抗氯霉素单克隆抗体的制备及其特性

用重氮化法人工合成氯霉素-牛血清蛋白（CAP-BSA）抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,建立了分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株.经检测、鉴定,筛选出5株高亲和力的杂交瘤细胞株,其腹水效价均高于1：10^6,且5株杂交瘤细胞株分泌的单抗与其他几种抗生素无交叉反应,可用于氯霉素的快速检测.     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的氯霉素-人血清白蛋白(CAP-HSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株分泌抗CAP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞1F9.经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目84～96条,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1256,诱生小鼠腹水的抗体效价可达16×105.该细胞连续培养生物学性状稳定,竞争间接酶联免疫吸附试验(ciELISA)显示,其与供试抗生素交叉反应小,表明该单抗具有较大的应用价值.     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及其化学发光酶免疫法的建立

以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得了一株分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)的杂交瘤细胞5D7,并对其进行效价、亲和力和特异性测定。结果显示,其分泌的抗体亚类为IgG1,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1∶512,诱生的腹水经纯化后效价为1∶2×105,亲和常数为3.6×108L/mol;应用上述单抗建立的检测氯霉素的化学发光酶免疫分析法(ci-CLIA),其检测范围为0.001μg/L~10μg/L,检出限达0.0025μg/L,IC50为39.6μg/L,且与L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、青霉素、四环素、庆大霉素等的交叉反应率均小于0.01%,可满足我国对水产品中氯霉素残留检测的要求。     

鸡肌肉组织中氯霉素残留ELISA检测方法的研究

本文利用活化酯法合成了氯霉素抗原 ,作为免疫原免疫新西兰大耳白兔得到氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素间接竞争酶联免疫检测方法 ,进行了药物交叉反应性试验 ,并对鸡肌肉进行添加回收试验。结果显示抗体效价可达 1∶ 6 4 0 0 0 0 ,IC50 为 1.3ng/ ml,最低检测限达到 0 .0 5 ng/ ml,线性检测范围为 0 .1～ 36 .4 5 ng/ ml。在 0 .5、1、2 .5、5 ng/ g浓度水平添加到鸡肌肉组织中 ,测得回收率为 5 5 .4 %～ 119.0 % ,变异系数为 4 .3%～ 10 .4 %。该 EL ISA方法快速、灵敏、方便 ,满足了氯霉素残留检测的要求。     

O型口蹄疫泛亚毒株单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析

用纯化的O型口蹄疫泛亚毒株免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接EL ISA筛选,获得了ⅢA 11、ⅢC 3和ⅢF 10 3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过间接EL ISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1∶160~1∶640,腹水为1∶5×104~1∶4×105;经EL ISA法测定,3株单克隆抗体均与泛亚株VP 1蛋白反应,而不与A型口蹄疫病毒VP 1蛋白反应;单抗的亚类鉴定结果表明,ⅢA 11和ⅢF 10分泌的抗体为IgG 1亚类,ⅢC 3分泌的抗体为IgG 2b亚类。单克隆抗体抗原识别位点分析结果表明,ⅢA 11与另外2种单克隆抗体的识别位点不同,而ⅢC 3和ⅢF 10的识别位点相近。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B基因原核细胞表达产物单克隆抗体的制备

用大肠杆菌 BL2 1表达了马立克氏病病毒 (MDV)强毒 GA株的囊膜糖蛋白 B(g B)基因 ,通过 SDS- PAGE电泳分离表达蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过 EL ISA和间接免疫荧光试验 (IFA) ,得到 1株阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株 7C8。该单抗腹水的 EL ISA效价为 1∶ 2 1 2 ,IFA效价为 1∶ 80 0 ,与 MDV不同致病型毒株CVI988、GA、RB1B、MD11、6 48A株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)均呈 IFA阳性。1∶ 10 0稀释时与 GA株感染的 CEF在斑点酶联免疫吸附试验 (dot- EL ISA)中呈阳性。     

