类圆环病毒因子P1感染对猪外周血T淋巴细胞含量和增殖活性的影响

探讨类猪圆环病毒因子P1感染对猪细胞免疫功能的影响.将12头30日龄广西巴马小型猪随机分成试验组和对照组,每组6头.在猪感染P1后第3,8,17,24,31和40天,采用血常规和单色流式细胞术分析猪外周血T淋巴细胞的含量,通过WST法对其增殖活性进行检测.P1感染组的T淋巴细胞数量(绝对数和相对数)整体趋势低于对照组,而两组的T淋巴细胞增殖活性没有显著差别.P1感染对机体的细胞免疫功能有一定程度的影响.     

猪附红细胞体对树突状细胞成熟的影响研究

为了观察树突状细胞(dendritic cell,DC)2.4的表型和功能变化,以反映猪附红细胞体(Mycoplasma suis,M. suis)对DC成熟分化的影响。通过将DC2.4分成5组：空白对照组：不进行任何处理;实验组：M. suis 0.1、1.0、10.0 μL/mL组,分别在培养液中加入相应剂量的纯化M. suis;阳性对照组：加入脂多糖,终浓度1 μg/ml。应用流式细胞术检测DC2.4培养24 h后细胞表面抗原CD80、CD86、MHC-Ⅱ类分子的表达,并采用MTT法检测同基因混合淋巴细胞反应观察DC2.4对T细胞的抗原提呈能力。流式结果表明：M. suis刺激DC2.4后抑制表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ的表达,表达量均低于阳性对照组(P<0.01),且对DC2.4的抑制作用呈现剂量依赖。混合淋巴反应中M.suis显著抑制DC2.4对T细胞的激活能力,且阳性对照组与空白组之间差异有显著性意义(P<0.01)。本研究证明了M. suis可以抑制DC2.4的分化与成熟,M. suis刺激的DC2.4在免疫反应中发挥负性调节作用,为M. suis的免疫研究提供科研数据。     

绿原酸对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响

为分析绿原酸(CHA)对小鼠脾脏淋巴细胞增殖、分泌功能的影响。无菌操作分离小鼠脾脏,制备脾脏淋巴细胞并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入诱导剂刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)以及0、40、80、160 μg/mL不同浓度的CHA,经过不同时间培养后,采用MTT法检测T和B淋巴细胞的增殖,ELISA和Griess法分别检测淋巴细胞分泌TNF-α和NO的水平。结果表明：低浓度和中浓度CHA提高ConA/LPS诱导的T、B淋巴细胞增殖和存活,而高浓度CHA明显抑制其细胞增殖转化;CHA促进小鼠脾脏T、B淋巴细胞分泌NO;CHA对T淋巴细胞分泌TNF-α影响不大,中浓度CHA可显著促进脾脏B淋巴细胞分泌TNF-α,高浓度反而抑制其分泌;CHA促进环磷酰胺处理的小鼠脾脏T和B淋巴细胞体外增殖,但对其NO分泌量影响不明显。结果提示CHA可能通过影响淋巴细胞增殖和细胞因子分泌而表现免疫调节作用。     

板蓝根多糖对体外培养鸡脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响

采用水提醇沉法提取板蓝根多糖,应用蒽酮-硫酸法进行多糖含量测定。体外培养鸡脾脏淋巴细胞,用固相夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定蛋白激酶c(PKC)活性,分析板蓝根多糖对鸡脾脏淋巴细胞PKC活性的影响。结果显示,加入板蓝根多糖组（100mg/ml）与空白对照组的PKC的活性有显著差异(P<0.05),表明板蓝根多糖能引起鸡脾脏淋巴细胞蛋白激酶c活性明显升高。     

