非洲猪瘟的研究进展

非洲猪瘟是猪的一种急性、高度接触性传染性疾病,其特征是发病过程短,死亡率高达100%,临床表现为发热,皮肤发绀,淋巴结、肾及胃肠黏膜明显出血。科学有效的检测诊断方法是阻止非洲猪瘟大范围暴发流行的有效手段。为了进一步了解该病,对非洲猪瘟的流行病学、病原学、临床症状以及诊断检测技术进行了综述,从而为我国诊断、预防和控制非洲猪瘟提供理论依据。     

马鼻肺炎双重荧光定量PCR检测 方法的建立与应用

【目的】建立快速、准确检测马疱疹病毒 1 型（EHV1）和 4 型（EHV4）的双重荧光定量 PCR 检 测方法。【方法】以 EHV1、EHV4 的全基因组序列为基础，针对糖蛋白 B（gB）基因的保守序列，分别设计 EHV1 与 EHV4 特异性引物和探针，筛选引物，优化反应条件，分型检测马疱疹病毒（EHV1、EHV4）。【结果】 检测到 EHV1、EHV4、EIV、EAV、EVJ 和 EIAV 标准毒株，EHV1、EHV4 为阳性结果，其余病毒为阴性结果； EHV1、EHV4 DNA 模板的最低检出限为 1.47×102 copies/μL；检测 64 份临床样本，阳性检出率为 14.06%，病 毒分离证实 100% 符合。【结论】双重荧光定量 PCR 检测方法可直接应用于检测并区分 EHV1、EHV4, 并可在 短时间内获得对 EHV1/EHV4 特异性及敏感性的检测结果。     

H9N2禽流感病毒陕西分离株HA基因的遗传变异分析

【目的】对H9N2禽流感病毒HA基因全序列进行分析,了解H9N2禽流感分离毒株HA基因的遗传变异情况。【方法】根据GenBank已发表的H9N2毒株的基因序列,设计了2对H9N2禽流感病毒HA基因特异性引物,运用RT-PCR方法对XL、LF和WN分离株进行了扩增,然后将PCR产物送出进行测序,用DNAstar 5.0软件对测序结果进行了分析。【结果】XL、LF和WN 3株H9N2分离株间HA基因的核苷酸同源性为99.7%~99.9%,推导氨基酸的同源性为99.1%~99.6%;分离株与参考毒株HA基因核苷酸的同源性为96.2%~99.0%,推导氨基酸的同源性为96.2%~98.6%。通过对3个H9N2分离株间HA基因核苷酸序列的比较,发现共有5个位点的核苷酸发生突变,其中4个位点核苷酸的改变导致相应的氨基酸发生突变。HA蛋白的7个受体结合位点比较保守,但是其在551~553位缺失了潜在的糖基化位点。【结论】3株H9N2分离株裂解位点氨基酸序列完全符合低致病性禽流感的特征RSSR↓G,但是LF裂解位点附近333位脯氨酸(Pro)突变为组氨酸(His),即非极性氨基酸向极性带正电氨基酸(碱性氨基酸)转变,裂解位点的变化可能是H9N2禽流感病毒生物学特性改变的分子基础。     

H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因双重RT-PCR定型检测方法的建立与应用

为了建立适用于临床诊断的H1N1亚型猪流感病毒快速检测方法,本研究根据GenBank已登录的H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因序列设计RT-PCR扩增引物,以H1N1亚型猪流感病毒、H3N2亚型猪流感病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒为试验对照,通过优化RT-PCR反应条件和反应体系,建立了H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因双重RT-PCR定型检测方法。同时,运用H1N1亚型猪流感病毒血凝和血凝抑制试验方法和本研究建立的方法对165份猪病料样品进行了对比验证。结果表明,本研究建立的H1N1亚型猪流感病毒双重RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、重复性,所扩增的目的基因片段大小分别为428 bp和678 bp左右,可检出最小基因组RNA浓度为2.9×10-5μg/μL。本研究建立的方法和H1N1亚型猪流感病毒血凝和血凝抑制试验方法均从同一份猪肺脏样品中检测出H1N1亚型猪流感病毒,其余样品中均未检出H1N1亚型猪流感病毒,两种方法符合率为100%。本研究建立的方法适用于H1N1亚型猪流感病毒双基因定型检测,可在H1N1亚型猪流感病毒流行病学调查和临床诊断中应用。     

H1N1亚型猪流感诊断方法的研究新进展

2009年,甲型H1N1流感在全球多个地方猪和人群中暴发,给人民群众的生命健康带来了巨大威胁,给经济发展和社会稳定产生了严重影响.及时快速的诊断是有效控制疫情大规模暴发的最有效途径之一.近几年随着现代分子生物学技术发展,猪流感诊断方法在快速、准确性方面有了很大提高.对H1N1猪流感概况及猪流感的诊断方法进行了综述.     

