应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

应用间接ELlSA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1：80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1．5％,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1．30％。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

猪流行性腹泻病毒双抗夹心ELISA的建立

用猪流行性腹泻病毒（PEDV）免疫蛋鸡后提取抗猪流行性腹泻病毒的特异性卵黄抗体为捕获抗体,鼠抗猪流行性腹泻病毒多克隆抗体为检测抗体,建立了猪流行性腹泻病毒病原检测的双抗夹心ELISA,其最适包被抗体浓度为1:4000（12.35μg/mL）,鼠抗猪流行性腹泻病毒的多克隆抗体最佳浓度为1:6000（10.25μg/mL）,样品反应时间为30min,酶标抗体工作浓度为1:6000,并以OD450≥0.130作为阳性判断标准。该方法与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒、猪流感病毒、大肠杆菌K88、K99、987P、F41等病原无交叉反应。对经猪流行性腹泻病毒PCR检测的100份粪便样本进行检测表明,8份PCR检测阳性样本中6份为本法阳性;PCR阴性者本法全部阴性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于猪流行性腹泻病毒的快速检测。     

猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释度为1∶10。该检测方法敏感性高,可重复性好。该研究建立的间接ELISA方法为母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒IgA抗体的检测提供了一种快速简便的诊断方法。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为了建立检测PCV-2抗体的间接ELISA方法,本研究以猪圆环病毒2型(PCV-2)重组Cap蛋白作为包被抗原,优化了反应条件及抗原、抗体工作浓度。结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/m L,待检血清的最佳稀释度为1∶80;最佳封闭液和抗体稀释液为含1%明胶、0.05%Tween-20的0.01 mol/L p H值7.4 PBS;当被检血清的OD450nm值≥0.3时为阳性,当OD值0.3时为阴性。该方法与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬病、猪流行性腹泻等病毒抗体无交叉反应,与免疫过氧化物酶单层试验的符合率为98.3%,批内与批间重复性试验的变异系数分别低于5%与8%。应用建立的方法检测了126份2013年采集的猪血清,PCV-2抗体阳性率为40%~100%,表明河北省的猪群中PCV-2感染率很高。     

猪沙波病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

以原核表达重组蛋白作为抗原建立了猪沙波病毒(SaV)抗体的间接ELISA检测方法。使用矩阵滴定法确定抗原包被浓度为6.4μg/mL,血清稀释倍数为1∶50。试验选用1%BSA作为封闭液,血清和二抗的最佳作用时间分别为60 min和40 min。选择无致癌的TMB为底物,确定TMB最佳反应时间为10 min。通过对20份猪阴性血清样品的检测,计算阳性判定值为0.203。通过交叉试验、批内和批间重复性试验证明,本研究建立的SaV间接ELISA检测方法具有特异性高,重复性好的特点,可用于猪沙波病毒抗体的检测。     

非洲猪瘟病毒抗体化学发光检测方法的建立与应用

【目的】建立一种特异性强、敏感度高、操作简捷、高通量的非洲猪瘟病毒(African swine fever, ASFV)抗体化学发光检测方法,用于早期监测ASFV的流行情况。【方法】本研究以羧基磁珠作为固相载体偶联ASFV重组p72蛋白,用适量的牛血清白蛋白(BSA)进行封闭,加入检测样品进行反应,以兔抗猪IgG-AP抗体作为酶标抗体,加入相应底物进行显色,优化各项反应条件,建立ASFV抗体化学发光检测方法,并对该方法的特异性、敏感度、重复性和检出率进行验证。【结果】建立的ASFV抗体化学发光检测方法蛋白与羧基磁珠偶联最适pH为7.0,最佳蛋白偶联浓度为5μg/mL,使用10%BSA溶液封闭效果最佳,反应磁珠终浓度为1.00 mg/mL,酶标二抗最佳工作稀释度为1∶40 000。同时该方法反应时间为30 min,血清稀释度为1∶512,敏感度高于商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒,与猪瘟病毒、A型口蹄疫病毒、O型口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒gE、猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性标准血清均无交叉反应。重复性试验中,批内变异系数为4.41%～8.70%,...     

乳汁中猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,研究以PEDV重组N蛋白和纯化全病毒作为包被抗原,方阵滴定法优化反应条件,建立了两种检测猪乳汁中PEDV IgA抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组N蛋白和纯化全病毒的最佳包被抗原浓度均为2μg/mL,检测样品最佳检测稀释度分别为1∶10和1∶30,重复性试验的变异系数均小于10%,PEDV阳性乳汁的最低检测稀释倍数分别为1∶320和1∶960,对猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病病毒等阳性乳汁均无交叉反应性,两种方法对临床样品检测符合率为97.48%。表明两种方法均具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于检测和评价乳汁中特异性PEDV IgA抗体的水平。     

猪流行性腹泻病毒血清IgA抗体间接ELISA方法的建立

建立了检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,旨在为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段。以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度、封闭液、稀释液以及待测血清和酶标抗体的最佳工作浓度,建立了PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法。进而检测方法的特异性、批内与批间重复性,评价建立方法与国外试剂盒的符合率,分析ELISA检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性。结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,封闭液和抗体稀释液为含5%犊牛血清的PBS,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1 500倍稀释。结果表明,该ELISA能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10%,与现有试剂盒的总符合率为94.8%,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P<0.001)。