土木香提取物抑制金黄色葡萄球菌毒力因子分泌作用的研究

本研究旨在分析土木香提取物对金黄色葡萄球菌主要毒力因子分泌的影响及机制研究,以耐药性金黄色葡萄球菌USA 300为研究对象,通过醇提法获取土木香提取物,根据主要毒力因子蛋白表型功能(溶血活性和TNF-α含量释放分析),利用蛋白免疫印迹和荧光定量PCR分析检测不同浓度土木香提取物对金黄色葡萄球菌主要毒力因子分泌的影响及机制。无抗菌活性的土木香提取物与金黄色葡萄球菌共培养后可显著抑制培养物上清溶血活性及其诱导小鼠脾淋巴细胞TNF-α释放活性,蛋白免疫印迹分析表明,土木香提取物处理可显著降低金黄色葡萄球菌α-溶血素、肠毒素A和中毒休克综合征毒素-1(TSST-1)的分泌,荧光定量PCR试验结果进一步表明土木香提取物与金黄色葡萄球菌共培养后降低金黄色葡萄球菌α-溶血素、肠毒素A和TSST-1编码基因的转录及金黄色葡萄球菌二元调控系统agr的转录。本研究结果表明,土木香提取物通过抑制agr二元调控系统转录及其毒力因子编码基因的转录而降低毒力因子的分泌,土木香提取物是一种潜在的新型抗金黄色葡萄球菌感染先导化合物。     

黄芩提取物对单增李斯特菌溶血素的作用

为了研究黄芩提取物对单增李斯特菌溶血素(LLO)溶血活性及单增李斯特菌致病力的影响,试验采用测定最小抑菌浓度(MIC)、绘制生长曲线、分析溶血活性、蛋白免疫印迹分析和细胞毒性试验的方法分析了黄芩提取物对单增李斯特菌增殖、单增李斯特菌溶血素溶血活性和单增李斯特菌对细胞的毒性作用。结果表明:黄芩提取物可通过直接中和单增李斯特菌溶血素活性而降低溶血活性,且这一作用与黄芩提取物的抗菌活性无关;在细菌与细胞共培养体系内加入黄芩提取物可有效抑制细菌对细胞介导的细胞毒性作用。说明黄芩提取物是一种潜在的抗单增李斯特菌感染的先导化合物。     

蒽酮-硫酸比色法检测多糖条件的优化

本研究通过单因素实验和L9(33)正交实验优化蒽酮-硫酸比色法检测多糖含量的条件,研究反应温度、反应时间、蒽酮-硫酸液的体积对吸光度值的影响。结果表明,蒽酮-硫酸比色法检测的糖含量的最优条件为蒽酮-硫酸2 mL,于100℃反应10 min。验证实验结果表明,总标糖获得的标准曲线方程A=0.005W-0.0162,r=0.9998,优于葡萄糖标准曲线方程。在620 nm下测定,能得到较高的吸光度值,重现性好。     

华蟾毒精对胃腺癌细胞MGC-803作用的研究

研究华蟾毒精（cinobufagin,CBG）体外对人胃腺癌细胞MGC-803的抑制作用,并初步探讨其抗肿瘤的作用机制。MTT法测定CBG对胃腺癌MGC-803细胞的生长抑制情况;采用光镜观察CBG对人胃腺癌细胞MGC-803形态的影响;流式细胞术检测CBG对MGC-803细胞的抑制作用、细胞周期及细胞早期凋亡的影响。一定浓度范围内CBG对MGC-803细胞的增殖有剂量、时间依赖性抑制作用;光镜下可见细胞形态明显发生变化,细胞变圆,分泌颗粒增多,细胞折光性下降,大部分细胞脱壁;流式细胞仪检测MGC-803细胞,G1期细胞减少,大量细胞停滞在G2/M期,凋亡细胞增多。CBG对MGC-803细胞的抑制作用与诱导其细胞阻滞及凋亡密切相关。     

29种中药提取物抗结核药物敏感性研究

本研究选取29种对结核分支杆菌和其他呼吸疾病有治疗作用生长在中国的药用植物,通过MABA (Microdilution alamar blue assay) 药敏实验方法检测了这些药物的乙醇和水提取物对结核分支杆菌M. tuberculosis H37Rv的敏感性。筛选到金银花、大蓟、小蓟和水车前等有显著的抗结核活性,为进一步考查其单体化合物的作用机制和有新型作用机制的抗结核药物开发打下基础。     

