定安母猪流产病原检测

为了解引起定安母猪流产和死胎的主要病毒病原情况，笔者采用荧光定量PCR方法对2021年11月至2022年10月采自海南定安县32个定安母猪养殖场及养殖户267份流产胎儿及组织排泄物样品进行了猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)及猪乙型脑炎病毒(JEV)5种病原的检测。结果显示，267份病例样品大部分来源于海南气温相对较低的月份(占比63%)及母猪妊娠后期(占比77%)。5种病原阳性检出率为36.70%(98/267),从高到低依次为PRRSV(17.98%)、PCV2(11.61%)、JEV(9.74%)、PRV(6.37%)、PPV(4.49%)。病原以单一感染为主，混合感染以双重感染为主，多种病原感染少见。为相关养殖场及养殖户做好定安母猪繁殖障碍性疫病的防控措施提供参考依据。     

贵州省规模化养猪场繁殖障碍性疾病的血清学调查

采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT),对贵州省4个地区6个规模化猪场240份血清进行猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪圆环病毒2型(PCV2)抗体水平检测。结果:CS-FV、PPV和PRV免疫抗体阳性率分别为64.2%、77.9%和59.2%;PRRSV、PCV2抗体阳性率分别为10.4%和32.5%。上述结果表明,猪细小病毒病、猪伪狂犬病和猪瘟免疫效果比较理想,但6个规模场存在PRRSV和PCV2混合感染,应引起各养殖场高度重视。     

应用PCR方法对广西公猪精液的伪狂犬病、圆环病毒2型和细小病毒混合感染情况的检测

应用PCR技术,2006年对广西11个猪场的公猪精液235头份进行猪伪狂犬病(PRV)、圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)混合感染情况的检测。结果,235份样品中PRV阳性率为5.53%,PCV2阳性率为17.02%,PPV阳性率为13.62%;PRV与PCV2、PPV均存在不同的混合感染现象。结果表明,我区公猪精液PRV、PCV2和PRV带毒情况比较严重,成为当前造成母猪繁殖障碍和规模场猪群发病的主要原因,这将为今后种猪场对PRV、PCV2和PRV的控制与净化工作提供了依据。     

广西猪细小病毒与PRRSV、CSFV、PCV2、PRV混合感染的检测

应用PCR技术,对广西南宁、玉林、贵港、柳州、钦州和桂林6个市的10个规模化猪场送检的141份病猪组织样品进行猪细小病毒(PPV)的检测;同时,对鉴定为PPV阳性的样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CS-FV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,以确定猪群中PPV与其它病毒混和感染情况。结果,所有样品诸病毒的阳性检出率达17.73%(25/141);流产胎儿PPV阳性率为19.57%(9/46),繁殖障碍母猪扁桃体的PPV阳性率为17.74%(11/62),发病断奶仔猪组织病料的PPV阳性率为15.15%(5/33),PPV与PRRSV、CSFV、PCV2和/或PRV4种病毒均有混合感染现象,混合感染样品占PPV阳性样品的48.00%(12/25)。     

猪病毒性繁殖障碍疾病的流行与防制

近年来,猪传染性繁殖障碍类疾病严重危害我国的养猪业,引起猪繁殖障碍的病毒主要有猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、日本脑炎病毒、呼肠病毒、腺病毒、猪流感病毒、猪巨细胞病毒等。在我国广泛流行和危害严重的主要是PRRSV、PPV、PRV、PCV2、CSFV。这些疾病的共同特征是引起母猪繁殖机能障碍,表现为不孕,妊娠母猪出现早产、流产、死胎、弱胎、木乃伊,初生仔猪、断奶仔猪、育成猪大批死亡,或者发热、咳嗽、严重呼吸困难等症状,免疫力下降,继发感染…     

猪主要繁殖障碍疾病病原的多重实时定量PCR快速检测

本研究旨在建立多重Real-time PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV).根据GenBank数据库中PRRSV、PCV2、PRV、和PPV的核苷酸序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件,检测系列稀释的纯化阳性质粒,建立检测PRRSV、PCV2、PRV和PPV的单项和多重Real-time PCR方法.灵敏度和特异性试验结果表明,无论是单项和多重Real-time PCR检测,该方法都具有高度特异性,与其它病原检测无明显交叉反应;对4种病毒的最低检测量为＜101拷贝或1 TCID50,检测灵敏度比常规PCR高100倍.对40份临床样本进行检测,多重Real-time PCR检测结果和单项Real-time PCR检测结果完全一致.建立的同时检测PRRSV、PCV2、PRV和PPV的多重Real-time PCR方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能对样品进行定量检测等优点.     

