副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明，两种检测方法的特异性良好，但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍，二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79．7％、55．2％和65．3％。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清，IHA和ELISA的阳性率分别为40％和59％。结果证实，这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。     

单克隆抗体在动物衣原体病血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，对本地区所采得的231份猪血清，128份羊血清，90份牛血清进行检测，结果：猪血清阳性检出率为30．7％，羊为25．8％，牛为32．2％；选猪、羊、牛血清各50份，用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与的间接血凝试验（IHA）进行比较，猪血清ELISA阳性检出率为30％，IHA为26％，ELISA比IHA试验高出4个百分点。牛血清ELISA阳性检出率为32％，IHA为24％，ELISA比IHA试验高出8个百分点。羊血清ELISA阳性检出率为26％，IHA为22％，ELISA比IHA高出4个百分点。     

用酶联免疫吸附和正向间接血凝试验检测猪瘟抗体

应用ELISA和IHA对我省两种猪场的66份血清进行了检测,结果表明用ELISA检测两猪场免疫合格率分别为83.33%、80.5%,用IHA检测分别为90%、97.2%;两者检测结果符合率为84.8%,具有较高的群体相关性。     

衣原体单克隆抗体在羊血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，对本地区所采用的698份羊血清进行检测，羊血清阳性检出率为22．06％，选择50份羊血清用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与传统的间接血凝试验(IHA)进行比较，其敏感性高。羊血清ELISA阳性检出率为26％，IHA为22％，前者比IHA高出4个百分点。     

猪附红细胞体Dot-ELISA检测方法的建立

本试验建立了一种检测猪附红细胞体抗体的Dot—ELISA方法，并确定了试验程序中最适抗原包被浓度、被检血清最适稀释度等工作条件。特异性和重复性试验结果表明，所建立的Dot—ELISA不与猪瘟等常见猪病阳性血清发生交叉反应，且稳定性高；用所建立的Dot—ELISA与IHA对70头份被检血清进行平行检测，阳性率分别为90％和60％；对20份阳性血清进行检测，Dot—ELISA和IHA平均抗体滴度分别为1：1012和1：160。表明所建立的Dot-ELISA是一种比较敏感、特异和稳定的血清学检测方法，能用于猪附红细胞体的抗体检测和疾病诊断。     

应用斑点酶联免疫吸附试验检测水牛伊氏锥虫抗体

应用斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)检测水牛伊氏锥虫IgG抗体,并与间接血凝试验(IHA)进行了比较。检测160份伊氏锥虫疫区水牛血清160份,Dot—ELISA和IHA的阳性率分别为55.63％和53.75％;其中42份虫检阳性血清的阳性率分别为100％和92.86％,两种试验的一致率为95.63％。两种试验的滴度呈显著正相关(r=0.8842)。10份非疫区健康水牛血清两种试验均为阴性。     

三种血清学方法检测弓形体抗体的比较

对IHA、IFA及ELISA三种方法检测弓形体抗体作了比较。感染兔血清首次检出抗体时间及阳性兔数:IHA为感染后第5天(1/15)、IFA为第6天(1/15)、ELISA为第4天(8/15);达全阳性时间分别为感染后第13、15及6天,GMT分别为4693、1301及8192。对照兔血清的假阳性率均为1.42％。三法检测猪血清的阳性率分别为42.0、41.0及44.0％。结果表明,三法均具有高度的敏感性和较高的特异性,其中以ELISA法最为灵敏,IHA法操作简便,两法均适用于现场血清学调查。     

应用斑点酶联免疫吸附试验快速检测猪弓形虫抗体

将斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)用于检测猪弓形虫抗体,并与常规ELISA和IHA法进行了比较。结果,对102份滴度下降的猪阳性血清检测,弓形虫抗体阳性检出率,Dot—ELISA为66.67％(68/102),常规ELISA为48.04％(49/102),IHA为27.45％(28/102);对675头商品猪血清检测,弓形虫抗体阳性检出率,Dot—ELISA为48.15％(325/675),常规ELISA为41.93％(283/675),IHA为33.80％(228/675);与3种寄生虫(猪囊虫、猪旋毛虫、住肉孢子虫)阳性血清无交叉反应;对123份弓形虫抗体阳性和158份阴性猪血清进行3次重复性试验,结果完全一致。结果证明,该法敏感性高,特异性强,操作简便快速(于接到病料后2h报告结果),便于在基层推广使用。     

猪瘟抗体三种检测方法的比较试验

对猪瘟兔化弱毒疫苗免疫母猪所生的仔猪,在接种疫苗前、后采集1116份血清样本,同时用HRP—SPA—ELISA、IHA和ID等三种方法进行比较检测,三种方法的阳性率分别为100％、90.77％和69.59％.     

