板蓝根生物碱抗猪细小病病毒的作用

摘 要:【目的】探讨板蓝根水溶性生物碱和脂溶性生物碱对猪细小病毒的体外抑制作用。【方法】采用醇提法从板蓝根中提取了水溶性生物碱和脂溶性生物碱,并测定其对PK-15细胞的最大无毒浓度（TD50）,应用先加药后接种病毒、先接种病毒后加药、病毒和药物体外作用2h后再同时加入细胞单层三种加药方式测定了生物碱的体外抗PPV效果。【结果】板蓝根水溶性生物碱的TD0为62.5μg /ml,板蓝根脂溶性生物碱的TD0为50μg /ml.板蓝根水溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为7.81μg /ml、15.62μg /ml、7.81μg /ml。板蓝根脂溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为0.78μg /ml、12.5μg /ml、0.78μg /ml。板蓝根混合生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为0.78μg /m、12.5μg /ml、0.78μg /ml。【结论】板蓝根脂溶性生物碱的抗病毒作用强于板蓝根水溶性生物碱,板蓝根混合生物碱的抗病毒作用比两种生物碱单独使用效果要好。     

中草药提取物对桃褐腐菌（Monilinia fructicola）抑制作用增效组合筛选

用菌丝生长速率法测定了虎杖、黄柏、厚朴、松萝等4种中草药提取物对桃褐腐菌的抑制作用，经线性回归计算50%抑制时的有效浓度（EC50）分别为133.8μg/ml、40.6μg/ml、90.6μg/ml、3.4μg/ml。根据EC50，用等效线法相加作用线的6等分点设置配比，共毒因子法判断增效标准。结果表明，各种配比的混配剂中黄柏+松萝为最佳增效作用组合，其中以8：1增效作用最显著。     

猪转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

无菌采取犬抗凝血，分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验，探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素（PHA-P）、犊牛血清（FCS）对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上，研究不同浓度猪转移因子（transfer factor, TF）对犬淋巴细胞增殖的影响，增殖的结果用MTT法测定。试验结果表明，当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml，PHA-P为12.5μg/ml，FCS为10%时，淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下，猪TF浓度在0.195~25mg/ml时，对淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用，猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml，且猪TF单独作用于淋巴细胞的效果优于与PHA-P的协同作用。试验结果证实，异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果，同时本研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了试验依据。     

犬、猪转移因子对犬淋巴细胞体外转化增殖影响的比较研究

无菌采取犬抗凝血，分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验，探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素P（PHA-P）、犊牛血清（FCS）对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上，研究不同浓度犬、猪转移因子（transfer factor, TF）对犬淋巴细胞增殖的影响，增殖的结果用MTT法测定。结果表明，当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml，PHA-P为12.5μg/ml，FCS为 10%时，淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下，犬、猪TF浓度在0.195~25mg/ml时，对淋巴细胞转化增殖均有促进作用，但犬、猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml，且犬、猪TF单独作用于淋巴细胞的效应明显优于与PHA-P的协同作用。结果证实，同源或异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果，同时研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了实验依据。     

板蓝根多糖对体外培养鸡脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响

采用水提醇沉法提取板蓝根多糖,应用蒽酮-硫酸法进行多糖含量测定。体外培养鸡脾脏淋巴细胞,用固相夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定蛋白激酶c(PKC)活性,分析板蓝根多糖对鸡脾脏淋巴细胞PKC活性的影响。结果显示,加入板蓝根多糖组（100mg/ml）与空白对照组的PKC的活性有显著差异(P<0.05),表明板蓝根多糖能引起鸡脾脏淋巴细胞蛋白激酶c活性明显升高。     

中草药提取物对几种果蔬采后病原真菌的离体抑制作用

为寻找天然果蔬防腐剂,该试验在离体条件下,采用生长速率法测定了鹿蹄草素、黄连、黄柏、厚朴等4种中草药提取物对几种果蔬采后病原真菌的抑制效应。结果表明：4种中草药提取物对链格孢菌（Alternaria alternata）的最小抑菌浓度（MIC）分别为0.25、12.5、25、1.25mg/ml;最小杀菌浓度（MBC）分别为0.25、25、25、2.5mg/ml;对褐腐病菌（Monilinia fructicola）的最小抑菌浓度（MIC）分别为0.032、0.625、0.625、1.25mg/ml;最小杀菌浓度（MBC）分别为0.125、2.5、5、2.5mg/ml。经线性回归计算50%抑制时对链格孢菌的有效浓度（EC50）分别为0.217、10.192、10.354、0.340mg/ml;对褐腐病菌的有效浓度（EC50）分别为0.065、0.192、0.687、0.246mg/ml。     

