犬、猪转移因子对犬淋巴细胞体外转化增殖影响的比较研究

无菌采取犬抗凝血，分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验，探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素P（PHA-P）、犊牛血清（FCS）对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上，研究不同浓度犬、猪转移因子（transfer factor, TF）对犬淋巴细胞增殖的影响，增殖的结果用MTT法测定。结果表明，当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml，PHA-P为12.5μg/ml，FCS为 10%时，淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下，犬、猪TF浓度在0.195~25mg/ml时，对淋巴细胞转化增殖均有促进作用，但犬、猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml，且犬、猪TF单独作用于淋巴细胞的效应明显优于与PHA-P的协同作用。结果证实，同源或异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果，同时研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了实验依据。     

猪转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

无菌采取犬抗凝血，分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验，探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素（PHA-P）、犊牛血清（FCS）对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上，研究不同浓度猪转移因子（transfer factor, TF）对犬淋巴细胞增殖的影响，增殖的结果用MTT法测定。试验结果表明，当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml，PHA-P为12.5μg/ml，FCS为10%时，淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下，猪TF浓度在0.195~25mg/ml时，对淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用，猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml，且猪TF单独作用于淋巴细胞的效果优于与PHA-P的协同作用。试验结果证实，异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果，同时本研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了试验依据。     

牦牛转移因子对藏绵羊外周血淋巴细胞转化功能的影响

为研究牦牛转移因子(transfer factor,TF)对藏绵羊外周血淋巴细胞增殖的作用,试验采用MTT法探索不同浓度淋巴细胞、犊牛血清(FCS)、刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)对淋巴细胞增殖的影响。在最佳条件下,探讨牦牛TF对藏绵羊外周血淋巴细胞增殖的影响。结果表明,当藏绵羊淋巴细胞浓度为5.4×10⁶个/mL,犊牛血清含量为8%,ConA为1 μg/mL时,刺激效果最佳,且TF单独或协同丝裂原时,对淋巴细胞都有促进增殖的效果,且最佳浓度为1.5 mg/mL。体内注射TF后,各剂量组在注射第3天时,淋巴细胞再次受到TF单独或协同ConA刺激时,其增殖效果与细胞组单独增殖效果比较,差异不显著(P>0.05),至第5~7天时,其增殖效果明显高于细胞组,差异显著(P<0.05)。注射2 mL剂量组转化增殖效果优于1 mL和3 mL剂量组,差异显著(P<0.05)。说明牦牛TF能够有效增强机体免疫力,是一种很好的免疫增强剂。     

绿原酸对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响

为分析绿原酸(CHA)对小鼠脾脏淋巴细胞增殖、分泌功能的影响。无菌操作分离小鼠脾脏,制备脾脏淋巴细胞并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入诱导剂刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)以及0、40、80、160 μg/mL不同浓度的CHA,经过不同时间培养后,采用MTT法检测T和B淋巴细胞的增殖,ELISA和Griess法分别检测淋巴细胞分泌TNF-α和NO的水平。结果表明：低浓度和中浓度CHA提高ConA/LPS诱导的T、B淋巴细胞增殖和存活,而高浓度CHA明显抑制其细胞增殖转化;CHA促进小鼠脾脏T、B淋巴细胞分泌NO;CHA对T淋巴细胞分泌TNF-α影响不大,中浓度CHA可显著促进脾脏B淋巴细胞分泌TNF-α,高浓度反而抑制其分泌;CHA促进环磷酰胺处理的小鼠脾脏T和B淋巴细胞体外增殖,但对其NO分泌量影响不明显。结果提示CHA可能通过影响淋巴细胞增殖和细胞因子分泌而表现免疫调节作用。     

大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结中淋巴细胞增殖的影响

为了研究大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结中淋巴细胞增殖与活化的影响,并揭示大豆异黄酮提高奶牛免疫性能的作用机理。试验采用6×2（浓度×时间）实验设计,各浓度梯度的大豆异黄酮 (100.00、25.00、5.00、1.00、0.25、0.05 μg/mL)与淋巴细胞共育培养48 h和60 h后,用酶标仪在570 nm处测得各孔的OD值。结果表明：（1）添加0.05~25 μg/mL大豆异黄酮能够促进奶牛肠系淋巴结中淋巴细胞的增殖,在添加量为5 μg/mL时达到极显著的促进作用,但大豆异黄酮添加剂量达100 μg/mL时显著抑制肠系淋巴结淋巴细胞的增殖;（2）100 μg/mL和25 μg/mL大豆异黄酮添加组极显著抑制奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.01),而1 μg/mL浓度组则显著促进奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.05),其余各浓度组对奶牛脾脏淋巴细胞有抑制作用,但差异不显著。     