我国部分地区4种猪病毒病感染的血清学调查

为了解我国部分地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的流行与分布情况,研究采用ELISA(酶联免疫吸附试验)方法分别对2013—2014年采自河北、河南、山东、江苏等部分地区规模化养殖场和散养户的882份发病猪血清样品进行CSFV、PRV、PRRSV、PCV2抗体检测。结果显示,两年CSFV平均抗体阳性率为72.8%,PRV平均抗体阳性率为72.6%,PRRSV平均抗体阳性率为78.5%,PCV2平均抗体阳性率为61.5%。CSFV、PRV、PRRSV抗体阳性率2014年较2013年有下降的趋势,PCV2抗体阳性率2014年较2013年有略微上升的趋势,CSFV、PRV、PRRSV、PCV2的2种、3种及4种病原混合感染抗体阳性率2014年较2013年有上升的趋势,表明我国猪群中CSFV、PRV、PRRSV、PCV2的混合感染现象日益突出,应引起对这4种猪病的重视,加强这4种猪病疫苗的免疫接种,有效控制猪病的发生和流行。     

云南省部分地区种公猪精液携带繁殖障碍性病毒调查研究

为了解云南省部分地区规模化猪场种公猪精液繁殖障碍病毒性病原的感染状况,应用PCR对2014年—2016年间云南省部分地区规模化猪场212份种公猪精液进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)5种与猪繁殖障碍有关的病原检测。结果表明,PPRSV阳性率为7.08%,CSFV阳性率为3.77%,PCV2阳性率为6.60%,PRV阳性率为3.30%,没有检测出PPV,PRRSV和PCV2的感染率呈上升趋势,其他疫病保持相对平稳态势。所有的混合感染样品中,均检测出了PRRSV,其中PRRSV和PCV2的混合感染最为常见。结果提示,控制猪场疫病发生的关键是控制PRRSV和PCV2的流行,有必要加强对种猪群的疫病病毒检测,推行种猪场主要疫病的控制与净化工作。     

某猪场CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的报道

贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和(或)产死胎症状,猪场工作人员向笔者实验室送检同窝流产死胎4只。根据流行情况和临床特征,初步判断与病毒感染有关。为筛查具体病原,本实验室将送检死胎组织混合样品分别对CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV六种常见病毒进行病原核酸检测,结果显示该猪场发病猪存在CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。     

云南省猪病毒病病原学检测及结果分析

为了解云南省猪主要病毒病的流行趋势,采用PCR和RT-PCR方法对2013—2015年云南省规模猪场和养猪散户送检的临床病例样本进行主要病毒病的病原学检测,主要包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、日本脑炎病毒(JEV)等。结果表明:PRRSV、PCV-2、CSFV、PRV、PPV在云南省内普遍存在,给猪病防控带来了重大隐患。     

2015—2019年湖南省5个原种猪场主要繁殖障碍性疫病监测

为了解湖南省原种猪场主要繁殖障碍性疾病的流行情况及免疫抗体水平,2015—2019年对5个原种猪场,采集血清及对应扁桃体样品各1 000份进行主要繁殖障碍性疾病检测,其中对扁桃体样品进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）、伪狂犬病病毒（PRV）、圆环病毒2型（PCV2）、猪细小病毒（PPV）病原检测,对血清样品进行CSFV、PRRSV、PRV-gB免疫抗体检测。结果显示：CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV2和PPV病原阳性率分别为0、2.1%、1.3%、9.5%、22.1%、28.9%;部分场PRV感染抗体（gE）反复出现转阳,多数猪场PCV2和PPV感染较严重;CSFV、PRRSV、PRV-gB免疫抗体合格率分别为96.9%、99.7%、98.7%,均超过了国家规定的70%的最低标准。结果表明,这5个原种猪场的CSFV、PRRSV、PRV抗体保护水平良好,且猪瘟基本达到了免疫无疫状态,但部分原种猪场仍存在不同程度的PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV2、PPV感染,其中PCV2与PPV感染较为严重,需通过免疫、监测、生物安全控制等综合措施,加强控制与净化。     