连翘酯苷对内毒素作用下RAW264.7细胞功能的影响

为探讨连翘酯苷(FS)对内毒素(LPS)作用下RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α、吞噬功能的影响。收集处于对数生长期细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养细胞,在培养液中分别加入脂多糖(LPS)以及不同浓度40、80、160 μg/mL的FS共培养。采用MTT法检测细胞增殖,Griess和ELISA法分别检测RAW 264.7细胞分泌NO和TNF-α量,染色法检测细胞吞噬能力。结果表明：低、中剂量FS可显著促进细胞增殖,而中和高剂量FS可缓解LPS对细胞的刺激作用;与LPS组比较,FS对LPS刺激的RAW 264.7细胞分泌NO影响不明显,但中、高剂量FS明显促进RAW 264.7细胞分泌;LPS与FS均能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。FS对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α以及吞噬功能都有影响,结果提示这可能是连翘酯苷调节细胞免疫功能的机制之一。     

苜蓿多糖对小鼠淋巴细胞增殖和NK细胞活性影响的研究

为了探讨苜蓿多糖对小鼠免疫功能的影响,从苜蓿中提取苜蓿多糖,通过体外苜蓿多糖对淋巴细胞增殖和NK细胞活性影响的研究,初步确定其免疫调节活性。采用MTT法,检测苜蓿多糖对正常Balb/c小鼠体外脾淋巴细胞增殖的影响和NK细胞对K562细胞杀伤活性的影响。结果表明：苜蓿多糖可以单一激活促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,可以协同ConA刺激T细胞增殖,或协同LPS刺激B细胞增殖,提示苜蓿多糖能够调节机体的细胞免疫和体液免疫功能;苜蓿多糖可以显著地增强NK细胞对K562靶细胞的杀伤活性,提示苜蓿多糖能显著地增强机体非特异性免疫功能。因此,说明苜蓿多糖具有很好的免疫调节效果。     

海南岛五指山土壤指纹铝与交换性酸关系的研究

采用指纹电荷(chargefingerprint)法研究了海南岛五指山土壤指纹铝(指纹电荷法测定的CECt由Ca2 和Al3 两部分组成,其中Al3 被称为指纹铝)和交换性酸(用氯化钾交换-中和滴定法测定)之间的关系。结果表明:海南岛五指山土壤交换性酸主要由交换性铝构成,土壤交换性氢含量不高。在此项研究所设定的不同的土壤pH范围内(7.0、6.4、5.8、5.2、4.6、4.0),土壤中指纹铝随土壤pH的降低而增加且当pH≤5.2时,土壤指纹铝含量随土壤pH的降低迅速增加。当pH≤5.2时,交换性氢、交换性铝、交换性酸都与指纹铝含量呈极显著正相关;pH≥5.8时,交换性氢、交换性铝、交换性酸均与指纹铝含量不相关。因此认为,pH在5.2与5.8之间的某一pH值为土壤中交换性铝和指纹铝数量的突变点。同时可以将土壤交换性酸及其组成作为研究土壤中铝行为特征及预测土壤酸化对土壤电荷保持能力影响的一个重要指标。     

转耐盐基因水稻的PCR检测方法及其分子辅助育种

研究采用改良CTAB法和磁珠自动提取法提取水稻种子基因组DNA,通过对水稻内源SPS基因、ThST3和Ubiquit-in启动子间构建特异序列进行PCR扩增,扩增产物结合排枪凝胶电泳实现快速检测。其中PCR扩增内源SPS基因的结果表明,采用改良CTAB法和磁珠自动提取法可用于市售水稻种子和转基因种子的DNA提取。实验合成的构建特异引物以及建立的PCR扩增反应体系能特异性地检测转耐盐基因水稻Theli。该方法检测灵敏度高,绝对检测低限达17.3×10-2ng,相对检测低限为0.41%,能有效地对转基因水稻ThST 3进行鉴定;稳定性好,可完全满足转基因水稻的定性检测、监督和标识管理需要。同时可用于对转基因水稻的辅助选择(MAS)育种。     