牦牛脾脏转移因子对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响

为了研制一种能够增强动物抗病力的生物活性免疫制剂。采用冻融-透析法提取牦牛脾脏中非特异性转移因子(nTF),并用MTT法检测牦牛TF对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响。结果表明：（淋巴细胞+ 刀豆蛋白 +TF）对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖效果优于（淋巴细胞+ TF）组和（淋巴细胞+脂多糖+TF）组,差异显著(P<0.05);注射TF组对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖的效果优于注射生理盐水对照组 (P<0.05)。牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖有促进作用,协同刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)对淋巴细胞增殖的效果有增强趋势。     

Caffeoyl Glycoside对小鼠免疫细胞功能的影响

本实验室从胡黄连根茎分离到1,6-di-O-caffeoyl-β-D-glucopyranoside单体Caffeoyl Glycoside（CG）,体外试验测定其对小鼠免疫细胞功能的影响。通过MTT法检测CG对Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖,NK细胞对K562细胞杀伤活性的影响,以及小鼠腹腔巨噬细胞（PMΦ）能量代谢水平;CG对PMΦ吞噬中性红能力的影响。CG在一定剂量范围内单独或者协同非特异性丝裂原（Con A或LPS）作用均能够显著增强小鼠脾淋巴细胞、PMΦ的增殖能力（P〈0.05或P〈0.01）,CG单独作用就能显著提高NK对K562细胞的杀伤活性（P〈0.05或P〈0.01）。CG在体外对小鼠主要免疫细胞的增值和功能方面具有显著的促进作用（P〈0.05或P〈0.01）。研究结果显示CG具有特异性与非特异性的免疫增强作用。     

MTT法检测大鼠外周血淋巴细胞增殖反应探讨与应用

为了更精准简捷地评价机体的细胞免疫状态,采用MTT比色分析法检测大鼠外周血淋巴细胞的增殖能力,并对试验的最适条件进行了探讨,然后将该法应用到Transwell共培养体系中以评价H9N2 AIV感染内皮细胞后对跨内皮淋巴细胞增殖能力的影响。结果表明：在96孔细胞培养板中接种密度为1.25×10⁶个/mL的淋巴细胞于含10% FBS的RPMI 1640培养基中培养的最适时间为48 h。感染病毒后,跨内皮淋巴细胞的增殖明显受抑制;内皮完整状态下,淋巴细胞和病毒共孵育后,活病毒的量降低,而当内皮不存在或被病毒感染后,这一现象消失。结果证明作为机体细胞免疫功能评价指标之一的淋巴细胞增殖能力可采用改良后的MTT法检测。     

连翘酯苷对内毒素作用下RAW264.7细胞功能的影响

为探讨连翘酯苷(FS)对内毒素(LPS)作用下RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α、吞噬功能的影响。收集处于对数生长期细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养细胞,在培养液中分别加入脂多糖(LPS)以及不同浓度40、80、160 μg/mL的FS共培养。采用MTT法检测细胞增殖,Griess和ELISA法分别检测RAW 264.7细胞分泌NO和TNF-α量,染色法检测细胞吞噬能力。结果表明：低、中剂量FS可显著促进细胞增殖,而中和高剂量FS可缓解LPS对细胞的刺激作用;与LPS组比较,FS对LPS刺激的RAW 264.7细胞分泌NO影响不明显,但中、高剂量FS明显促进RAW 264.7细胞分泌;LPS与FS均能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。FS对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α以及吞噬功能都有影响,结果提示这可能是连翘酯苷调节细胞免疫功能的机制之一。     

苜蓿多糖对小鼠淋巴细胞增殖和NK细胞活性影响的研究

为了探讨苜蓿多糖对小鼠免疫功能的影响,从苜蓿中提取苜蓿多糖,通过体外苜蓿多糖对淋巴细胞增殖和NK细胞活性影响的研究,初步确定其免疫调节活性。采用MTT法,检测苜蓿多糖对正常Balb/c小鼠体外脾淋巴细胞增殖的影响和NK细胞对K562细胞杀伤活性的影响。结果表明：苜蓿多糖可以单一激活促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,可以协同ConA刺激T细胞增殖,或协同LPS刺激B细胞增殖,提示苜蓿多糖能够调节机体的细胞免疫和体液免疫功能;苜蓿多糖可以显著地增强NK细胞对K562靶细胞的杀伤活性,提示苜蓿多糖能显著地增强机体非特异性免疫功能。因此,说明苜蓿多糖具有很好的免疫调节效果。     

葡萄籽原花青素对大鼠脾脏淋巴细胞与肝细胞增值的影响

为了研究葡萄籽原花青素(Procyanidin from Grape Seed,GSP)对大鼠脾脏淋巴细胞与肝细胞增值与活化的影响,揭示GSP提高机体免疫性能的作用机理,为后续的试验分组提供理论依据。试验采用不同终浓度的GSP培养液[0.00 （对照）、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、15.00]与大鼠脾脏淋巴细胞, [0.00 （对照）、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、15.00、20.00、25.00 μg/mL ]与大鼠肝细胞系IAR-20共育。在12、24、48 h后,用酶标仪在490 nm处测得各孔的OD值。结果显示：（1）添加0.05~5.00 μg/mL的GSP促进淋巴细胞增值,当浓度超过10.00 μg/mL将抑制淋巴细胞增值。（2）添加0.05~10.00 μg/mL 的GSP促进肝细胞增值,当浓度超过20.00 μg/mL 将抑制肝细胞增值。（3）一定范围内,GSP对淋巴细胞和肝细胞的促增值作用有浓度和时间依赖性。葡萄籽原花青素能够促进体外培养大鼠的脾脏淋巴细胞和肝细胞增值活性,具有提高细胞抗氧化和细胞免疫的作用。     

