猪流行性腹泻病毒S1蛋白-铁蛋白纳米颗粒的制备及其免疫原性

应用融合PCR技术获得猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)纤突(spike, S)蛋白的S1结构域基因与铁蛋白(ferritin, FTN)基因的拼接产物(S1-FTN),然后分别将S1基因和S1-FTN克隆至原核表达载体pCold 1,构建重组表达质粒pCold 1-S1和pCold 1-S1-FTN。将重组原核表达质粒分别转化大肠杆菌BL21,在低温(16℃)下用IPTG诱导重组S1蛋白和S1-FTN表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的目的蛋白,并在透射电镜下观察蛋白的形态。随后将24只6～8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组：S1组、S1-FTN组和空白对照组,8只/组。每只小鼠肌肉注射40μg S1抗原,共免疫3次,分析S1-FTN纳米颗粒和S1蛋白诱导的免疫反应。结果显示,构建的原核表达载体pCold 1-S1和pCold 1-S1-FTN在低温下经IPTG诱导,能够分别表达S1蛋白和S1-FTN重组蛋白,2个蛋白均以可溶性形式表达,并且S1-FTN重组能够自组装形成纳米颗粒;S1-FTN纳...     

猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性/经典毒株多重RT-PCR方法的建立及应用

为了建立鉴别猪瘟病毒(Classical swine virus,CSFV)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)及经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)的快速检测方法,根据GenBank中公布的已知序列,设计合成了针对CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV特异性引物。经过引物筛选及对退火温度、引物比例等扩增条件的优化,建立了用2对引物同时检测CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法可同时扩增出287bp的CSFV、374bp的HP-PRRSV和464bp的C-PRRSV目的核苷酸片段,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等无交叉反应,最低可以检测到11.3pg的CSFV、4.7pg的HP-PRRSV和2.8pg的C-PRRSV总RNA。分别用多重和单项RT-PCR检测了从河北省采集的31份血清或组织样品,其中CSFV、HP-PRRSV、C-PRRSV以及CSFV与HP-PRRSV混合感染的检出率分别为19.4%、22.6%、0%与9.7%,多重与单项RT-PCR的符合率为100%。本试验建立的多重RT-PCR方法可同时鉴别CSFV、HP-PRRSV与C-PRRSV,适于猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测与流行病学调查。     

基于质粒表达的siRNA对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的抑制作用

猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的必要病原,对养猪生产构成了严重威胁,但当前缺乏有效的防治手段.为了探索治疗PCVAD的新途径,分别针对PCV2的病毒复制相关蛋白基因(rep)与衣壳蛋白基因(cap),构建了PCV2特异的siRNA表达质粒(pGensil-R259、pGensil-C297和pGensilC490)和PCV2非特异的阴性对照质粒(pGensiI-SCR).在脂质体介导下,将构建的siRNA表达质粒与阴性对照质粒转染PK-15细胞,转染质粒20 h后感染PCV2.结果质粒表达的特异siRNA抑制了PCV2 DNA的合成及Rep和Cap蛋白的表达,使病毒滴度(TCID50)显著下降;针对靶基因不同位点的siRNA的抑制效果不同,病毒感染后36 h内,siRNA对PCV2的抑制作用最强,随后有所下降,但直至感染后60 h仍然能够显著抑制PCV2复制.实验结果提示质粒表达的特异siRNA能够显著地抑制PCV2的增殖,但这种抑制功能与作用时间呈负相关.     

种鸡场鸡白血病的净化研究(Ⅰ)--ALV感染情况调查

应用双抗主酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）对北京地区和河北部分种鸡场及１家ＳＰＦ鸡场进行了鸡白血病病毒感染情况的调查，结果发现：不同品系的鸡对ＡＬＶ的感染率有显著差异；分别采用蛋清与肛拭作为试验样品，得到的结果是不相同的，研究认为，选择蛋清作为试验样品是鸡场净化过程中较理想的材料之一。     