猪瘟病毒E2基因自杀性DNA疫苗的构建及动物免疫试验

从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2.用BamH Ⅰ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA1-E2.对目的基因E2的大小、插入位置、方向和读码框经PCR、酶切和序列测定进行鉴定.用纯化的阳性质粒pSCA1-E2转染PK-15细胞,转染后48 h荧光抗体法检测E2蛋白的表达;纯化的pSCA1-E2质粒分别免疫小鼠(10 μg/只)和试验猪(600μg/头),二免后分别检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数和猪血清抗猪瘟特异性抗体水平.结果表明,构建的重组质粒中E2基因的大小、插入位置、方向和读码框均正确,获得了重组表达质粒pSCA1-E2;转染后48 h可检测到转染的PK-15细胞中E2蛋白的表达.免疫小鼠产生较高水平的淋巴细胞刺激指数,免疫猪可检测到抗CSFV特异性血清抗体;表明构建的pSCA1-E2重组质粒能激发实验动物的免疫反应.     

串珠镰刀菌素对仔猪血清中猪瘟抗体水平的影响

以三元杂仔猪为材料,研究了串珠镰刀菌素对仔猪猪瘟抗体水平的影响。结果表明,试验组在免疫后的第3、4、5、6周猪瘟抗体水平较对照显著降低(P0.01)。说明串珠镰刀菌素可降低猪体内血清中猪瘟抗体水平,抑制机体体液免疫的功能。     

一例贵宾犬两前肢桡尺骨双骨折病例治疗与分析

犬桡尺骨干双骨折,又称前臂双骨折,是常见的犬前臂损伤病例,多见于体型较小的犬种。报道了一只8月龄贵宾犬两前肢桡尺骨双骨折病例的诊断,采用钢板内固定术治疗,预后良好。临床上犬前臂骨折大都是桡骨、尺骨同时骨折,根据患病动物的情况采用内固定或外固定术是可行的治疗方法。     

蛋鸡群沙门氏菌的监测

[目的]了解蛋鸡场沙门氏菌的感染情况。[方法]采用沙门氏菌抗原和抗体检测方法对2012~2015年采集的广东省蛋鸡场样品进行检测。采用ELISA方法对1784血清样品进行了肠炎沙门氏菌和1 387份血清样品进行了鼠伤寒沙门氏菌抗体检测;采用凝集试验方法对1 391份血清样品进行了鸡白痢沙门氏菌抗体检测;采用细菌培养、PCR方法对采自广东省的活鸡/死鸡、环境拭子等1 458份样品进行了沙门氏菌检测。[结果]肠炎、鼠伤寒、鸡白痢3种血清型沙门氏菌抗体的阳性率分别为16.70%、10.09%和1.01%;沙门氏菌抗原检测的阳性率为1.65%。[结论]蛋鸡群中存在肠炎、鼠伤寒、鸡白痢等3种沙门氏菌不同程度的感染,但是蛋鸡群的总体感染率不高。     

广州市部分区域猫泛白细胞减少症流行现状调查

[目的]了解猫泛白细胞减少症病毒在广州家猫和流浪猫中的流行情况,分析FPV威胁广州家猫和流浪猫的潜在风险。[方法]采用猫泛白细胞减少症免疫胶体金快速检测试纸条和PCR检测方法对广州5家动物医院采集的3 004份猫样品进行检测与分析。[结果]猫泛白细胞减少症免疫胶体金快速检测试纸条检出10份疑似猫泛白细胞减少症阳性样品,采用猫泛白细胞减少症PCR检测方法检出13份猫泛白细胞减少症阳性样品。13份阳性样品来源于96份具有临床症状且未免疫样品,49份家猫样品中有6份呈阳性,47份流浪猫样品中有7份呈阳性,阳性率分别为12.2%(6/49)和14.9%(7/47),发病季节以9~10月多发,发病年龄集中在0~6月龄。[结论]与外界接触和未免疫疫苗可能是导致猫感染FPV的重要原因。因此,家猫加强疫苗接种,减少与未知免疫背景的猫只接触,减少家猫感染FPV的潜在风险。