江苏地区设施茄果类蔬菜高效机械化生产模式探索

为实现江苏地区设施蔬菜安全、高效、优质生产建设,本文以农业机械化工程技术与农艺栽培技术融合模式创新为途径,围绕茄果类机械化种植关键环节,进行了机械装备选型和关键实施要点的阐述,探索构建可复制的8m跨连栋大棚茄果类蔬菜高效机械化高效生产技术模式,以推进全省设施茄果类蔬菜种植全程机械化进程。     

新现猪Delta冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用

【目的】猪Delta冠状病毒（Porcine Deltacoronavirus, PDCoV）是近年来新发现的可引起猪只,特别是新生仔猪腹泻的冠状病毒,其引发的腹泻具有较高的发病率和死亡率,是造成新生仔猪死亡的重要原因之一。试验拟建立新现PDCoV RT-PCR检测方法,并调查当前江西腹泻猪群中PDCoV的感染情况。【方法】通过对GenBank数据库中PDCoV全基因组序列的比对分析,找出保守序列,用Primer 3.0在线软件设计1对扩增PDCoV核衣壳（N）蛋白基因片段的特异性引物,基于该引物建立PDCoV RT-PCR检测方法;用建立的方法检测腹泻猪粪便及肠道样品,挑选阳性扩增产物进行克隆、测序;用本试验获得的PDCoV序列与其他国家或地区的PDCoV序列以及猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）共同构建进化树,分析PDCoV各毒株及其与PEDV和TGEV之间的进化关系;以PEDV、TGEV、猪库布病毒（PKoV）、猪星状病毒（PAstV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）及猪瘟病毒（CSFV）RNA为模板验证引物的特异性;构建PDCoV核衣壳蛋白基因片段重组质粒,并以系列稀释的重组质粒为模板确定所建立的PDCoV RT-PCR方法的敏感性;应用建立的RT-PCR方法调查249份2012-2015年江西省猪群腹泻样品中PDCoV的存在情况,随机抽取一定数量的RT-PCR阳性扩增产物进行克隆、测序进一步验证反应的特异性。【结果】①以腹泻猪粪便样品RNA为模板,应用所设计的特异性引物扩增出了329 bp的单一条带,与预期目的片段大小一致,扩增产物经克隆后测序,将获得的序列与NCBI GenBank数据库序列进行比对,比对结果表明试验所获得的序列与数据库中PDCoV序列的同源性高达99.1%,证明所扩增的序列属于PDCoV;②将8条本试验获得的PDCoV N基因片段序列与18株其他国家或地区的PDCoV毒株以及PEDV、TGEV的相应N基因片段序列构建进化树,结果表明26条PDCoV序列属于同一个分支,而PEDV和TGEV则分别属于不同的分支。试验获得的PDCoV序列与韩国PDCoV毒株KNU14-04亲缘关系最近,同源性高达99.1%;与两株香港毒株HKU 15-44和HKU 15-155亲缘关系相对较远;③本试验建立的RT-PCR方法特异性强,仅能扩增出PDCoV,而对PEDV、TGEV、PKoV、PAstV、PRRSV及CSFV核酸无交叉扩增现象;④所建立的RT-PCR方法灵敏度高,将含扩增片段的重组质粒以1.0×10⁶拷贝/μL为起始浓度依次10倍稀释至1.0×10¹拷贝/μL作为模板验证方法的灵敏度,结果表明所建立的方法对PDCoV最低可检出量为1.0×10³拷贝/μL;⑤应用建立的RT-PCR方法检测了249份2012-2015年采集自江西省各地区的腹泻母猪粪便及腹泻仔猪粪便/肠道样本,结果显示腹泻样本中PDCoV的检出率为31.33%（78/249）,母猪粪便中PDCoV的检出率（27.78%）稍低于仔猪粪便及肠道样品PDCoV的检出率（31.92%）,最早可从2012年的样品中检测出PDCoV。【结论】试验成功建立了检测新现PDCoV的RT-PCR方法;应用所建立的RT-PCR方法检测了249份2012-2015年江西地区猪群临床腹泻样品中PDCoV存在情况,结果表明PDCoV是一种普遍存在于腹泻猪群中的病毒;研究建立的RT-PCR方法对猪群PDCoV的临床诊断和流行病学调查等具有应用价值。     