玉米赤霉醇单克隆抗体的制备及鉴定

将玉米赤霉醇 (α- zearalanol,ZER)琥珀酰化得到 ZER- 7-半琥珀酸酯 ,再利用混合酸酐法与牛血清白蛋白 (BSA)偶联得到免疫原 ,以此免疫原免疫 BAL B/c小鼠 ,利用杂交瘤技术得到两株稳定分泌 ZER单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1C1 2 和 9B4 ,经鉴定两株单抗亚型均为 Ig G1 ,间接 EL ISA测定腹水效价为 1∶ 3.2× 10 5。该抗体与同系物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的交叉反应率分别为 36 .2 5 % ,5 2 .73% ,0 .6 7% ,74 .36 % ,5 3.70 % ;与己烯雌酚、雌二醇、睾酮、克伦特罗的交叉反应率均小于 0 .1%。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定     

醋酸甲孕酮单克隆抗体的制备与鉴定

用人工合成的醋酸甲孕酮-牛血清白蛋白(MPA-BSA)作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选得到1株稳定分泌醋酸甲孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C11A3B6,该细胞株经体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。间接ELISA测定培养上清效价为1∶640,诱生腹水效价为1∶2.56×106。经鉴定:杂交瘤细胞分泌的抗体亚型为IgG2а。竞争抑制ELISA(ciELISA)检测显示其IC50为22 ng/mL,与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小,表明该单抗具有较好的敏感性和特异性。     

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定

用纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得2株稳定分泌抗BTV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1F5和4E5).其细胞培养上清ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水ELISA效价分别为1:512 000和1:128 000.亚型鉴定表明,1F5和4E5分别为IgGl和IgG2a.ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与BTV反应,不与其他相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好.2株单克隆抗体1F5和4E5的相对亲和力指数分别为5.14×106mol/L和6.71×106mol/L.这2株单克隆抗体的获得为建立BTV免疫学检测方法奠定了基础.     

己烯雌酚单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的己烯雌酚-牛血清白蛋白(DES-BSA)作为抗原免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术建立了1株稳定分泌己烯雌酚单克隆抗体的杂交瘤细胞1F5,经鉴定:杂交瘤细胞染色体数为99.24±2.5,其分泌的抗体亚型为IgG2α。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。间接ELISA测定培养上清效价为1∶640,诱生腹水效价3.2×106。ciELISA检测显示其DES 50%抑制质量浓度(IC50)为24μg/L,与水产养殖中常见禁用激素和抗菌药物的交叉反应小,表明该单抗具有较好的敏感性和特异性。     

2015年山东省肉鸡饲料原料中重金属污染情况调查及风险评估

本试验旨在调查2015年山东省肉鸡饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的污染情况,评估饲料原料的污染风险。试验收集烟台市莱阳、威海市文登、青岛市莱西、潍坊市诸城、日照市莒县、临沂市沂水、德州市夏津等地不同饲料生产厂家使用的8种饲料原料,包括玉米、豆粕、麸皮、花生粕、棉籽粕、玉米蛋白粉、干酒糟及其可溶物( DDGS)和微量元素预混料,应用电感耦合等离子体原子发射光谱法( ICP-AES)检测镉、铅和铬元素的含量,应用原子荧光光谱法( AFS)检测砷和汞元素的含量,计算检出率、平均含量、超标率、最高含量与平均含量比值( HC/AC)和离散系数。结果表明：饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的检出率分别为32.29%、7.29%、12.50%、100.00%和100.00%;阳性样品中平均含量分别为0.21、1.27、2.12、3.48和0.02 mg/kg,超标率分别为0.00、1.04%、1.19%、54.76%和9.52%;微量元素预混料中砷、铅和镉元素,棉籽粕中铬元素及花生粕中汞元素的HC/AC最大,微量元素预混料中镉元素、花生粕中汞元素、豆粕中砷元素及棉籽粕中铅和铬元素离散系数最大。综上所述,肉鸡饲料原料中铬和汞元素污染严重;微量元素预混料中砷、镉、铬和铅元素、棉籽粕中铬和铅元素、花生粕和豆粕中汞元素易出现严重污染,因此建议制定预混料和饼粕类饲料中多种重金属元素的限量标准。     

