猪蛔虫感染期幼虫抑制消减cDNA文库的构建

为筛选与线虫感染性相关的基因,本研究以猪蛔虫为对象,构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库,为研究线虫期特异性发育的分子机制奠定基础。分别提取感染期幼虫和其它各期幼虫及成虫的总RNA,纯化mRNA后,采用Clontech公司PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库,并采用Southern斑点杂交进行消减效率的检测。随机从文库中抽取45个克隆进行测序及在线BLAST分析。试验结果表明,感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库具有较强的特异性;在得到的41个表达序列标签(ESTs)中,有40个ESTs与已报道的基因有较高的相似性,主要代表猪蛔虫第三期幼虫基因和成虫头部基因,有1个cDNA片段可能代表新基因。猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究幼虫发育差异表达基因的功能奠定了基础。     

青海微孔草经济价值及开发利用前景

微孔草是一种野生珍稀油料植物。本文通过对青海微孔草生物学特性及分布、生态学特性及经济价值的分析,指出微孔草富含r-亚麻酸,具有较高的营养价值和保健价值,并对微孔草的开发利用前景进行了分析。     

祁连山南麓地区岩羊死因分析初报

2006年2月18～23日位于祁连山南麓天峻县的生格乡地区，先后有20多只岩羊突然死亡。通过对捕获岩羊的临床检查、栖息地调查和对其周围牧户的访问结果表明：岩羊在短时间大量死亡是多种病原体和作为应激源气候因子（大雪、大风和强烈的太阳光直接照射和雪地反射）的联合作用导致岩羊患传染性角膜结膜炎病失明而从悬崖处摔死的结果，而人类活动导致的生境破碎化加剧了本病的发生、流行和患病动物的死亡。     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株核衣壳蛋白重组鸡痘病毒的构建

从含有猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核衣壳蛋白（N）的质粒扩增出N基因，构建禽痘病毒转移载体。该载体含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2控制之下的PRRSVN基因、P11启动下的报告基因lacZ以及用于同源重组的禽痘病毒基因组的片段。在转移载体转染亲本病毒S—FPV-017感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）之后，采用蓝色表型筛选的方法，筛选到表达N基因的重组病毒，并对其进行了6轮蚀斑纯化。PCR方法鉴定证明重组病毒的基因组中含有完整PRRSVN基因，间接免疫荧光试验证明了PRRSVN蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得表达，本研究为猪繁殖与呼吸综合征非复制型疫苗的研制打下了基础。     

新城疫病毒F、NP、M和HN基因在昆虫细胞内的共表达

为构建杆状病毒转移载体，通过PCR的方法将F48E9株新城疫病毒F基因上的StuⅠ位点和NP基因上的XbaⅠ位点进行突变，扩增出全长的F、NP以及F48E9株新城疫病毒M和HN基因片段，将其克隆到pMD18-T载体，再将F、NP、M和HN基因依次亚克隆到杆状病毒转移载体pAeAB4上，F基因和M基因均在p10启动子的操控之下，NP基因和HN基因构建到两个polyhedrin启动子下游，构建重组杆状病毒转移载体pAeAB4-F-NP-M-HN。pAeAB4-F-NP-M-HN与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9，获得重组杆状病毒rBae-F-NP-M-HN。重组杆状病毒感染Sf9细胞，72h后收集细胞和培养上清。Western blot分析显示：M、NP、F和HN蛋白在培养上清中得到了共表达，大小与预期结果一致；感染细胞内只检测到了HN蛋白的表达。这表明M、NP、F和HN蛋白在昆虫细胞内共表达可以自我装配成病毒样颗粒，并且以出芽的方式释放到培养基中。该重组杆状病毒的获得为研究新城疫病毒各结构蛋白之间的相互作用和确定病毒粒子出芽的驱动力等方面奠定了基础。     

口蹄疫病毒结构蛋白基因vp1的表达与应用研究

体外克隆口蹄疫病毒vp1基因，构建重组表达载体pET28a-vp1。将此重组质粒转化到受体菌BL21（DE3）中，进行诱导表达，SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明，诱导5h后表达量达到最高，表达产物大小约为33Ku-40Ku，表达蛋白能与口蹄疫病毒阳性血清产生特异性免疫反应。经HPLC纯化后，以重组蛋白为抗原，建立检测VP1蛋白抗体的ELISA方法，检测猪牛血清样品，免疫抗体检测结果与口蹄疫液相阻断ELISA检测结果呈正相关，能反映出免疫抗体动态变化，对临床样品口蹄疫病毒血清抗体检测，两种方法有一定相关性，但不显著。所以以重组VP1蛋白为检测抗原的ELISA方法有望用于口蹄疫免疫抗体监测。     