2017-2020年浙江省猪主要病毒性传染病的流行病学调查与分析

为了解浙江省猪主要病毒性传染病的流行情况及变化规律,本试验对2017-2020年浙江省不同地区规模化猪场送检的血清和病料样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)4种疫病痛原和抗体检测.抗体检测结果显示:PRRSV、CSFV、PCV2、PRV...     

2014-2018年广西6种猪主要病毒性繁殖障碍疫病流行病学调查

试验旨在了解广西猪主要病毒性繁殖障碍疫病的发生态势,为预防和控制此类疫病提供科学依据。采用RT-PCR/PCR方法对2014年3月至2018年2月采自广西的349份流产胎儿样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)及猪乙型脑炎病毒(JEV)6种主要病毒性繁殖障碍疫病病原的检测并分析其阳性检出率在不同年份、季节之间的差异及病原混合感染情况。结果显示,2014-2017年,6种病原的猪场阳性率从高到低依次为JEV(36.00%)、PRRSV(16.00%)、PCV2(9.00%)、PRV(7.00%)、PPV(6.00%)和CFSV(5.00%),样品阳性检出率从高到低依次为JEV(27.06%)、PRRSV(6.18%)、PRV(5.88%)、PCV2(3.82%)、CSFV(2.35%)和PPV(2.35%)。季节因素对6种病毒性繁殖障碍疫病的发生有一定影响:JEV在夏季、秋季检出率较高,春季、冬季检出率较低;PRRSV一年四季检出率均较高,且无明显差异;PCV2在春季检出率较高,其次是夏季和冬季,秋季检出率较低;PRV在春季、冬季检出率较高,夏季、秋季检出率均为0;PPV在夏季检出率较高,其次是春季和秋季,冬季检出率为0;CSFV在冬季检出率最高,其次是夏季,春季和秋季检出率均为0。流产胎儿以单一感染为主,6种病毒均存在不同程度单一感染情况,单一感染率JEV最高(23.82%)、PCV2最低(0.59%);混合感染以双重感染为主,其中以2016年双重感染情况较多,且感染组合多样;三重感染情况较少、仅在2016年送检样品中发现1例,未发现四重及四重以上感染情况。调查结果表明,2014-2017年,JEV均有较高的阳性检出率,已成为广西部分猪场母猪流产最主要病毒性病原。PRRSV和PRV仍是目前引起广西猪场母猪流产的主要病毒性病原。     

猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒多重PCR检测方法的建立

本研究根据GenBank上已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的基因序列,设计了3对特异性引物,扩增PCV2、PRV、PPV,建立了同时检测PCV2、PRV、PPV的多重PCR方法。所扩增特异性产物片段大小分别为350、191、270 bp。该方法特异性强、敏感性高,可以用于猪圆环病、猪伪狂犬病、猪细小病的实验室诊断和流行病学调查。     

应用PCR方法对一起疑似感染猪瘟病毒的检测

采用猪繁殖障碍性病毒性疫病六重PCR检测方法对贵州省某猪场送检的疑似感染猪瘟病毒(CFSV)病料进行了猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、CFSV和猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的快速检测,结果表明该猪场送检的仔猪同时感染PCV2和PRRSV两种病毒,CFSV检测呈阴性。     

母猪繁殖障碍性疾病的病因调查与防制措施

为研究由病原微生物导致的母猪繁殖障碍性疾病,在宁夏原州区和青铜峡2个县区,对26340头繁殖母猪进行了现场调查和临床检查,重点对繁殖障碍的14个猪场的260头母猪进行病因调查和血清抗体检测.结果表明,宁夏母猪繁殖障碍的平均发病率为28.15％,主要由伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪温病毒(CSFV)及猪生殖和呼吸系统综合征病毒(PRRSV)感染引起.     