促卵泡素和促黄体生成素对儋州鸡生殖激素调控规律的研究

为研究促卵泡素（FSH）和促黄体生成素（LH）对儋州鸡体内其他生殖激素的调控规律,本试验通过改变FSH和LH在儋州鸡血液中的浓度,并采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）对处理前后儋州鸡血液中FSH、LH、催乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E₂）的浓度进行测定。结果发现,注射外源性FSH和LH分别能提高儋州鸡血液中FSH和LH浓度;当儋州鸡血液中FSH或LH浓度显著升高时则均能引起PRL浓度显著降低（P < 0.05）,但当FSH和LH浓度同时显著升高时,PRL浓度显著升高（P < 0.05）;当儋州鸡血液中FSH浓度显著升高时,E₂及P浓度显著提升（P < 0.05）,且在高浓度LH的协同下提升幅度更大;当儋州鸡血液中LH浓度显著升高时E₂及P浓度升高但不显著（P > 0.05）。本研究结果表明,儋州鸡血液中FSH或LH浓度的提高均能降低PRL的浓度,并能不同程度的提升E₂及P的浓度,但FSH与LH浓度同时提高则能通过协同作用刺激E₂及P浓度的大幅提升,当E₂及P浓度过高时能通过刺激PRL的释放,负反馈调节血液中FSH与LH,并恢复血液中E₂及P浓度。     

牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析

为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息，本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd，运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明，获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内，与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96．8％，推导氨基酸序列同源性为93．3％。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prod的同源性均为80％，推导的氨基酸序列同源性均为76．3％。氨基酸一级结构分析显示3种Prod编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明，3种Prod编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。     

Study on Regulation of Reproductive Hormones in Danzhou Chicken by FSH and LH

To investigate the regulation of reproductive hormones in Danzhou chicken by follicle-stimulating hormone (FSH) and luteotropic hormone (LH),the concentration of FSH and LH in Danzhou chicken blood were changed by different treatments and the concentration of FSH,LH, prolactin (PRL), progesterone (P), and estradiol (E₂) in the blood were determined using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed that exogenous FSH and LH could improve the concentrations of FSH and LH,respectively. When one of FSH and LH increased alone,the concentration of PRL was significantly decreased (P < 0.05),while it was significantly increased when FSH and LH were both increased (P < 0.05).The high level of the FSH could result the significant increase of E₂ and P (P < 0.05),and it would expand the increasing effect in cooperation with the high concentration of LH. While the high level of the LH could elevate the concentration of E₂ and P,but effect was not significant (P > 0.05).In conclusion,the study suggested that the increase level of FSH or LH could reduce the concentration of PRL in Danzhou chicken,meanwhile,it could increase the concentration of E₂ and P in varying degrees. However,both of the FSH and LH increase in the blood could result the significant increase of E₂ and P as the synergy. When the concentration of E₂ and P were too high,it could stimulate the release of PRL which could adjust the concentration of FSH and LH,and rebalance the concentrations of E₂ and P in the blood.     

鬼臼多糖对免疫功能低下小鼠自由基产生酶活性的影响

采用环磷酰胺腹腔注射(50mg/kg)小鼠建立免疫抑制模型,观察鬼臼多糖(PEP)不同剂量(50,100,200mg/kg和400mg/kg)配合环磷酰胺应用后,对小鼠脾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)及一氧化氮合成酶(NOS)水平的影响。结果表明,PEP能显著降低免疫抑制小鼠脾脏XOD、MPO的活性;对脾脏总NOS活性无显著影响,但400mg/kg多糖可降低小鼠脾脏诱导型NOS活性,提示PEP可通过降低免疫抑制小鼠体内自由基产生酶水平而起到抗氧化作用。     

磺胺甲噁唑抗原合成及其抗体的制备

采用重氮化法将磺胺甲噁唑(SMZ)与人血清白蛋白偶联形成免疫原,免疫大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描和高效液相色谱分析偶联物,免疫抗原的偶联率为19∶1,改良辛酸-饱和硫酸铵纯化抗体,多克隆抗体效价达1∶105,间接酶联免疫吸附试验建立的SMZ检测的线性范围在0.1ng/mL~10μg/mL之间,50%抑制率检测限为22.53ng/mL,抗体与磺胺甲噁唑交叉反应率为100%,与其他7种磺胺药交叉反应率很低。表明制备的磺胺甲噁唑多克隆抗体具有很高的特异性,可用于SMZ在动物性产品中残留的检测。     

