猪、犬旋毛虫成虫免疫原性试验

通过提取猪、犬旋毛虫成虫抗原，制备成虫油佐剂免疫原，在小鼠体内进行同源特异性免疫试验和交叉免疫试验。试验得到猪旋毛虫成虫抗原同源免疫减虫率为５５．８０％，其对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是３５．１１％；犬旋毛虫成虫抗原同源免疫的减虫率为３９．００％，其对猪旋毛虫的交叉免疫减虫率是２４．９６％。试验结果揭示，猪、犬旋毛虫成虫具有一定的免疫原性，其交叉免疫减虫率低于同源特异性免疫。猪旋毛虫成虫抗原对犬旋毛虫的交叉免疫与犬旋毛虫自身的同源特异性免疫差异不显著。     

猪、犬旋毛虫交叉免疫原性的研究

通过在小鼠体内感染猪、犬旋毛虫肌幼虫50条，再用同源免疫和交叉免疫方法攻击感染旋毛虫肌幼虫200条，来检测其肌幼虫的减虫率。试验得到猪旋毛同源免疫的减虫率为87.47%，对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是86.47%，犬旋毛虫同源免疫的减虫率为83.70%，其对猪旋毛虫的交叉免疫是83.46%。试验表明：旋毛虫肌幼虫自然免疫具有较好的免疫保护作用，交叉免疫的保护率低于同源免疫。     

旋毛虫P53ES重组蛋白对小鼠的免疫保护作用

为进一步探讨旋毛虫P53基因原核表达重组蛋白的免疫保护作用,本实验采用纯化的重组蛋白作为抗原免疫小鼠,免疫剂量为50μg/100μL,每隔10d免疫1次,共3次。末次免疫后10d,每只小鼠以200条旋毛虫肌幼虫攻虫。分别检查感染后7d小鼠肠道内成虫数量、体外培养雌虫所产新生蚴数量以及感染后35d肌肉荷虫量。结果显示:小鼠肠道内成虫、新生蚴和肌幼虫的减虫率分别为61.9%、53.45%和71.48%,表明旋毛虫表达P53基因的重组蛋白对小鼠产生了较好的免疫保护效果。     

五种旋毛虫抗原对猪的免疫保护作用研究

本实验研究了旋毛虫肌幼虫可溶性粗抗原、排泄分泌抗原（ＥＳ）、表面抗原（ＳＡ）及成虫ＥＳ、ＳＡ５种抗原对猪的免疫保护作用。结果５种抗原对猪均具有一定程度的免疫原性，可诱导猪体产生对攻击感染的抵抗力（减虫率），其中肌幼虫粗抗原为５５．２０％；肌幼虫ＥＳ为４２．５６％，肌幼虫ＳＡ为７２．２１％；成虫ＥＳ为３２．９２％；成虫ＳＡ为４２．１７％。免疫５种抗原后用肌幼虫“Ｂ”抗原、新生幼虫可溶性抗原及成虫可溶性抗原进行ＥＬＩＳＡ检测，均可测出血清抗体应答反应，其中以相应抗原测出的抗体应答较强烈。免疫５种抗原后猪外周血液中Ｂ淋巴细胞减少，Ｔｈ及Ｔｓ增加，Ｔｈ／Ｔｓ比值降低，呈暂时的细胞免疫抑制现象。     

各旋毛虫隔离种某些生物学特性研究

通过对猪、犬旋毛虫和国际标准隔离种：旋毛形线虫（Trichinella spiralis)和本地毛形线虫（Trichinella nativa)的研究发现，猪旋毛虫和旋毛形线虫在小鼠隔肌中出现保姆细胞的时间比较早，分别于感染第16天和18天出现，第38天和36天所有幼虫都已形成保姆细胞，而犬旋毛虫和本地毛形线虫出现保姆细胞的时间较晚，于感染第20天和22天出现，第32天完全形成。猪旋毛虫和旋毛形线虫雌虫体外培养24小时平均产新生幼虫数分别为66．0和76．2，而犬旋毛虫和本地毛形线虫分别是28．8和22．0，前二者在雌虫体外产新生幼虫能力上明显高于后二者。研究结果表明，黑龙江猪旋毛虫为旋毛形线虫，犬旋毛虫为本地毛形线虫。     

旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂定位及免疫保护效果评估

探讨旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ts-serpin)的抗原性、定位及免疫保护性。将本实验室前期构建的旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达载体进行大量表达纯化。利用不同感染时间的猪旋毛虫阳性血清,通过Western blot方法对纯化后的重组丝氨酸蛋白酶抑制剂(rTs-serpin)进行反应原性鉴定,并制备多克隆抗体,用间接免疫荧光法检测Ts-serpin在旋毛虫肌幼虫中的定位。随后将rTs-serpin免疫小鼠进行免疫保护效果评估。结果显示:rTs-serpin可被不同感染时间的猪旋毛虫阳性血清特异性识别,表明rTsserpin是高反应原性抗原;Western blot结果显示旋毛虫排泄分泌物和旋毛虫虫体粗提取物均存在Ts-serpin,间接免疫荧光显示Tsserpin定位在旋毛虫肌幼虫表皮中;免疫保护试验结果显示rTs-serpin免疫后的小鼠旋毛虫肌幼虫减虫率约为32.2%。综上所述,Tsserpin主要定位在旋毛虫肌幼虫表皮,rTs-serpin具有较强的抗原性,且对小鼠具有免疫保护作用。     

不同佐剂免疫原对猪旋毛虫病的免疫保护作用比较研究

采用７ 日龄旋毛虫成虫可溶性抗原与弗氏完全佐剂（ＦＣＡ） 、白油司班佐剂、ＩＳＡ２０６佐剂和蜂胶佐剂乳化制备免疫原，对试验猪腹腔注射免疫３ 次，每次间隔７ｄ ，每头猪的免疫剂量为０５ｍｇ。最后一次免疫后７ｄ 攻击感染旋毛虫肌幼虫２００ 条／ｋｇ 体重。于感染后第３５ｄ 和第１２０ｄ 剖杀试验猪，用消化法检查计算每克肌肉的荷虫数。结果４ 种佐剂免疫猪肌幼虫的减虫率分别为９６１２ ％ 、８７９７ ％ 、８９８４ ％ 和９５１５ ％ ，其中以ＦＣＡ 和蜂胶佐剂免疫组的保护作用最好。表明４ 种佐剂均具有免疫增强作用，而蜂胶佐剂在乳化程序、注射、价格及免疫增强作用等方面都优于其它佐剂，更具有开发应用前景。     

旋毛虫各隔离种雌虫体外产新生幼虫能力的研究

本试验对旋毛虫各隔离种雌虫体外产新生幼虫能力进行了研究.结果显示,猪旋毛虫和旋毛形线虫(Trichinellaspiralis)雌虫体外培养24小时,平均产新生幼虫数分别为66.00±7.34和76.20±7.57,而犬旋毛虫和本地毛形线虫(Trichinellanatiua)分别是28.80±4.30和22.00±3.22,前者在雌虫体外产幼虫能力上明显高于后者.研究结果表明,黑龙江猪旋毛虫相当于旋毛形线虫,犬旋毛虫相当于本地毛形线虫.     

猪旋毛虫病疫苗的区域试验

在河南省某县一个猪旋毛虫病高发流行区进行了旋毛虫成虫可溶性抗原疫苗及灭活新生细虫疫苗的区域试验。免疫前用镜检法抽检某自然村商品猪２１头，查出有虫猪４头，感染率达１９．０５％。成虫可溶性抗原疫苗每头腹腔注射免疫０．５ｍｇ，间隔１０天作２次免疫；新生幼虫疫苗每头猪腹腔注射１０万条，同样间隔１０天作２次免疫。两种疫苗分别免疫猪８６及４４头。免疫后４－７个月内剖杀抽检免疫效果。共抽检未免疫自然感染对照猪４     

旋毛虫各隔离种雌虫生殖能力的实验研究

本试验对旋毛虫各隔离种雌虫体外产新生幼虫能力进行了研究。结果显示，猪旋毛虫和旋毛形线虫(Trichinella spiralis)雌虫体外培养24h平均产新生幼虫数分别为66.00±7.34和76.20±7.57，而犬旋毛虫和本地毛形线虫(Trichinella nativa)分别是28.80±4.30和22.00±3.22，前者在雌虫体外产幼虫能力上明显高于后者。研究结果表明，黑龙江猪旋毛虫相当于旋毛虫形线虫，犬旋毛虫相当于本地毛形线虫。     

Immunity in swine inoculated with larvae or extracts of a pig isolate and a sylvatic isolate of Trichinella spiralis

Inoculation of swine with a sylvatic isolate of Trichinella spiralis, designated T s nativa, resulted in low numbers of muscle larvae, compared with muscle larvae accumulation in swine inoculated with a pig type of T s spiralis. Despite low infectivity of T s nativa for swine, primary inoculation resulted in high levels of immunity against challenge infection with T s spiralis. This immunity was expressed in accelerated expulsion of challenge adults from the intestine and reduced numbers of muscle larvae. Pigs inoculated with T s nativa developed cellular and humoral responses similar to those in pigs inoculated with T s spiralis. However, in immunoblots, sera from pigs inoculated with T s nativa recognized additional proteins in muscle larvae excretory-secretory (ES) products, compared with sera from pigs inoculated with T s spiralis. Active immunization of pigs with ES products from T s nativa resulted in numerically higher, but not significantly different levels of immunity, compared with pigs immunized with ES from T s spiralis. The highest levels of immunity were obtained in pigs immunized with a T s spiralis newborn larval extract. The combination of ES products and newborn larval extract did not result in additive levels of immunity. These results indicate that the major immune effector response to Trichinella sp in pigs is against the newborn larvae, regardless of the genetic type of Trichinella sp.     