PCV2、PRV、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用

根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)有关基因序列,通过序列比对及参考相关文献,设计了3对特异性引物。通过优化,建立了可同时检测PCV2、PRV及PPV 3种病毒的多重PCR方法。结果表明,该方法能同时检测到PCV2、PRV及PPV的最低核酸量分别为40pg、72pg、46pg。对猪圆环病毒3型(PCV3)、猪细环病毒(TTSuV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)无扩增。应用该方法对87份临床样品进行检测,PCV2阳性检出率为28.7%(25/87),PRV野毒检出率为11.5%(10/87),PPV检出率为12.6%(11/87)。其中2种以上病毒混合感染阳性率为13.8%(12/87),3种病毒同时感染的阳性率为2.3%(2/87),其结果也与单一PCR结果一致。研究结果提示,该方法可用于PCV2、PRV、PPV三种病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。     

猪繁殖障碍病毒性疫病六重PCR检测方法的建立及应用

参照GenBank中相关的基因序列,设计了6对引物分别用于扩增PRV gE、PPV NS1、PCV ORF2、PRRSV ORF7、CSFVE2、JEVE基因的部分片段。敏感性和特异性试验结果表明,该mPCR对6种病毒的最低核酸检测量分别为PRV 6.6pg、PPV 96pg、PCV 12.9pg、PRRSV 10.5pg、CSFV 51pg、JEV 46pg,对猪流感病毒(SIV)、大肠杆菌(E.coli)的扩增结果均为阴性。103份临床病料检测结果表明,上述6种猪病毒性疫病在贵州省猪群中普遍存在且混合感染情况严重。该六重PCR方法不仅实现了上述6种病毒的同时检测,更实现了DNA病毒及RNA病毒的同步检测,能够对PRV、PPV、PCV、PRRSV、CSFV、JEV单个或混合感染的临床病料进行快速鉴别诊断。     

猪木乃伊胎病原体混合感染的多重PCR诊断

2013年11月,贵州省都匀市某猪场发生了一起母猪流产、产死胎为特征的疾病,为确诊该猪场病原诊断类型,试验采用猪繁殖障碍性病毒性疫病六重PCR检测方法对送检木乃伊胎病料进行了猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CFSV)和乙型脑炎病毒(JEV)的快速检测,结果表明该猪场送检病料存在PCV2和JEV两种病毒的混合感染。     

猪呼吸和繁殖障碍类病毒性疫病多重PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中PRRSV ORF6、PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、SIV M、JEV NS1、CSFV E2等基因的部分片段,分别设计特异性引物,用实验室已保存的病毒及阳性病料,通过对7个病毒单一PCR的退火温度和敏感性进行优化和检测,再选择合适的多重PCR缓冲体系及酶,优化退火温度、模板及引物浓度,最后检测多重PCR的敏感性、特异性及重复性,建立一种能够同时且快速鉴别PRRSV、PCV2、PPV、PRV、SIV、JEV和CSFV这7种常见猪呼吸道和繁殖障碍类病毒的多重PCR检测方法,并用其对2017-2019年贵州部分地区的150份临床病料进行检测。多重PCR特异性检测结果表明:从混合病毒基因组中分别扩增出大小为224,353,424,549,684,831,1 137 bp的特异性片段,未扩增出E.coli、APP、PEDV及正常组织的DNA/RNA;敏感性试验表明,该方法对病毒的最低检测量分别为PRRSV 94 pg、PCV2 66 pg、PPV 68 pg、PRV 20 pg、SIV 35 pg、JEV 17 pg、CSFV 14 pg;重复性试验表明:相同条件下的6次重复试验均能扩增出7个病毒的目的条带;应用试验表明:150份临床病料中二重感染阳性率高达66.00%(99/150);三重感染阳性率达11.33%(17/150);四重感染阳性率达2.00%(3/150);五重感染阳性率达0.67%(1/150);六重感染阳性率为0,七重感染阳性率为0,阳性PRRSV、PCV2、PPV、JEV、SIV的多重PCR与单一PCR的符合率均为100.00%,阳性CSFV和PRV的符合率为90.00%以上,研究建立的多重PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,对猪场猪呼吸和繁殖障碍类病毒病混合感染的快速诊断具有十分重要的意义。