氧氟沙星在肉鸡体内残留的研究

建立了氧氟沙星在肉鸡组织内残留的高效液相色谱分析法。采用荧光检测器，激发波长278nm，发射波长445nm。色谱柱为Hypersil BDS—C18，柱温40℃；以磷酸（三乙胺调pH至2．5）-乙腈（86：14）为流动相，流速1．0mL／min；进样量为20μL。氧氟沙星在肌肉、肝脏和肾脏中的平均回收率分别为96．3％、87．5％和76．4％，检测限为10ng／g，在10～1000ng／mL浓度范围内，氧氟沙星的峰面积与其浓度呈良好的线性相关，达到了氧氟沙星残留分析的要求。利用建立的方法对氧氟沙星在肉鸡体内的残留消除规律进行了研究，以1L水添加500mg的剂量，对120只肉鸡连续给药5d，对不同停药时间所取肌肉、肝脏和肾脏样品中的药物残留进行分析。结果表明，氧氟沙星在肉仔鸡组织中的残留消除速度较为缓慢，至休药23d时，仍可在肝脏和肾脏分别检出39和35μg/kg的氧氟沙星残留。在本实验的条件下，建议氧氟沙星临床休药期以25d为宜。     

MDV对雏鸡血浆MDA含量与SOD活性的影响

为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在雏鸡马立克病(MD)发病过程中的作用,研究了雏鸡在人工攻毒后血浆MDA含量与SOD活性的动态变化.结果表明,攻毒组接种马立克病病毒(MDV)后第14天,血浆中MDA的含量显著高于对照组(P＜0.05),第7天和第28天高于对照组,第56天时基本接近;血浆中SOD活性在第7天时对照组显著高于攻毒组(P＜0.05),第14天和第28天高于攻毒组,但差异不显著.表明雏鸡在感染MDV后血浆中MDA含量显著升高,SOD活性明显降低,对雏鸡MD的发病诊断有重要的指导作用.     

H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸵鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究

为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好鸵鸟禽流感的防控工作,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗,不同剂量免疫鸵鸟,用HI方法检测母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄.结果表明,雏鸵鸟母源抗体能维持约3周～8周;8周龄时分组首免,C1组产生的免疫反应优于C2组,抗体峰值能达到7.50 log2,维持时间为9周左右;17周龄时C1组以3.0 mL/羽进行二免,2周后抗体达到7.40log2,3周～7周抗体维持在高峰值,最高达8.80log2,以后逐渐下降,有效抗体水平能维持至接种后25周左右.二免后25周进行三免,以5 mL/羽三免后2周抗体可达到9.80log2,2周～4周抗体维持在最高峰,以后缓慢下降,期间抗体时有起伏,但有效抗体水平约可维持1年时间.三免后45周内抗体水平合格率均在70%以上.根据抗体消长规律,初步推荐了鸵鸟的免疫程序.     

日粮镁对肉仔鸡腿肌中活性氧产量的影响

本试验目的是研究日粮镁水平对肉仔鸡腿肌中活性氧(reactive oxygen species , ROS)产量的影响。96只AA肉仔鸡随机分配到低镁日粮组和对照组,每组6个重复,每个重复8只鸡,分别喂以镁含量1 .2 g/kg或2 .4 g/kg的日粮。与对照组相比,低镁组肉仔鸡腿肌中谷胱甘肽(glutathione , GSH)的含量降低了27 %(P<0 .01) ,丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量提高了40 %(P<0 .01)。采食低镁日粮的肉仔鸡腿肌匀浆液的ROS信号峰的高度显著高于对照组(P<0 .01)。对照组腿肌镁的浓度(30 .27 mg/kg)显著高于低镁组腿肌镁的浓度(27 .40 mg/kg)。腿肌中铁、钙的含量在两组之间差异不显著(P>0 .05)。与对照组相比,低镁组腿肌线粒体复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性分别提高了28 %、23 %(P<0 .01)、35 %(P<0 .01)和30 %,线粒体复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性与ROS产量之间呈显著的负相关关系(P<0 .05)。除C18∶2的含量显著高于对照组外,其他多不饱和脂肪酸含量在两组之间没有差异。本试验结果表明低镁日粮实质性地提高肉仔鸡腿肌中ROS的产量,低镁日粮降低腿肌中镁的浓度,诱导了线粒体呼吸链酶活性升高,从而提高了ROS的产量。