板蓝根多糖对PRRS弱毒苗免疫猪抗体和T细胞亚群的影响

研究板蓝根多糖对PRRSV弱毒苗免疫抗体和猪外周血T细胞亚群的影响。35日龄断奶仔猪16只随机分为4组,将多糖分别以高、低两个剂量和猪PRRSV弱毒苗同时注射,于免疫后不同的时间点采血,ELISA方法检测猪PRRSV抗体水平,流式细胞术检测猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化。弱毒苗免疫后7d,板蓝根多糖高剂量组即可检测到PRRSV阳性抗体,而其它组在免疫后14d,均可检测到PRRS阳性抗体,板蓝根多糖对PRRS弱毒苗产生抗体的影响是和剂量密切相关的,高剂量能提高抗体水平,低剂量会阻碍PRRSV抗体的产生。板蓝根多糖和PRRS弱毒苗联合使用对猪外周血CD3^＋和CD4^＋细胞数量的影响不显著,在早期可促进猪外周血CD8^＋细胞的增殖。合适剂量的板蓝根多糖可以作为免疫增强剂与PRRSV弱毒苗联合使用。     

板蓝根多糖保健酒的研制

以板蓝根为原料,在一定条件下泡制白酒,制得板蓝根多糖保健酒。采用苯酚—硫酸法测得泡制酒中板蓝根多糖含量在一定范围内随泡制时间、温度、料液比有正比关系。用自然干燥的板蓝根粉粒室温下泡制7~28 d,酒中板蓝根多糖质量浓度为40~60 g/L;适度加热处理的板蓝根比未处理或处理不当的板蓝根粉粒的室温下泡制酒中的多糖含量高;在适度加热条件下泡制板蓝根白酒,多糖溶出快、含量高。试验表明,泡制板蓝根多糖酒可用100℃下加热3 h或自然干燥的板蓝根粉粒直接进行,用石油醚和体积分数为95%的乙醇充分浸提后的板蓝根粉粒泡制白酒,虽然多糖含量降低,但该工艺模拟了用板蓝根制药残渣泡制多糖保健酒的技术路线,可充分利用板蓝根生药资源,并有效地保持多糖活性。适宜条件下泡制的板蓝根多糖保健酒橙黄清澈,具有板蓝根特有的清香和微苦滋味。     

反义RNA介导的抗猪传染性胃肠炎病毒感染

构建了重组逆转录病毒表达质粒plxas-N,该质粒能表达互补猪传染性胃肠炎病毒N基因全长的反义RNA序列。用质脂体方法将重组质粒plxas-N转染至PA317细胞中,经抗生素G418（500μg/ml）筛选出稳定的产毒细胞克隆。分别扩大培养细胞克隆,取其上清液感染小鼠成纤维细胞NIH3T3,测定细胞克隆产生的重组病毒滴度,并用高滴度重组病毒感染IBRS2细胞。提取被感染的IBRS2细胞的总RNA,RT-PCR证明plxas-N整合到IBRS2细胞基因组。通过TGEV分别感染IBRS2和IBRS2抗性细胞产生的病变,结果表明该反义RNA对病毒的复制有抑制作用,其抑制率近50%。     

瑞香狼毒防治仓储害虫的初步研究

本试验以米象、玉米象、谷蠹、赤拟谷盗为试虫，初步研究了瑞香狼毒对仓储害虫的杀虫活性，实验表明：瑞香狼毒根粉剂对米象、谷蠹、玉米象的防治效果较好；瑞香狼毒根粉的粗提物中，极性以及非极性溶剂的提取液均表现出对米象的较高的杀虫活性，狼毒乙醇提取液在1.5g/kg的剂量下，对米象的致死率为90.98%，而狼毒正已烷提取液在0.5g/kg的剂量下，对米象的致死率仍高达98.44%，这表明对于瑞香狼毒，完全有进一步研究的价值。以期获得高效、低毒、安全无公害的防治仓储害虫的生物杀虫剂。     

蟛蜞菊粗提物对玉米螟拒食作用研究初报

为了充分利用中国的植物资源,开发新型的环境和谐型农药,以蟛蜞菊为试验材料,采取叶片浸渍法,测定该植物不同部位对亚洲玉米螟的拒食活性。结果表明：蟛蜞菊4个不同部位中,以花的甲醇提取物拒食效果最好,24h对亚洲玉米螟3龄幼虫的AFC50为3392.28μg/ml,对照印楝为2228.72μg/ml。其次为根,24h的AFC50为6603.34μg/ml。叶和茎的拒食效果较差,其AFC50仅分别为12032.17μg/ml 和14046.68μg/ml。     

犬淋巴细胞转化增殖试验最佳条件的确定

本试验选择杂种牧羊犬作为实验犬,用MTT法检探讨了不同浓度犊牛血清（FCS）、淋巴细胞、植物血凝素P（PHA-P）和刀豆蛋白A（ConA）对犬淋巴细胞增殖的影响。确定了犊牛血清含量为10%,淋巴细胞浓度为5×106个/mL,用丝裂原PHA-P 刺激的最佳浓度为12.5ug/mL时,MTT法测定能够刺激犬淋巴细胞转化增殖,但t检验分析表明其促进淋巴细胞增殖的效果并不显著;当其它条件不变,所用的丝裂原为Con A时,它在浓度为0.5～2.5μg/mL范围内均可以显著刺激T细胞的增殖（P<0.05）,且在浓度为2.5μg/mL时刺激效果最佳     