土木香提取物对金黄色葡萄球菌分选酶A抑制作用

金黄色葡萄球菌耐药性较为严重,细菌性分选酶A在细菌细胞壁表面毒力蛋白锚定过程中发挥着重要作用,是细菌性感染防治的重要潜在靶点。研究通过酶活抑制试验、细胞外基质黏附试验、生物被膜形成试验和细菌侵袭试验进行了分选酶A抑制剂筛选和活性分析。结果表明:土木香提取物可显著抑制金葡菌分选酶A活性,土木香提取物处理后可显著降低金葡菌与细胞外基质黏附及金葡菌生物被膜形成。在金葡菌与宿主细胞共感染体系内加入土木香提取物后可显著降低细菌对宿主细胞的侵袭作用。说明土木香提取物可通过靶向分选酶从而抑制金葡菌的致病力,是潜在的抗金葡菌感染先导复合物。     

山东省及周边地区肉鸭源大肠杆菌流行病学调查及耐药性分析

为建立鸭大肠杆菌快速鉴定及药敏检测方法,筛选合适的抗生素,本试验从山东省12个、河北4个及河南4个地区养殖场或养殖小区采集到447份疑似感染鸭大肠杆菌的肉鸭肝脏和脑部组织病料,共分离到300株大肠杆菌,分离率为67.11%。利用大肠杆菌phoA基因为目的基因,建立了PCR快速鉴定鸭源大肠杆菌的方法。该PCR检测方法可快速鉴定鸭源大肠杆菌,鉴定效率显著提高。根据美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)标准及琼脂稀释法药敏试验原理,建立了96点接种药敏检测盒快速检测方法,结果表明:硫酸多粘菌素、甲磺酸培氟沙星抑菌率相对较高;卡那霉素、氨苄西林、氟苯尼考抑菌率相对较低。根据药敏检测结果可快速筛选适用的敏感药物和剂量,并交替轮流使用抗生素。     

甘草总黄酮对金黄色葡萄球菌的作用研究

为了研究甘草总黄酮对金葡菌的抗菌活性以及亚抑菌浓度的甘草总黄酮对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响。首先,采用微量肉汤稀释法测定了甘草总黄酮对6株金葡菌标准菌株的最小抑菌浓度;其次,采用溶血试验、蛋白免疫印迹试验以及荧光定量PCR试验分别在表型功能、蛋白表达和基因转录3个层次确证了其对α-溶血素表达的影响。结果表明：甘草总黄酮具有良好的抗金葡菌作用,其最小抑菌浓度范围为4~16 μg/mL,而亚抑菌浓度的甘草总黄酮能浓度依赖性地降低金葡菌α-溶血素的分泌。     

白杨素对金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB表达的影响

为研究白杨素对金黄色葡萄球菌的抗菌活性以及该化合物对金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB表达的影响,应用肉汤微量稀释法检测了白杨素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,采用TNF-α释放试验、蛋白免疫试验以及荧光定量PCR等方法分别从蛋白表型、蛋白水平和基因水平3个层面上考察了白杨素对金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB分泌的影响。结果表明:白杨素几乎无抗金黄色葡萄球菌活性,其MIC1 024μg/m L。低浓度白杨素(2~16μg/m L)即可抑制金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB的分泌,且这一抑制作用呈现剂量依赖性。     

丝状真菌蛋白质组分析

试验建立液氮冷冻研磨、蜗牛酶消化破壁、尿素裂解、同时结合硫酸铵沉淀预分离的方法研究丝状真菌蛋白质组,得到的肽片段混合物通过二维液相色谱分离检测,进行蛋白质组分析。本方法提高了蛋白的分离效率和提取数量,特别是对于那些功能重要但丰度低的蛋白,适合于丝状真菌蛋白组学研究中目的蛋白的提取。试验共鉴定了396个蛋白,包括了参与各种细胞生理过程的蛋白,为进一步开展动物丝状真菌蛋白质组学研究打下了良好的基础。