应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

青海省部分地区商品猪旋毛虫感染的血清学调查

以旋毛虫肌幼虫排泄分泌)抗原作为检测抗原,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法,分别对采集自青海省西宁市张氏生猪屠宰场、互助县屠宰场、平安县屠宰场的商品猪血清进行旋毛虫抗体检测,共检查猪血清1 065份.结果阳性血清为19份,阳性率为1.78％.可见在青海省商品猪中旋毛虫具有一定的感染率,动物卫生监督以及肉品检疫部...     

猪伪狂犬病血清抗体gE-ELISA检测方法的建立

以纯化的猪伪狂犬病病毒gE蛋白为抗原建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接gE-ELISA方法。最佳反应条件为，抗原包被浓度为1．7μg／mL，待检测血清1：40稀释。与伪狂犬病阳性血清反应为阳性，与猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和猪伪狂犬病gE缺失疫苗接种的猪免疫血清及SPF猪阴性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数分别不超过5％和9％。用该方法与Ingezim ELISA试剂盒和HerdChek ELISA试剂盒同时对172份血清进行了平行检测，总符合率分别达93．6％和83．7％。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体间接gE-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性，且重复性好，可用于猪伪狂犬病野毒感染猪的血清抗体检测。     

胶体金法检测猪旋毛虫病的敏感性研究

将3组试验仔猪分别人工感染旋毛虫幼虫1000条／头、5000条／头和25000条／头,感染后每7d抽血1次,采集全血和血清;感染后46d,将试验猪全部剖杀,取全血、血清和膈肌肉待检。所有样品均用胶体金试纸检测猪旋毛虫抗体和抗原,膈肌肉样品并需用显微镜检查有无旋毛虫包囊。结果表明,最早可于感染后21d,在低感染量试验组的1头仔猪的血清中检出阳性抗体;血清样品的抗体检出率高于全血样品;在血液和血清中未检出虫体抗原;抗体试纸条的检测结果较为准确可靠,而且敏感性明显强于抗原试纸条。建议在检疫检验工作中使用抗体试纸条检测血清或肌肉样品。     

青海省部分猪场旋毛虫感染的血清学调查

采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法,对青海省部分猪场旋毛虫感染进行了血清学调查.在检测的717份血清中,阳性46份,阳性率为6.42%.湟源县、湟中县部分猪场旋毛虫感染血清阳性率较高,分别为17.27%(24/139)和14.67%(11/75).可见猪旋毛虫感染在青海省呈散在分布,在湟源县、湟中县感染较为严重,...     

应用斑点酶联免疫吸附试验诊断猪旋毛虫病的研究

利用差速离心,TritonX-100处理,超速离心,在国内首次制得旋毛虫S_3抗原,其抗原性优于ES抗原。用该抗原建立诊断猪旋毛虫病的Dot-ELISA比常规ELISA敏感,与猪囊虫血清、猪弓形虫血清无交叉反应。对70份感染猪旋毛虫的阳性血清进行Dot-ELISA和常规ELISA检测,分别检出68份和66份,阳性符合率分别为97.1％和94.3％。对182份采自非疫区的被检仔猪血清进行检测,均末出现阳性,阴性符合率为100％。结果表明,Dot-ELISA除和常规ELISA一样具有敏感性高、特异性强、稳定性好等优点外,还具有快速简便的优点。     

猪、犬旋毛虫成虫免疫原性试验

通过提取猪、犬旋毛虫成虫抗原，制备成虫油佐剂免疫原，在小鼠体内进行同源特异性免疫试验和交叉免疫试验。试验得到猪旋毛虫成虫抗原同源免疫减虫率为５５．８０％，其对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是３５．１１％；犬旋毛虫成虫抗原同源免疫的减虫率为３９．００％，其对猪旋毛虫的交叉免疫减虫率是２４．９６％。试验结果揭示，猪、犬旋毛虫成虫具有一定的免疫原性，其交叉免疫减虫率低于同源特异性免疫。猪旋毛虫成虫抗原对犬旋毛虫的交叉免疫与犬旋毛虫自身的同源特异性免疫差异不显著。     