毛形线虫各隔离种保姆细胞形成时间的研究

通过对 4个毛形线虫隔离种保姆细胞形成时间的研究 ,发现分离自中国猪的旋毛形线虫和波兰猪旋毛形线虫 (Trichinella spiralis)在小鼠膈肌中出现保姆细胞的时间比较早 ,分别于感染第 16天和 18天出现 ,第 36天和 38天所有幼虫都已形成保姆细胞 ,而分离自犬的毛形线虫和熊的本地毛形线虫 (Trichinella nativa)出现保姆细胞的时间较晚 ,于感染第 2 0天和 2 2天出现 ,第 32天完全形成。结果表明 ,中国猪旋毛形线虫与波兰猪旋毛形线虫 ,犬毛形线虫与本地毛形线虫分别是同一旋毛虫隔离种     

旋毛虫各隔离种对小鼠的感染性研究

比较研究了黑龙江省猪、犬旋毛虫及国际标准虫种旋毛形线虫(Trichinella spiralis)和本地毛形线虫(Trichinella nativa)对小鼠的感染性异同。结果表明，四者对小鼠的感染力存在着显著差异，猪旋毛虫和旋毛形线虫在小鼠体内的繁殖力指数(RCI)分别为121.01±7.80和149.86±7.47；而犬旋毛虫和本地毛形线虫的RCI分别为60.98±5.05和55.15±4.69。由实验结果可认为黑龙江省的猪旋毛虫相当于旋毛形线虫，而犬旋毛虫相当于本地毛形线虫。     

用DNA限制性片段长度多态性鉴定旋毛虫各隔离种

以旋毛虫国际标准虫种：旋毛形线虫（Trichinella spirlais）和本地长形线虫(Trichinella nativa）作对照,应用DNA限制性片段长度多态性（PELP）技术对黑龙江省猪、犬旋毛虫进行虫种鉴定。结果显示：猪旋毛虫和旋毛形线虫酶切图谱相同;犬旋毛虫和本地毛形线虫酶谱一致。结果提示,黑龙江猪旋毛虫为旋毛形线虫,犬旋毛虫为本地毛形线虫。     

A Trichinella murrelli infection in a domestic dog in the United States

Trichinella murrelli infection was diagnosed in a naturally infected Beagle bitch from VA, USA, where encapsulated larvae were found in histological sections of several skeletal muscles. A laboratory reared dog fed infected muscles resulted in viable muscle larvae that were subsequently infective to Swiss-Webster mice. Multiplex PCR using larvae from the experimentally infected dog demonstrated two distinct bands migrating at 127 bp and 316 bp which together are diagnostic for T. murrelli; the isolate was assigned the ISS code: ISS1608 by the International Trichinella Reference Centre. This is the first report of T. murrelli infection in a companion animal.     

PAPS免疫微球快速诊断猪旋毛虫病的研究

应用新型的聚醛化聚苯乙烯（ＰＡＰＳ）载体微球与最佳的旋毛虫抗原共价交联制备成特异性强、敏感性高、重复性好的快速诊断试剂,应用于猪旋毛虫病的生前诊断。我们对旋毛虫各个发育期的虫体和分泌排泄抗原进行了分析研究,并以同一蛋白质浓度（０．６ｍｇ／ｍＬ）的成虫,新生幼虫、肌幼虫、成虫ＥＳ、肌幼虫ＥＳ、肌幼虫Ａ峰、肌幼虫Ｂ峰等七种抗原分别与ＰＡＰＳ载体微球共价交联制成各种快诊试剂,然后进行效果比较试验,其结果     

旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析

应用旋毛虫感染猪血清，对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆pBK-cMV-WN10的序列分析结果表明。cDNA全长为1352bp。含有1个1218bp的完整的开放阅读框架(ORF)，编码的多肽由406个氨基酸残基组成，其相对分子质量理论推导值为45900，等电点为5．43，N末端的信号肽及糖基化位点(NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白，氨基酸序列19～156与158～295为重复区域，相似性为74％．C末端有1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域，但旋毛虫p46000抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异，可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。PCR结果显示。从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和5日龄成虫cDNA中均扩增出此基因，表明此基因在旋毛虫各个时期均有表达。