μg/mL,聚肌胞IC₅₀为6.0 mg/mL,治疗指数TI分别为76.8、39.3、2 588.0、4.5、78.7和5.8。结果表明,L-赖氨酸和黄芪多糖为高效抗猫传染性鼻气管炎病毒药物。     

抗鸭坦布苏病毒感染的中草药筛选及其作用效果的初步研究

为筛选抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)的中草药并探究其抗病毒作用效果，本研究通过检测12种中草药对DTMUV感染鸭胚成纤维细胞细胞(DEF)形态学与病毒抑制率的影响，以及对DTMUV病毒滴度与病毒载量的影响，筛选在DEF中抗DTMUV效果较明显的中草药；采用鸭胚接种法测定筛选出的3种药物(板蓝根、醋五味子、酒黄芩)对DTMUV感染鸭胚死亡率的影响；并选择效果最好的酒黄芩验证其对DTMUV感染雏鸭死亡率、临床症状、体重及组织(心脏、脾脏)中病毒载量的影响。结果显示：鱼腥草、淫羊藿、金银花、板蓝根、绵马贯众、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、连翘、醋五味子、白芍水提物在最佳作用浓度时均能减轻DTMUV感染DEF的CPE，并对DTMUV具有不同的抑制率，其中酒黄芩效果最佳；淫羊藿、白芍、板蓝根、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、醋五味子、连翘能显著降低DEF中DTMUV的病毒滴度(P<0.05)；板蓝根、醋五味子、酒黄芩能显著降低DEF中DTMUV的病毒载量(P<0.05)；板蓝根、酒黄芩能起到治疗效果，且显著降低鸭胚死亡率(P<0.05)，而酒黄芩、醋五味子还能预防病毒感染，且显著降低鸭胚死...     

10种中药提取物体外抗传染性支气管炎病毒效果的研究

采用体外细胞培养法,研究板蓝根、大青叶、黄连、菊花、淫羊藿、人参、茯苓、黄芪、山药和当归10种中药提取物在鸡胚成纤维细胞体外培养中的最大安全浓度,借助光学倒置显微镜,肉眼观察提取物对细胞形态的影响。在安全浓度范围内分别考察各味中药对传染性支气管炎病毒标准株M41型(IBV-M41)的防治效果,确定4种抗病毒力最强的4种中药进行后续的试验。结果表明,板蓝根、大青叶、黄连和淫羊藿对IBV-M41的抗病毒效果最好。     

利巴韦林、病毒灵、黄芪多糖体外抗ALV-J的活性试验

为寻求抗ALV—J感染雏鸡用药物,通过CCK-8试剂盒检测细胞活力以确定利巴韦林、病毒灵和黄芪多糖对DFl细胞的最大安全浓度,用ELISA试剂盒检测ALV—JP27抗原表达量,以确定上述抗病毒药物体外抗ALV—J活性。结果显示,利巴韦林、病毒灵和黄芪多糖对DFl细胞的最大安全浓度分别为0．0391、0．0625和0．0625mg／mL。在安全范围内,利巴韦林对P27的表达量具有明显的抑制作用,黄芪多糖在0．0039～O．0625mg／mL安全浓度范围内明显抑制P27的表达,病毒灵在安全范围内对P27的表达基本上没有抑制作用。试验表明,利巴韦林和黄芪多糖对ALV-J的增殖有明显的抑制作用,有望作为该病净化的辅助性防制药物。     

中药单味药及复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用

本试验用煎煮法提取中药有效成分,采用琼脂平板扩散法探讨了黄连、五倍子、大黄、诃子等中药单味药及中药复方对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的体外抑菌作用,测定了抑菌圈大小.采用双倍试管稀释法测得了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).试验结果表明,16种中药提取物对嗜水气单胞菌有不同程度的抑制作用,其中五倍子、黄连、诃子、大黄的水提物的抑菌效果最好,MIC值分别为7.81 mg/mL、15,63 mg/mL、31.25 mg/mL、62.50 mg/mL.五倍子作为主药,分别与诃子、黄连、大黄接一定比例组成的复方的MIC分别为3.906 mg/mL、7.813 mg/mL、15.625 mg/mL.通过对筛选的复方与市场上销售的3种成品复方的体外抑菌活性的比较,发现本实验室筛选的复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌活性更强.     

11种中药对致犊牛腹泻大肠杆菌的体外抑菌试验

采用水提醇沉法提取中药中的有效成分,通过测定骆驼蓬子、黄连和没食子等11种中药对致犊牛腹泻大肠杆菌的抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)值和最低杀菌浓度(MBC)值,比较各中药对致犊牛腹泻大肠杆菌的体外抑菌效果。结果表明,11种中药提取物中骆驼蓬子、没食子、黄连和小檗实对致犊牛腹泻大肠杆菌抑菌效果最明显,抑菌圈直径分别为:25.63 mm、21.89 mm、21.82 mm、19.32 mm,MIC值分别为3.91 mg/mL、31.25 mg/mL、62.5 mg/mL、62.5 mg/mL,而石榴花、红花、阿魏、柽柳实和甘草提取物对致犊牛腹泻大肠杆菌没有显示抑菌作用。     

两种不同检测方法对香连溶液抑菌效果评判的影响

目的:研究两种不同抗菌检测方法对中药制剂香连溶液体外抗菌效果评判的影响。方法:采用试管稀释法检测中药制剂香连溶液对5种病原菌的最小抑菌浓度,用MTT 法检测中药制剂香连溶液对5种病原菌的抑菌效果,研究不同抗菌检测方法对抗菌效果评判的影响。结果:用试管稀释法,香连溶液对绿脓杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌的最小抑菌浓度分别是4.20 mg/mL、0.60 mg/mL、0.84 mg/mL、1.40 mg/mL、2.10 mg/mL;而采用MTT 法,香连溶液对绿脓杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌的有效抗菌浓度分别为0.53 mg/mL、0.53 mg/mL、0.53 mg/mL、0.53 mg/mL、0.70 mg/mL。结论:两种方法评判结果不同,MTT 法检测更适用于对香连溶液的抗菌效果评判。