猪旋毛虫McAb快速ELISA法的应用研究

本研究用保存在小鼠中的猪旋毛虫、旋毛形线虫（Trichinella spiralis)、犬旋毛虫、本地毛形线虫（Trichinella nativa)四种不同来源的旋毛虫隔离种接种断乳仔猪，定期用ELISA法检查抗体出现情况，剖杀后用鲜肉及冷冻不同时间的肉制成肉汁，进行ELISA抗体检测。结果表明：用ELISA法检出阳性的时间为：猪旋毛虫和T.spiralis在16天以后，犬旋毛虫和T.nativa在24天以后；鲜肉肉汁ELISA检测结果与其血清结果基本相同；冷肉肉汁检疫中，短期内冷冻对ELISA检测结果影响也不大。     

上转发光免疫层析技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体方法的建立

基于上转发光免疫层析(UPT-LF)技术,旨在建立UPT-LF快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法。采用间接法制备UPT-LF试纸条,通过共价偶联使二抗山羊抗猪IgG和上转发光纳米颗粒(UCP)结合,并加入样品垫和被检血清结合,以旋毛虫肌幼虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因(WM5)表达的蛋白WM5为猪抗旋毛虫IgG特异性结合抗原,WM5(2 g/L)与兔抗山羊IgG(0.5 g/L)喷点于分析膜上作为UPT-LF试纸条检测带(T)与质控带(C),该试纸条命名为Tsp-UPT-LF。Tsp-UPT-LF通过对95份阴性血清检测,确定Tsp-UPT-LF的Cutoff值为0.099。Tsp-UPT-LF和ELISA分别对273份旋毛虫感染猪血清样本进行检测,总符合率为92.31%,一致性系数Kappa(K)值为0.837,表明两种方法具有高度一致性。Tsp-UPT-LF检测旋毛虫、猪囊虫、华支睾吸虫感染的猪血清Tsp-UPT-LF呈现对旋毛虫良好的特异性。Tsp-UPT-LF检测感染50 000条旋毛虫肌幼虫28 d猪血清为阳性,T/C值0.109,122 d阳性最强,T/C值为0.207,至425 d时阳性值有所下降,抗旋毛虫IgG阳性率为71.4%。本研究建立了基于UPT-LF技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法,为猪旋毛虫即时感染检测、确保食品安全提供了一种可参考的检测方法。     

山东省部分地区屠宰场猪旋毛虫病检测

为了解山东省屠宰场猪群的旋毛虫感染情况,对2015—2017年从全省9个市猪屠宰场采集的758头份血清,采用ELISA方法进行旋毛虫抗体检测,发现近3年的旋毛虫抗体阳性率分别为1.42%、1.54%、1.74%,平均阳性率为1.58%。对12份ELISA检测阳性猪的膈肌肉样进行旋毛虫压片镜检和消化法检测,均未发现旋毛虫虫体。ELISA抗体检测结果表明,山东省部分地区屠宰猪群存在不同程度的旋毛虫感染,且在个别地区呈持续感染状态。     

副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立

采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该方法有很高的特异性和重复性,14个发病猪场100份血清检测结果Hps抗体阳性检出率为94%,明显高于细菌分离鉴定检测结果。     

猪沙波病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

以原核表达重组蛋白作为抗原建立了猪沙波病毒(SaV)抗体的间接ELISA检测方法。使用矩阵滴定法确定抗原包被浓度为6.4μg/mL,血清稀释倍数为1∶50。试验选用1%BSA作为封闭液,血清和二抗的最佳作用时间分别为60 min和40 min。选择无致癌的TMB为底物,确定TMB最佳反应时间为10 min。通过对20份猪阴性血清样品的检测,计算阳性判定值为0.203。通过交叉试验、批内和批间重复性试验证明,本研究建立的SaV间接ELISA检测方法具有特异性高,重复性好的特点,可用于猪沙波病毒抗体的检测。     

