钩端螺旋体自然发病犬临床症状及生化特点分析

一、钩端螺旋体病犬临床症状观察 到门诊就诊的犬,基本都是临床表现为生病的犬,主要表现为食欲差或食欲废绝,精神差.也有犬主怀疑犬接触了死老鼠或钩端螺旋体病犬,所以带犬进行体检的.由于生病时间长短不同,临床症状的严重程度也有差异,但大部分犬主都是发现犬有明显的临床生病症状,就立即送诊的.所以我们统计的临床症状,就是钩端螺旋体病犬最初出现的临床症状(见表1).根据表1的统计结果,巩膜黄染、食欲不振、精神沉郁、呕吐和发烧是钩端螺旋体病犬主要的5 个临床症状.巩膜颜色是检查病犬有无黄疸最容易的观察点.     

屏障环境下SPF种鸭饲养

<正>1屏障环境下SPF种鸭的饲养方式选择种鸭的传统饲养方式是地面平养方式,即种鸭饲养在鸭舍内,外设陆地运动场和水上运动场或采取喷淋的方式,种鸭配种主要是采用自然交配方式,这种方式种鸭活动量大,种蛋受精率     

无特定病原体HBK-B和HBK—Q种鸭的遗传多样性分析

利用18个微卫星标记对国家实验禽类种子中心保存的HBK-B和HBK-Q两个封闭鸭群进行遗传分析.试验结果表明:两个群体中各有7个位点的多态信息含量(PIC)大于0.5,18个微卫星标记的平均PIC分别为0.474和0.480,呈中度多态;校正后的等位基因丰富度分别为3.56和3.54,表明这两个群体的遗传多样性基本相同.等位基因频率差异的卡方检验和两个群体间的遗传分化系数FST值显著水平的检验均证明这两个群体间的遗传分化已经达到了极显著水平(P<0.01),趋于形成两个不同的品系,但在今后的选育过程中应该对已经存在的近交加以控制.     

动物病原微生物研究与生物安全

文章分析了从事动物病原微生物研究在实验室造成生物危害的原因,介绍了我国和世界卫生组织对动物病原微生物的危害程度的分类,以及相应级别的生物安全实验室和生物安全规定,并着重描述了我国目前应用较多的Ⅱ级和Ⅲ级生物安全实验室的主要特征,指出动物病原微生物及利用其进行的重组核酸技术及其获得的转基因产品都存在一定的潜在的生物安全问题,必须引起足够的重视。     

马立克氏病病毒囊膜粘蛋白B基因原核细胞表达产物单克隆抗体的制备

用大肠杆菌BL21表达了马立克氏病病毒（MDV）强毒GA株的囊膜糖蛋白B（gB）基因，通过SDS－PAGE电泳分离表达蛋白条带，切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过ELISA和间接免疫荧光试验（IFA），得到1株阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株7C8。该单抗腹水的ELISA效价为1：2^12，IFA效价为1：800，与MDV不同致病型毒株CVI988、GA、RB1B、MD11、648A株感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）均呈IFA阳性。1：100稀释时与GA株感染的CEF在斑点酶联免疫吸附试验（dot-ELISA)中呈阳性。     

兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立

用兔出血症病毒（RHDV）单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔多抗血清最佳质量浓度为4mg/L。本方法可特异性地检测出兔肝脏病料中的RHDV,纯化病毒的最低检出量为26μg/L。对已知阳性样品的检测显示,捕获ELISA检测的病毒滴度是HA试验的3～13倍。对67份可疑病料,捕获ELISA阳性检出率为62.7%,HA试验阳性检出率为55.2%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。本方法敏感性、特异性、稳定性良好,可应用于RHDV的快速、批量、特异检测。     

无特定病原体京白鸡的核型研究

采用腹腔注射秋水仙素,取骨髓细胞制备染色体标本,对无特定病原体京白鸡的核型进行了分析.并根据前10对染色体相对长度、臂比值及着丝点指数的测量结果,与已公布的其它地方鸡品种进行了比较.     

PCV2感染性分子克隆的制备及体内外感染性试验

将猪圆环病毒2型（Type2 porcine circovirus，PCV2）JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中，获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系，盲传4代后，利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验（IFA），能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA腹股沟淋巴结注射40日龄仔猪2头，分别接种2、3次，接种剂量500μg／次，首次注射35d心脏放血致死。在体内感染性试验期间，动物未出现明显临床症状。试验结束，病理切片结果显示，不同淋巴组织中分别存在淋巴细胞缺失或增多的现象；肾小球、扁桃体、空肠淋巴结和股前淋巴结等冰冻组织切片中存在大量PCV2病毒抗原；血清中PCV2特异性的ELISA抗体效价迭1：2560，IFA效价为1：1280；通过聚合酶链式反应（PCR）可以分别从体外感染PK15细胞和体内感染动物及同圈饲养的空白对照猪的淋巴组织中扩增到病毒特异性基因片段。本研究证明含有单拷贝PCV2的重组质粒pMDT—PCV在体内、外均具有感染性，能衍生出病毒，并产生符合自然感染PCV2的大体病变和组织病理学变化，并激发较强的体液免癌应答。     

鸡BLB重组蛋白的原核表达及多抗制备

为分析鸡主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类抗原β亚基BLB蛋白在鸡脾脏中的表达情况,本研究采用RT-PCR技术从鸡脾细胞中扩增了BLB基因的保守区第3外显子的部分序列,大小约为380 bp.将其克隆于表达载体pET-30a(+)中.在大肠杆菌BL21 (DE3)中,经IPTG诱导表达,获得大小约为19ku以包涵体形式存在的His-BLB重组蛋白.切取含有重组蛋白的SDS-PAGE胶免疫实验兔,获得抗血清.以制备的血清通过westemblot在鸡脾脏中检测到MHCⅡ类分子特异性条带,其大小约为28 ku,与BLB天然蛋白的大小相符合.本研究为进一步分析MHC-Ⅱ类分子在鸡体内的蛋白表达水平提供了依据.     

应用微卫星DNA标记对BWEL-SPF鸡种群的群体遗传学分析

本研究利用14个鸡微卫星DNA标记位点,采用DNA测序仪和荧光素标记分子内标,建立了鸡分子遗传学的检测方法,对F15世代BWEL-SPF鸡种群8个家系群体内和群体间的遗传结构进行了分析。结果表明,被检位点35.7%(5/14)的基因型趋于纯合,家系内等位基因的变异程度显著降低。F-统计量检验结果表明,家系间的遗传分化均达到了极显著水平(P0.001),群体间的变异占到了总遗传变异的12.9%。