水稻显性早熟基因Ehd的SSR标记定位

以籼稻品种广陆矮4和粳稻品种台中65为亲本构建高世代回交分离群体,选用分布于水稻全基因组的145个SSR标记对亲本及抽穗期早熟基因进行分析.结果表明,114个标记在亲本间具有多态性,多态率78.6%;在BC3F1群体中,检测到10个标记的基因型来源于供体亲本广陆矮4号;在BC3F2定位群体中,早熟植株数与晚熟植株数的分离比例为3:1,早熟植株平均比晚熟植株提早抽穗21 d;通过SSR标记与抽穗期共分离分析将显性早熟基因Ehd界定在分子标记RM271和RM258之间;Ehd与标记RM184和RM271紧密连锁,遗传距离分别为2.6 cM和2.1 cM,此结果为该基因分子标记辅助选择奠定了基础.     

蟾酥注射液对小鼠淋巴细胞影响的研究

为了研究蟾酥注射液对机体淋巴细胞免疫功能的影响,选择不同浓度的蟾酥注射液作为试验组,分别与小鼠的脾淋巴细胞共同孵育48 h,检测细胞增殖水平的影响;用ELSIA法检测蟾酥注射液对几种重要的细胞因子(IFN-γ、IL-2和IL-12)分泌的影响;应用流式细胞技术检测蟾酥注射液对小鼠脾中T淋巴细胞CD4/CD8表达和细胞周期的影响。结果显示,蟾酥注射液在一定剂量范围内能够显著增强小鼠脾淋巴细胞的增殖能力;能够显著增强IFN-γ、IL-2和IL-12分泌;能够显著提高小鼠脾中CD4+ CD8-和CD4- CD8+表型的T淋巴细胞亚群百分率;能够显著提高小鼠脾中淋巴细胞进入S期的百分率。表明蟾酥注射液在体外能够显著提高淋巴细胞的增殖及功能,说明蟾酥注射能显著地增强机体特异性免疫功能。     

猪转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

无菌采取犬抗凝血，分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验，探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素（PHA-P）、犊牛血清（FCS）对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上，研究不同浓度猪转移因子（transfer factor, TF）对犬淋巴细胞增殖的影响，增殖的结果用MTT法测定。试验结果表明，当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml，PHA-P为12.5μg/ml，FCS为10%时，淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下，猪TF浓度在0.195~25mg/ml时，对淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用，猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml，且猪TF单独作用于淋巴细胞的效果优于与PHA-P的协同作用。试验结果证实，异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果，同时本研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了试验依据。     

犬、猪转移因子对犬淋巴细胞体外转化增殖影响的比较研究

无菌采取犬抗凝血，分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验，探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素P（PHA-P）、犊牛血清（FCS）对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上，研究不同浓度犬、猪转移因子（transfer factor, TF）对犬淋巴细胞增殖的影响，增殖的结果用MTT法测定。结果表明，当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml，PHA-P为12.5μg/ml，FCS为 10%时，淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下，犬、猪TF浓度在0.195~25mg/ml时，对淋巴细胞转化增殖均有促进作用，但犬、猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml，且犬、猪TF单独作用于淋巴细胞的效应明显优于与PHA-P的协同作用。结果证实，同源或异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果，同时研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了实验依据。     

绿色荧光蛋白基因标记的固氮菌DX120E在甘蔗植株内的定殖

为了探索甘蔗固氮菌DX120E菌株侵入根的方式以及菌株在甘蔗植株内的定殖规律, 确定人工接种固氮菌适宜的侵染浓度和定殖特点, 采用绿色荧光蛋白(GFP)标记的固氮菌DX120E接种甘蔗组培苗, 以荧光显微镜观察其侵染和定殖情况, 以抗生素抗性标记法和平板分离计数法测定DX120E菌株的种群动态。结果表明, 菌株DX120E在2个甘蔗品种的根、叶鞘和叶内均能定殖, 定殖菌量依次均为根>叶鞘>叶; 不同接种浓度下, 最大定殖数量无显著差异, 10² CFU mL^–1的接种量足够侵入甘蔗并积累定殖。DX120E从甘蔗根表面的裂隙、主根和侧根发生处及根的断裂处均可侵入, 主要在根表面细胞间隙和细胞内大量定殖, 同时也可迁移到叶片的叶肉细胞和维管束细胞中定殖。     