猪、犬旋毛虫新生蚴免疫原性试验

将猪、犬旋毛虫新生蚴制备成免疫原,在小鼠体内进行免疫试验,免疫１周后攻击感染肌幼虫,３５日蝗检查肌幼虫的减虫率。结果表明,猪旋毛虫新生蚴的同源免疫和其对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率分别为８３．１１％和７９．３９％,犬旋毛虫新生蚴的为８１．３７％和８０．６９％。结果揭示,旋毛虫新生蚴具有良好的免疫原性,同源免疫的减虫率比交叉免疫的高,猪旋毛虫新生蚴抗原对犬旋毛虫的交叉免疫与犬旋毛虫新生蚴抗原的同源免疫在减虫率上差异不显著。     

猪伪狂犬病病毒间接ELISA检测方法的建立

以纯化的PRV抗原为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立了可检测PRV血清抗体的间接ELISA诊断方法。标定抗原的最佳包被量为0.802μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶100,最佳作用时间为60min,判定标准为OD 450nm值大于0.357为阳性,小于0.296为阴性,在0.296与0.357之间为可疑。该方法检测其他6种常见猪病病毒(CSFV、PCV-2、PRRSV、PPV、JEV、TGEV)的阳性血清均为阴性;与商品化ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为90.0%、87.1%、92.3%。本研究建立的PRV间接ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV免疫猪群抗体监测、快速诊断和PR流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。     

用ELISA检测猪细小病毒(PPV)血清抗体

采用差速离心、透析、聚乙二醇(PEG)浓缩方法纯化猪细小病毒(PPVDK7113)制备抗原。用纯化的PPV抗原包被聚苯乙烯微量反应板，建立了检测PPV血清抗体的间接ELISA。抗原最佳包被浓度为6．3μg/ml，被检血清最佳稀释度为1：200。用建立的ELISA检测山东、东北、广东等地的426份血清，结果阳性率为36．2％。与华中农大病毒室提供的猪细小病毒乳胶凝集试验试剂盒相比，其结果符合率为98．6％。通过阻断试验、交叉试验，说明本方法在特异性上达到了较为满意的结果，且易于操作，适用于血清学定性诊断、检疫和大规模的血清流行病学调查。     

单克隆抗体在动物衣原体病血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，对本地区所采得的231份猪血清，128份羊血清，90份牛血清进行检测，结果：猪血清阳性检出率为30．7％，羊为25．8％，牛为32．2％；选猪、羊、牛血清各50份，用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与的间接血凝试验（IHA）进行比较，猪血清ELISA阳性检出率为30％，IHA为26％，ELISA比IHA试验高出4个百分点。牛血清ELISA阳性检出率为32％，IHA为24％，ELISA比IHA试验高出8个百分点。羊血清ELISA阳性检出率为26％，IHA为22％，ELISA比IHA高出4个百分点。     

同仁县隆务镇商品猪旋毛虫感染情况的调查

目的了解同仁县隆务镇猪肉旋毛虫感染情况。方法采集市场销售的猪肉膈肌脚393份，常规压片镜检，计数包囊。结果在检测的样品中，阳性18份，猪旋毛虫感染率为4．58％。结论同仁县隆务镇猪肉旋毛虫感染率较高，需要立即加强猪旋毛虫病防治工作。     

间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。     

猪流行性腹泻病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原,优化ELISA反应条件,建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对PEDV血清检测为阳性,对猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒感染猪的阳性血清检测结果均为阴性;其批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。采用建立的ELISA方法检测了130份临床样品,其中78份血清样品为PEDV抗体阳性。表明建立的以重组N蛋白为包被抗原检测PEDV血清抗体的方法可以用于检测PEDV感染及相关的流行病学调查。