留兰香提取物体外抗菌作用初步研究

【摘要】 目的：研究留兰香提取物的体外抗菌作用。方法：采用管碟法测定留兰香提取物抑菌圈大小,采用试管2倍稀释法测定留兰香提取物对4种动物病原菌的最低抑菌浓度(MIC),判定抗菌效果。结果：留兰香水煎剂、醇提物、挥发油对4种动物病原菌有不同程度的抗菌作用,尤其是对猪葡萄球菌抑制效果比较明显,留兰香水煎剂Ⅰ的MIC为0.0313g/ml,醇提物Ⅲ的MIC为0.0625g/ml,挥发油Ⅴ的MIC为2.5μl/ /ml,挥发油Ⅵ的MIC为2.5μl/ /ml。结论：留兰香水煎剂、醇提物及挥发油体外有一定抑菌作用,不同提取方法所得提取物对试验菌抑制效果不同。     

狗舌草提取物对L1210细胞的体外作用研究

利用淋巴性白血病L1210细胞，以单猪屎豆碱、槲皮素和环磷酰 胺为参照，检查狗舌草60%乙醇提取物 （EX） 对L1210细胞生长情况的影响; 通过L1210细 胞台盼蓝拒染率的测定，研究EX对L1210细胞活力的影响。结果发现，一定剂量的EX、单猪 屎豆碱、槲皮素和环磷酰胺具有明显的体外抑制淋巴性白血病L1210细胞的作用，且这种作 用具有明显的剂量依赖性。其中EX和槲皮素在体外对L1210细胞的细胞毒性较小，而单猪屎 豆碱在体外对L1210细胞的细胞毒性较大。     

蟛蜞菊粗提物对玉米螟拒食作用研究初报

为了充分利用中国的植物资源,开发新型的环境和谐型农药,以蟛蜞菊为试验材料,采取叶片浸渍法,测定该植物不同部位对亚洲玉米螟的拒食活性。结果表明：蟛蜞菊4个不同部位中,以花的甲醇提取物拒食效果最好,24h对亚洲玉米螟3龄幼虫的AFC50为3392.28μg/ml,对照印楝为2228.72μg/ml。其次为根,24h的AFC50为6603.34μg/ml。叶和茎的拒食效果较差,其AFC50仅分别为12032.17μg/ml 和14046.68μg/ml。     

中草药提取物对桃褐腐菌（Monilinia fructicola）抑制作用增效组合筛选

用菌丝生长速率法测定了虎杖、黄柏、厚朴、松萝等4种中草药提取物对桃褐腐菌的抑制作用，经线性回归计算50%抑制时的有效浓度（EC50）分别为133.8μg/ml、40.6μg/ml、90.6μg/ml、3.4μg/ml。根据EC50，用等效线法相加作用线的6等分点设置配比，共毒因子法判断增效标准。结果表明，各种配比的混配剂中黄柏+松萝为最佳增效作用组合，其中以8：1增效作用最显著。     

小麦秸杆浸提物的化感作用研究

以大豆、小麦、黄瓜3种作物为受体，对皖麦19品种的小麦秸杆的化感作用进行了研究。结果表明，小麦秸杆的浸提物对3种作物的种子萌发率有一定的抑制作用，与对照相比，0．10g／ml浓度下的抑制作用显著；0．05g／ml、0．075g／ml两个浓度下的抑制作用不显著；小麦秸杆浸提物对3种受体作物的苗高、根长和干物质积累均表现出低促高抑的浓度效应，小麦、黄瓜为0．05g／ml的秸杆浸提效果最好，大豆以0．075g／ml效果最好。     

猪苓多糖苯酚-硫酸法测定条件的优选

【目的】建立猪苓多糖快速定量分析方法;【方法】苯酚-硫酸法,以葡萄糖含量为指标,检测波长490nm,用L9（34）正交试验设计优选测定条件;【结果】1.0ml样液,加5%苯酚液0.8ml、硫酸5.0ml,100℃水浴保温15min结果最佳;硫酸加量对结果影响最大,水浴温度次之,苯酚量影响最小;葡萄糖含量呈线性关系范围在5.0～40.0μg/ml;精密度RSD=1.58%(n=6);测定稳定性好(3h内);平均回收率99.22％,RSD=1.87％（n=3）;实测猪苓菌丝多糖含量3.46%,RSD=2.07%(n=4)。【结论】本优选法灵敏度高、操作简便、数据稳定性好、误差小、重现性好,值得推广