中国泰和乌骨鸡MHC与其繁殖性能相关的研究

实验采用四种限制性内切酶（ＨｈａＩ、ＥｃｏＲＶ、ＨａｅⅢ、Ｘｂａｉ）,运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰＳ的方法,研究了泰和乌骨鸡ＭＨＣ分子遗传多态笥,探讨了各基因型与繁殖性能的相关关系,结果表明：四种酶切区别的Ｂ－ＬＩＩＢβ１外元的多态笥及ＭＨＣ基因组合型对蛋重及受精蛋孵化率影响差异均不显著。ＥｃｏＲＶ及ＸｂａＩ酶切多态性对产蛋数的多态性及ＭＨＣ基因组合型对蛋重及受精蛋孵化率影响差异均不显著。ＥｃｏＲＶ及Ｘｂ     

经济实用型发酵床生猪养殖设施的研究

发酵床生猪养殖技术是一种低成本、高产出、无污染的生态养猪模式.要将发酵床养殖方法在江苏省全面推广,建立一套适应江苏省气候特点并与发酵床养猪技术相配套的经济实用型养殖设施体系十分重要.本研究介绍的半塔式的大棚结构、环境因子的监控设施、智能灭蚊驱蝇系统等发酵床养殖设施装备与调控技术体系建设成本低,实用性强,能基本解决发酵床...     

γ辐照降解肉制品中克伦特罗的初步研究

采用酶联免疫法(ELISA)检测肉制品中瘦肉精--克伦特罗γ射线辐照降解效应,结果表明:辐照可以显著降低肉制品中克伦特罗含量,降解率随辐照剂量增大而提高,当辐照剂量为3.4 kGy时,肉制品中克伦特罗的降解率在80%以上.     

鸭血粉丝汤辐照杀菌效果研究

以快餐式鸭血粉丝汤为材料,研究了鸭血粉丝汤辐照杀菌效果及储藏3个月后微生物(菌落总数、霉菌、大肠菌群和沙门氏菌)的生长情况.结果表明,辐照前粉丝和蔬菜包的卫生质量较好,鸭血包和辣酱包的含菌量较高,粉包的含菌量最高,放置3～5 d鸭血包中微生物繁殖的速度快于粉丝、蔬菜包等,辣酱包中的沙门氏菌检测为阳性.辐照杀菌效果明显,当辐照剂量为2 kGy时,辣酱包中的沙门氏菌检测为阴性,其他检出的微生物含量明显降低;6 kGy时鸭血包和蔬菜包中均未检出微生物;8 kGy时粉丝中也均未检出.辐照储藏3个月后,2 kGy辐照的鸭血包中的菌落总数明显高于刚辐照时,6、8 kGy辐照的鸭血包中检出了菌落,且含量较高,分别达到1×104、5.4×103 CFU/g.综合试验结果,提出了鸭血粉丝汤辐照杀菌的适宜工艺剂量范围为4.0～6.0 kGy.     

猪毛尾线虫的检测及其ITS序列分析

毛尾线虫俗称鞭虫,为肠道常见寄生线虫,可感染人和多种动物。2015年11月,江西某猪场育肥猪出现腹泻症状,粪便带黏液和血液,部分病猪死亡;剖检发现猪肠道内充满了线状虫体;依据发病猪症状和虫体、虫卵的分析,初步确定该病为猪毛尾线虫病。采用通用引物扩增分离线虫的基因组内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS),结果显示分离虫体的ITS序列与猪毛尾线虫ITS序列的核苷酸同源性高达99.8%,从基因水平进一步证实了该病原为猪毛尾线虫;系统进化分析表明其与18条来自不同地区毛尾线虫的ITS序列相似性均93.5%,其中,与湖南益阳地区的猪毛尾线虫(AM993005)亲缘关系最近。试验结果为建立猪毛尾线虫的分子生物学诊断方法奠定了基础。     

丝羽乌骨鸡MHC-B-LIIB(β1外元)序列多态性分析

本实验采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ的方法来研究丝羽乌骨鸡ＭＨＣ－Ｂ－ＬＩＩＢ（β１外元）序列的分子遗传多态性。实验证明：四种限制酶在Ｂ－ＬＩＩＢ（β１外元）的３０５ｂｐ片段上都存有多态位点。综合四种酶切情况，共检测到９种基因型。Ｘ＾２适合性检验表明：ＨｈａＩ、ＥｃｏＲＶ、ＸｂａＩ位点已经达到Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态（Ｐ〉０．０５）。而ＨａｅⅢ位点未能达到Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态。     

多媒体数据库的开发及与WWW连接

本文结合江苏省主要农作物病虫草害及其综合防治数据库的具体情况，阐述了多媒体数据库的开发与建设，介绍了WWW技术、数据库与WWW连接方法和访问原理，针对本数据库开发事例，实现了WWW通过应用程序编程接口访问数据库的具体方法。