猪肺炎支原体乳酸脱氢酶基因的克隆、表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立

根据GenBank中的猪肺炎支原体乳酸脱氢酶（LDH）基因序列设计1对引物，PCR扩增LDH基因，首先将扩增片段连接到克隆载体pMD18-T上，然后连接到表达载体pGEX—KG上，经测序正确后诱导表达。重组质粒在大肠杆菌中表达的目的蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在。将超声波破碎的诱导菌液高速离心，其上清用Glutathione Sepharose4Bbead亲和层析纯化。用猪肺炎支原体的标准阳性血清对纯化蛋白作Western—blot检测，出现目的条带；以纯化蛋白为抗原建立了检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA方法，该方法具有较好的稳定性和重复性，较高的特异性与敏感性。用建立的ELISA方法与中国兽医药品监察所研制的IHA试荆盒同时检测120份临床血清，二者总符合率为92．5％。用建立的ELISA方法检测了671份临床送检不同年龄阶段的猪血清，结果显示断奶前仔猪猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopnenmoniae，MHP）感染率为44．3％，保育猪为3．0％，育肥猪为17．44％，种猪为73．41％，这初步反映了猪喘气病在各个年龄阶段的感染率。     

ELISA和IHA检测弓形虫抗体的比较试验研究

目的:分析ELISA方法和IHA方法检测弓形虫病的可靠性。方法:本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血凝试验(IHA)两种方法,平行检测来自龙岩市某个猪场的32份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果:ELISA和IHA对猪弓形虫抗体阳性检出率分别为62.5%(20/32)、53.13%(17/32),这两种方法的阳性检出符合率较高,为71.88%(23/32)。其中,ELISA方法的敏感性(93.33%)、检测效率(81.25%)以及Youden指数(63.92%)都在IHA方法之上,但ELISA方法的特异性(12/17,70.59%)略低于I-HA方法(13/17,76.47%)。结论:ELISA和IHA两种方法均可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,但ELISA方法更适用于猪弓形虫病的血清学调查。     

羊流产嗜衣原体病和弓形虫病IHA与ELISA诊断方法的比较

通过比较研究羊流产嗜衣原体与弓形虫抗体的间接血凝试验(IHA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果,选择适宜贵州省山羊流产血清学调查的检测方法。通过IHA和ELISA两种方法对贵州省195份山羊血清进行羊流产嗜衣原体与弓形虫抗体的检测,统计并分析两种疫病的阳性符合率、阴性符合率和总符合率。结果表明,羊流产嗜衣原体与弓形虫IHA与ELISA的总符合率分别为77.95%和78.97%,阳性符合率均仅为50%,阴性符合率为80.45%和79.27%。说明在检测两种疫病血清抗体方面,IHA比ELISA更适合在贵州省基层推广。     

IHA法和间接ELISA法检测猪附红细胞体抗体结果对比分析

为了寻求适用于基层实验室对猪附红细胞体抗体的检测方法,文章试验用间接血凝试验(IHA)和间接ELISA两种方法分别检测了402份临床送检猪血清,并对这两种方法的敏感性和符合率进行比较研究。结果表明,IHA和ELISA法结果符合率为80.1%,且ELISA方法比IHA敏感性更高,更适合批量检测和群体普查。     

弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制

将样品垫（加样区）、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上，组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测，并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测，与弓形虫IHA检测结果的符合率为82．5％，金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2d检测到抗体。结果表明，检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂（金标试纸条）的敏感度高于IHA。     