丹皮酚对LLO诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1的影响

为了研究李斯特菌溶血素(LLO)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)分泌一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）的影响,阐释作为治疗李斯特菌病方剂中单味中药丹皮的有效成分丹皮酚(Pae)调节LLO诱导细胞分泌紊乱的作用机理,试验将培养的RIMVECs分为LLO+Pae组、LLO组、Pae组、空白组,通过MTT比色法测定细胞生长情况;硝酸还原酶法测定细胞上清液细胞因子NO浓度以及酶联免疫法检测ET-1浓度;并用原位杂交方法对结果进行验证;结果显示LLO组与其他各组相比：细胞增殖显著性下降;12小时内,NO、ET-1分泌量高于正常水平,并导致NO／ET-1比值失衡（下降）;而LLO+Pae组NO/ET-1的比值显著上调;由此可见,Pae可以通过改善LLO引起细胞因子NO、ET-1失衡,有效调节细胞微环境,部分解释了中药丹皮治疗李斯特菌病的作用机理。     

黄芪多糖对氟苯尼考诱导的免疫抑制小鼠保护作用

为了调节动物免疫状态和改善机体防御能力提供试验依据。利用MTT法和ELISA法探讨黄芪多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用,建立氟苯尼考诱导免疫抑制小鼠模型,通过称重计算脾脏指数;MTT法检测T、B淋巴细胞增殖反应;双抗夹心ELISA方法检测小鼠血清中IgG,IgG1,IgG2b抗体水平。结果表明：黄芪多糖能够提高免疫抑制小鼠的脾脏指数,在ConA或者LPS刺激下提高T、B淋巴细胞增殖率,提高抗体水平。黄芪多糖在一定剂量下对氟苯尼考诱导的免疫抑制小鼠有一定的保护作用。     

牦牛脾脏转移因子对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响

为了研制一种能够增强动物抗病力的生物活性免疫制剂。采用冻融-透析法提取牦牛脾脏中非特异性转移因子(nTF),并用MTT法检测牦牛TF对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响。结果表明：（淋巴细胞+ 刀豆蛋白 +TF）对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖效果优于（淋巴细胞+ TF）组和（淋巴细胞+脂多糖+TF）组,差异显著(P<0.05);注射TF组对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖的效果优于注射生理盐水对照组 (P<0.05)。牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖有促进作用,协同刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)对淋巴细胞增殖的效果有增强趋势。     

山羊松果体细胞原代培养及其生物学特性研究

目的：观察体外培养山羊松果体细胞的增殖情况和功能状态,为进一步提高季节性繁殖动物的繁殖率提供理论基础。方法：对松果体细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖情况,5-HT免疫组织化学染色显示细胞的功能状态。结果：松果体细胞呈圆形或多角形,折光性强,细胞体积有增大趋势;细胞有明显的增殖现象,大约于11d达到高峰;5-HT阳性细胞数量随细胞的增殖而增加。结论：山羊松果体细胞在体外增殖旺盛。     

犬淋巴细胞转化增殖试验最佳条件的确定

本试验选择杂种牧羊犬作为实验犬,用MTT法检探讨了不同浓度犊牛血清（FCS）、淋巴细胞、植物血凝素P（PHA-P）和刀豆蛋白A（ConA）对犬淋巴细胞增殖的影响。确定了犊牛血清含量为10%,淋巴细胞浓度为5×106个/mL,用丝裂原PHA-P 刺激的最佳浓度为12.5ug/mL时,MTT法测定能够刺激犬淋巴细胞转化增殖,但t检验分析表明其促进淋巴细胞增殖的效果并不显著;当其它条件不变,所用的丝裂原为Con A时,它在浓度为0.5～2.5μg/mL范围内均可以显著刺激T细胞的增殖（P<0.05）,且在浓度为2.5μg/mL时刺激效果最佳