猪生长激素ELISA检测体系的建立

本文分别以自制猪生长激素单克隆抗体及兔抗猪生长激素IgG就影响检测elisa(酶联免疫吸附法)体系因素进行探讨,建立了检测猪生长激素的elisa方法。猪生长激素单克隆抗体的最适操作参考值为：单抗最佳包被浓度为3μg/mL,包被条件为4℃过夜,5%羊血清封闭1h,兔抗猪生长激素IgG 最佳工作浓度为2μg/mL。     

马蓝基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

摘 要：以马蓝为研究材料,对马蓝基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量的马蓝基因组DNA。电泳检测结果表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要。同时对马蓝RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合马蓝RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含有1.25UTaqDNA聚合酶,0.25mmol/LdNTP,2.5mmol/LMg2+,50ng模板DNA,1.0μmol/L引物;反应程序中最佳退火温度为38℃。     

猪苓多糖苯酚-硫酸法测定条件的优选

【目的】建立猪苓多糖快速定量分析方法;【方法】苯酚-硫酸法,以葡萄糖含量为指标,检测波长490nm,用L9（34）正交试验设计优选测定条件;【结果】1.0ml样液,加5%苯酚液0.8ml、硫酸5.0ml,100℃水浴保温15min结果最佳;硫酸加量对结果影响最大,水浴温度次之,苯酚量影响最小;葡萄糖含量呈线性关系范围在5.0～40.0μg/ml;精密度RSD=1.58%(n=6);测定稳定性好(3h内);平均回收率99.22％,RSD=1.87％（n=3）;实测猪苓菌丝多糖含量3.46%,RSD=2.07%(n=4)。【结论】本优选法灵敏度高、操作简便、数据稳定性好、误差小、重现性好,值得推广     

DNA浓度及注射时间对苹果花粉管通道法基因转化率的影响

通过花粉管通道法，将携带CBF3和GUS基因的pWBVec10a质粒DNA导入苹果。坐果后70d左右采收种子，将收获的种子进行离体培养，培养基为MS+BA0.2mg/L+GA2.0mg/L，附加蔗糖50g /L，琼脂6 g/L，培养40d后对转化子叶进行GUS染色检测。结果表明，最佳注射时间为授粉后11~24h之间。随着注入外源DNA浓度的增加，坐果率逐渐降低，DNA浓度为500μg/ml时，坐果率可达3.1%；DNA浓度为1000μg/ml时GUS基因阳性表达率可达12.5%。     

提取柽柳核纤孔菌发酵多糖开发烟用香料

糖类是研究加香作用时很重要的一种物质。对柽柳核纤孔菌多糖进行了提取、分离和纯化,经红外光谱与核磁共振分析对多糖的结构进行了初步表征,由此确定柽柳多糖具有酸性性质。经过抗氧化性试验发现柽柳多糖在3 g/L时对DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基的清除率达到34.66%;利用吸烟机捕集烟气粒相物,计算其在卷烟烟气中的转移率为1.4%～1.7%。将不同梯度的多糖添加到卷烟中进行了感官评吸试验,确定了多糖在卷烟中的最佳用量为0.07%,具有减轻刺激性、增加回甜感、改善余味等效果。     

阿维菌素与橡胶籽油复配对朱砂叶螨的联合作用

室内测定了阿维菌素和橡胶籽油对朱砂叶螨的毒力及其复配剂的联合作用。结果表明，阿维菌素和橡胶籽油对朱砂叶螨雌成螨的LC50分别为0.01 μg/ml和1311.81 μg/ml；阿维菌素与橡胶籽油复配对朱砂叶螨成螨增效作用显著，共毒系数最高为293.90；阿维菌素及其与橡胶籽油最优复配剂对经药剂处理螨卵孵化的若螨具有显著的杀灭活性，且相同浓度下复配剂显著优于阿维菌素单剂，但两药剂对螨卵的直接毒杀活性均很低。阿维菌素与橡胶籽油复配剂这一高效、安全生物农药在害螨防治中极具应用前景。     

溴氰菊酯人工抗原合成及鉴定

以二溴菊酸和3-[(4-硝基苯)氧基]苯甲醛为原料经4步反应合成了溴氰菊酯半抗原1-氰基[3-(4-氨基苯)苯基]甲基-2,2-二甲基3-(2,2-二溴乙烯基)环丙烷羧酸酯;用重氮化法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）相偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法估算偶联比分别为11:1和8:1;以BSA偶联物作免疫抗原免疫日本大耳白兔制备溴氰菊酯多克隆抗体,间接非竞争ELISA法测定2个抗血清效价分别为100000和80000,间接竞争ELISA法初步测定农药浓度50μg/ml时抑制率达到80%以上,为研究建立溴氰菊酯农残免疫快速测定方法奠定了基础。