应用硝酸纤维薄膜RIA对棘球蚴病、弓形虫病、丝虫病检测的研究

硝酸纤维薄膜作为RIA的一种新型固相载体，具有简易、快速、经济、易于漂洗、敏感性、特异性、重现性好等优点，且适用于大批量样品在短期内同时检测。可作为寄生虫病早期诊断可靠的新手段。该法已成功地应用于日本血吸虫病人、病牛及现扬疫区耕牛的检测试验。本实验进一步对棘球蚴病人和病羊的血清；弓形虫病猪血清和丝虫病人血清等3种人畜共患寄生虫病进行检测研究，结果除对羊棘球蚴病检测效果不够理想，阳性检出率仅50％(10／20)，其它几种疾病的检出率均在不同程度上高于EIASA和IHA法。对人棘球蚴病检测的阳性率，膜片法为100％(82/82)，ELLSA为91．5％(75／82)，IHA为89．6％(71／82)。对猪弓形虫病的检测阳性率，膜片法为100％(120／120)，ELISA为93．3％(112／120)，IHA为90．0％(108／120)。时人丝虫病的阳性检出率膜片法为100％(80／80)，ELISA为96．3％(77／80)，IHA为88．9％(71／80)。各组假阳性率的降低更加明显。作者认为，该法可提供作为兽医寄生虫病早期大规模检测的一种有效方法。     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体在诊断上的应用

用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体,用ELISA方法对绵羊肺炎支原体病进行血清学诊断,并与IHA试验进行了比较。其阳性检出率,抗绵羊肺炎支原体ELISA法比IHA法高7个百分点。用此法对本地羊群的250份血清进行检查,阳性率为27.20％。结果表明,所建立的检测绵羊肺炎支原体抗体的ELISA,与IHA比较其敏感性、特异性及符合率均很高,检疫时应用简便易行,具有较高的实用价值。     

3种猪瘟抗体检测试剂盒的比较与分析

为掌握3种猪瘟病毒抗体检测试剂盒的优缺点,本研究应用IHA、间接ELISA、阻断ELISA试剂盒分别对67份猪血清样品进行检测,结果显示IHA、间接ELISA、阻断ELISA分别检测出阳性样品48份、56份、59份,阳性率分别为71.64%、83.58%、88.06%,与中和试验的符合率分别为89.55%、92.53%、94.03%。结果表明IHA灵敏度稍低,对血清质量要求高,但检测快速、操作简单及无需特殊仪器设备,适合个体检测和基层实验室使用;间接ELISA和阻断ELISA敏感性高、通量高,但对操作人员有专业水平要求、需要酶标仪,适合对畜群检测和一般实验室使用。     

应用三种方法筛选猪瘟抗体阴性猪的比较试验

为了寻找筛选猪瘟抗体阴性猪更简便的方法,本试验应用猪瘟中和试验(SN)、阻断ELISA和正向间接血凝(IHA)三种方法分别对170份未经猪瘟活疫苗免疫的仔猪血清进行猪瘟抗体检测。结果显示,SN、ELISA和IHA检测出的猪瘟阴性血清分别为144份、150份和131份,表明三种检测方法有较好的符合率,其中SN与ELISA的检测符合率为90.59%,SN与IHA的检测符合率为82.94%,而ELISA法与另两种方法比较阴性符合率最高。本结果表明,ELISA法具有较高的敏感性,适合应用于猪瘟活疫苗安全检验抗体阴性猪的筛选。     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法，用该法检测20份人工感染鸡血清样品，抗体阳性率为100％，康复期鸡群血清抗体阳性率为43％，人工接种弱毒疫苗65d和170d鸡群血清抗体的阳性率分别为60％、70％。经反复试验，确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件，即抗原包被浓度10．8μg／孔，待测血清最佳稀释度为1：100。     

奶牛金黄色葡萄球菌2种抗体检测方法的建立及比较

用超声波处理的金黄色葡萄球菌抗原和灭活的菌体抗原，初步建立了2种检测奶牛金黄色葡萄球菌抗体的检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）和玻片凝集试验，并用建立的检测方法对已知免疫背景的血清样品进行检测。结果显示，ELISA的阳性检出率为60．5％（50/87），玻片凝集试验的阳性检出率为56．2％（49/87），两者总符合率为82．8％（72/87）。表明两种方法均可用于奶牛金黄色葡萄球菌抗体的检测，其中ELISA检测方法更敏感。