Effects of Prostaglandin,N-methyl-D-aspartate and Letrozole on Ewes Plasma Levels of Reproductive Hormones were Evaluated on the Basis of Medroxyprogesterone Acetate Supplementation

This study was aimed to investigate the effects of the different compatibility of medroxyprogesterone acetate (MPA) with prostaglandin(PG), N-methyl-D-aspartate (NMDA) and letrozole (LE) on plasma related hormones levels of reproductive ewes. Thirty-nine and 3-year-old multiparity Suffolk ewes with average weight (75.51+11.55)kg were selected,and assigned into 3 groups,test group Ⅰ:Basis diet+34 mg/d MPA+1 mL/ewe PG, test group Ⅱ:Basis diet+34 mg/d MPA+600 mg/d NMDA, test group Ⅲ:Basis diet+34 mg/d MPA+ 14 mg/d LE, respectively, the trial period lasted for 18 days. The results showed as follows:On the basis of supplemental feeding MPA with PG treated,the levels of FSH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01); Treated with NMDA, the levels of E₂, MLT,FSH and LH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively;Treated with LE, the levels of MLT,LH and T in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively. This study suggested that MPA+NMDA and MPA+LE could be used as medicines for regulate and control oestrus of ewes, and the effect of MPA+NMDA was the best.     

补饲醋酸甲羟孕酮基础上分别进行前列腺素、N-甲基-D-天冬氨酸和来曲唑处理对母羊血浆繁殖激素水平的影响

试验旨在研究醋酸甲羟孕酮（medroxyprogesterone acetate,MPA）与前列腺素（prostaglandin,PG）、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）和来曲唑（letrozole,LE）的不同配伍对母羊血浆繁殖相关激素水平的影响。选取3岁经产萨福克母羊39只,平均体重（75.51±11.55） kg,随机均分为3组,试验Ⅰ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+1 mL/只PG,试验Ⅱ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+600 mg/（d·只） NMDA,试验Ⅲ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+14 mg/（d·只） LE,试验期18 d。结果发现,补饲MPA基础上进行PG处理,母羊血浆中FSH水平呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行NMDA处理,母羊血浆中E2、MLT、FSH和LH水平均呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行LE处理,母羊血浆中MLT、LH和T水平均呈极显著升高（P<0.01）。综合比较各生殖激素之间的关系及变化规律,在本试验条件下,建议MPA与NMDA和LE分别结合使用,可作为调控母羊繁殖性能的药品;且通过比较激素水平得出,MPA与NMDA组合效果最佳。     

MDV对雏鸡血浆MDA含量与SOD活性的影响

为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在雏鸡马立克病(MD)发病过程中的作用,研究了雏鸡在人工攻毒后血浆MDA含量与SOD活性的动态变化.结果表明,攻毒组接种马立克病病毒(MDV)后第14天,血浆中MDA的含量显著高于对照组(P＜0.05),第7天和第28天高于对照组,第56天时基本接近;血浆中SOD活性在第7天时对照组显著高于攻毒组(P＜0.05),第14天和第28天高于攻毒组,但差异不显著.表明雏鸡在感染MDV后血浆中MDA含量显著升高,SOD活性明显降低,对雏鸡MD的发病诊断有重要的指导作用.     

RNA干扰的研究现状与展望

RNA干扰是一种由双链RNA所引起的序列特异性基因沉默。它是真核生物中基因转录后沉默作用的重要机制之一。这种机制在进化中呈保守趋势,介导对内外源性病理性核苷酸及侵入微生物的抵抗,并在染色质水平、转录水平、转录后水平和翻译水平层次上参与基因表达的调控。基于此机制建立的RNAi技术作为新兴的基因阻抑方法,在功能基因组学、微生物学、基因表达调控机理研究等领域得到了广泛应用。本文从RNAi的作用机制、生物学功能、特点及应用等方面介绍了其研究进展。