基于TaqMan探针的猪细小病毒实时荧光定量PCR方法的建立

根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premierexpress软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK．15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-TEasy载体中,构建重组质粒．转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线．在25此扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序．该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1．12TCID50／mL．     

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用

用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。     

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用

用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。     

地方品种固始鸭与樱桃谷鸭α-干扰素基因的克隆与遗传进化分析

根据GenBank发表的鸭α-干扰素(interferon-alpha,IFN-α)基因序列(AY879230),设计并合成了1对引物,提取固始鸭和樱桃谷鸭基因组DNA,应用PCR技术扩增地方品种固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因,并克隆、测序.测序结果表明获得了固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因,大小均为584 bp,包含1个IFN-α基因完整的开放阅读框,编码191个氨基酸的多肽.推导的氨基酸有2个潜在的 N-糖基化位点,有7个与二硫键形成有关的半胱氨酸.克隆的固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因与北京鸭IFN-α基因的氨基酸序列比较,仅固始鸭IFN-α基因发生突变D38N.固始鸭和樱桃谷鸭IFN-α基因与其他IFN-α基因的氨基酸序列遗传进化树分析表明樱桃谷鸭与北京鸭有很近的亲缘关系,固始鸭次之.地方品种固始鸭在非常保守的38位发生了氨基酸突变,推测这可能与该品种鸭具有很强的抗病能力有关.     

《免疫学》双语教学示范课程建设与体会

近年来,高等院校大力推进双语教学模式是与国际高等教育接轨,培养具有国际化竞争力高素质人才的重要途径,双语教学课程建设已成为国内高校教学改革的一个热点。论文介绍了课程组在免疫学双语教学和课程建设工作中的经验和一些体会。     

鸭瘟病毒河南株gI基因的克隆与测序

参考GenBank中鸭瘟病毒gI基因序列设计并合成引物,以鸭瘟病毒河南分离株DNA为模板进行PCR扩增,将扩增片段克隆至PGEM-T载体上,得到含gI基因重组质粒。经酶切鉴定,并对重组阳性质粒进行序列测定。结果表明,获得的片段含鸭瘟病毒gI基因,全长1 089 bp,与已报道的其他疱疹病毒gI基因具有较高的同源性,编码432个氨基酸,蛋白分子质量为39.7ku、等电点(PI)为6.06。     

猪流行性腹泻病毒中和表位区S1D的原核表达及免疫原性分析

为了研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白中和表位区S1D的免疫原性,根据PEDV河南株(Gen Bank:YK649107)S1基因序列,设计1对特异性引物,PCR扩增S1D片段,克隆到p ET-28a(+)中,构建原核表达载体,经优化的IPTG浓度诱导后进行SDS-PAGE分析,利用His标签的特性重组蛋白进行纯化及Western blot分析。结果显示:中和表位S1D片段在p ET-28a(+)中高效表达;Western blot证明重组蛋白可以与PEDV阳性血清产生特异性反应;用纯化的蛋白免疫新西兰白兔,抗体水平升高,表明重组蛋白具有良好的免疫原性。     

复合益生菌和霉菌毒素降解酶对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的同步降解

面对多种霉菌毒素的危害，依据本实验室建立的黄曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEA）和呕吐毒素（DON）联合导致的细胞毒性模型，通过复合益生菌、霉菌毒素降解酶及其配伍来降解这三种霉菌毒素。本研究首先选用拉丁方试验设计获得枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和丁酸梭菌的最佳组合，然后再与霉菌毒素降解酶配伍。结果表明：当枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和丁酸梭菌的活菌数皆为1×105 cfu/mL时，对AFB1、ZEA和DON的联合降解效果最好。高含量霉菌毒素组AFB1、ZEA和DON的降解率分别为40.55%、56.05%和47.22%（P < 0.05），低含量霉菌毒素组AFB1、ZEA和DON的降解率分别为43.05%、38.26%和80.49%（P < 0.05）。复合益生菌与霉菌毒素降解酶的配伍试验结果表明，在高剂量霉菌毒素的降解试验中，单一复合益生菌、单一霉菌毒素降解酶及两者的配比为30:1时，对三种霉菌毒素的总降解率最高，分别到达了190.08%、175.10%和184.44%，显著高于其他组（P < 0.05）|在低剂量霉菌毒素的降解试验中，单一霉菌毒素降解酶对三种霉菌毒素的总降解率最高，达到了219.23%（P < 0.05）|其次为单一复合益生菌及两者的配伍比例为30:1和3:2时，对三种霉菌毒素的总降解率较高，分别达到了178.07%、181.84%和170.33%，显著高于其他组（P < 0.05）。综上所述，复合益生菌、霉菌毒素降解酶及其两者适宜配伍，可同步降解AFB1、ZEA和DON三种霉菌毒素，为多种霉菌毒素的同步降解奠定了基础。 [关键词] 复合益生菌|霉菌毒素降解酶|黄曲霉毒素B1|玉米赤霉烯酮|呕吐毒素|同步降解     

伪狂犬病病毒gD、gE基因的克隆及转移载体的构建

利用PCR扩增了伪狂犬病病毒Min-A株gD、gE基因,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体.将gD、gE基因连接于质粒pUC18获得pUgDgE,缺失质粒pUgDgE的BamHI和BstEII位点间391bp的片段.在此缺失位置插入来自质粒pcD-NA3.1-的一段含hCMV启动子、多克隆位点和Neo报告基因的片段,构建了通用转移载体pgD-M-gE.该转移载体缺失了伪狂犬病病毒gI基因和gE基因ORF5'端363bp的碱基,有11个酶切位点可供外源基因的插入,上下游侧翼分别为1.25bp和1.42bp.这为开发以伪狂犬病病毒为载体的多价基因工程疫苗提供了有力工具.     

3 株鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与序列分析

鸡接种传染性喉气管炎病毒（ILTV）弱毒疫苗是预防传染性喉气管炎（ILT）的主要措施,但由于目前使用的弱毒疫苗对雏鸡仍有一定毒力,可引起潜伏性感染及疫情扩散,毒力易于返强,强弱毒无法鉴别诊断等不足,因而缺失毒力基因而保留抗原性的基因工程疫苗等新型ILT疫苗的研制势在必行。研究表明,TK基因是疱疹病毒增殖非必需基因和主要的毒力基因,在神经组织感染与潜伏性感染中具有重要作用。利用基因技术敲除掉病毒的TK基因,可使病毒毒力下降,但不改变其免疫原性,