鸡毒支原体油乳剂灭活苗对降低鸡毒支原体垂直传播作用的研究

本试验将30只MG阴性的20周龄的蛋种鸡随机分为4组，Ⅰ组于21和25周龄、Ⅱ组仍于25周龄时分别颈部皮下接种MG油乳剂灭活苗0.5ml/只，Ⅲ组于攻毒后1周接种1ml／只，另设一组对照，不接种疫苗。各组均在29周龄时用通过SPF鸡两次复壮的MG－BG44T株经左胸气囊和鼻腔攻毒。收集攻毒后1－7周内所产的蛋，用PCR方法检测鸡蛋卵黄膜中的MG。结果在攻毒后7周内各免疫组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）的垂直传播率显著低于对照组（P＜0.01），分别比对照组低26.37%、12.8%、13.64%。攻毒后各免疫组和对照组经4次采样均可从喉头拭子中分离到MG但免疫组的分离率较低。攻毒后第7周从对照组鸡的气管、肺、气囊中均可分离到MG，而试验Ⅰ组仅在气管和肺中分离到了MG。试验Ⅰ组和对照组鸡的输卵管、心、肝、脾和肾中均未分离到MG。     

种鸡场鸡白血病净化的研究(Ⅲ)-ALV检测不同样品种鸡场净化效果的比较

应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (DAS- EL ISA)在种鸡白血病的净化中 ,针对同一种鸡群 ,同时采用蛋清和肛拭作为试验材料 ,实验反映的结果不同 ;将产第一枚蛋为阳性的鸡隔离饲养 ,检测其以后蛋中 AL V的状况 ,结果发现 :在随后的 2 5天左右的每一枚蛋清中都能检测到 AL V:在不同种鸡场分别采用蛋清、蛋清和肛拭同时作试验样品进行净化 ,跟踪结果发现 :在不同种鸡场中 ,AL V阳性感染率都有不同幅度的下降。另一方面 ,检测雏鸡的胎粪 ,淘汰阳性者 ,到其产蛋期抽检蛋清 ,该群鸡 AL V阳性率有所下降     

冀南地区禽病防治刍议

养禽业上联种植业，下接加工业，具有较长的产业链。冀南地区是我国三大养禽基地之一，养禽业已成为本地广大农民致富奔小康的重要产业。但也应看到，阻碍养禽业健康发展的大敌仍然是传染病，特别是现代化养禽业饲养高度集中，贸易频繁，加之多年来在品种选育上偏重于生产性能的提高，而忽视了机体抗病性能的保持与加强，使其更易受到病原体的侵袭。因此，家禽传染病的控制乃至消灭愈来愈显得突出，亦是国内外禽病工作者致力研究解决的重大课题。本文仅就冀南地区禽病的发生、流行、诊断、预防、治疗及存在的问题作一总结，供同行参考。一冀…     

脑心肌炎病毒先导蛋白结构与功能研究进展

脑心肌炎病毒(EMCV)可感染人和多种动物,其基因组先导蛋白编码区是比较保守的区域之一,含有两种高度保守的功能域,即锌指基序和酸性结构域。研究表明,先导蛋白基因组具有一定的容纳外源基因片段的能力,同时先导蛋白与病毒复制、干扰素产生以及细胞凋亡等均有关系。论文综述了EMCV先导蛋白结构与功能的研究进展。     

鸡传染性支气管炎的诊断

鸡传染性支气管炎的诊断邵殿仁，宋勤叶，（执笔）赵献国（河北农业大学邯郸分校，永年０５７１５０）一、发病情况各种年龄的鸡只均可感染发病，但雏鸡更为严重。一般在发病４～６天后开始死亡，病程为１～２周，有的拖延至３～４周。对我校诊断的２００多病例统计如下：...     

保定地区仔猪大肠杆菌病的调查与对策分析

仔猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起猪的一种·临床常见的细菌性传染病,它严重影响着保定地区养猪业的健康发展。本试验通过对保定地区不同县市的多个规模化猪场致病性大肠杆菌进行分离、培养和生化鉴定,掌握了保定地区仔猪大肠杆菌的发病情况,探讨其综合防治对策,为保定地区仔猪大肠杆菌病的有效防治提供理论参考依据。