仔猪大肠杆菌的分离及PCR检测

正猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌菌所致的一种仔猪的传染病,严重影响仔猪成活率。其临床表现主要为仔猪腹泻(黄痢、白痢)和水肿病。具有发病迅速、病程较短、发病率和死亡率均高的特点~([1])。该病对规模化集约化养猪业危害较大,给猪场带来较大的经济损失~([2])。笔者于2015~2017年开展了细菌分离和分子学(PCR方法)工作,为贵州省猪腹泻和水肿病大肠杆菌的临床鉴定和流行病学调查提供了可靠     

禽白血病A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病诊断

采用病理组织学方法和分子生物学技术对某肉种鸡场的感染鸡进行实验室诊断,在肿胀的肝、肾和法氏囊组织切片中观察到成淋巴细胞增生病变。针对禽白血病病毒(ALV)群特异性抗原P27基因进行RT-PCR扩增,肾、肺、肝、脾病料样本中ALV病原核酸的检出率分别为100%、100%、90%和50%。将扩增的目的基因序列与GenBank公布的ALV参考毒株相应序列进行比较,核苷酸序列的同源性达到93.6%~97.7%。取ALV囊膜糖蛋白gp85基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR产物。试验结果证实本次疫病是由ALV-A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病。     

应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测牛结核病

本试验应用聚合酶链式反应(PCR)技术原理,研究建立了牛结核病PCR检测方法。试验结果表明:该方法的敏感性测定模板浓度为30.4pg,特异性测定牛结核分枝杆菌在478bp出现特异扩增带。通过对298头份牛奶和229份牛全血样本进行检测,检出阳性牛奶样本33份,阳性全血样本43份;鲜牛奶样本同时还用罗氏培养后采取PCR方法进行检测,检出阳性样本34份;全血样本同时还用PPD进行皮内试验,检出阳性样本52份。试验表明:牛结核病PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、快速等优点,为牛结核病的早期诊断提供了科学依据。     

HPLC法同时测定和评价“黔中金荞麦”中4种成分含量

“黔中金荞麦”是贵州省农业科学院畜牧兽医研究所选育的优质牧草（品种登记号：2019581）。为建立同时测定该药材中表儿茶素、原花青素B2、芦丁和槲皮素的检测方法,考察其含量多样性。采用高效液相色谱法建立检测方法,测定并分析其含量与野生金荞麦的差异。结果得出检测方法为：C18柱（250×4.6 mm,5 μm）,乙腈-0.4%磷酸水梯度洗脱,进样量10 μL,流速0.7 mL/min,检测波长254 nm,温度30 ℃;原花青素B2、表儿茶素、芦丁和槲皮素分别在5～85 μg/mL（r2=0.9998）、5～80 μg/mL（r2=0.9998）、0.5～8 μg/mL（r2=0.9996）、0.125~2.0 μg/mL（r2=0.9999）范围内呈现良好线性关系,加样回收率高;黔西和麦坪的“黔中金荞麦”4种成分总含量高达1189.70μg/g、1108.01μg/g,其中原花青素B2、芦丁和槲皮素含量最高,丹寨野生金荞麦表儿茶素含量最高。试验结果说明本法准确可靠,适合“黔中金荞麦”的内控质量监测,“黔中金荞麦”中活性物质含量高且质量稳定,优于野生金荞麦。因此本试验为该药材的开发应用提供了理论基础。     

副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用

为了解副猪嗜血杆菌病在贵州对猪群的危害和流行规律、进一步开展副猪嗜血杆菌病的防治研究提供参考依据,特进行副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用研究。根据副猪嗜血杆菌（HPS）16S rRNA基因序列设计1对引物,通过优化组合试验,对贵州省分离的HPS进行PCR扩增,扩增出长为650bp的目的基因片段,而大肠埃希氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、葡萄球菌等扩增结果为阴性。采用该方法对贵州发病猪群中350头疑似病例进行PCR检测,检出率为8％～49％。该方法检测副猪嗜血杆菌敏感性高、特异性好,可用于副猪嗜血杆菌的快速诊断。     

贵阳地区新发生猪传染病的血清学检测

采用血清学方法对贵阳地区部分种猪场、规模饲养场及农村散养户猪群分别进行PPV、PRV、PRRS、PCV及APP抗体水平监测。以乳胶凝集试验检测PPV抗体阳性率为0%（0/160）;以间接ELISA检测PCV和PRRS的抗体阳性率分别为14%（28/200）和0.62%（1/160）;以竞争ELISA检测PRV的gpI抗体阳性率为19.14%（36/188）;以间接血凝试验检测APP的抗体阳性率为19.14%（36/188）。结果表明,PPV和PRRS似乎不是引起贵阳地区猪繁殖障碍的主要原因,而PRV和APP在非免疫猪群中的抗体阳性率较高,应引起该地区养猪业的高度重视。     

斗鸡新城疫强毒感染的诊治

为对某斗鸡场病死斗鸡病死因进行确诊,进行了流行病学调查、剖检病变观察、细菌分离及RT-PCR检测试验,结果该场病死斗鸡肛门周围粘有灰绿色粪便,腹部、颈部、胰腺、腺胃等多处出血;在培养基上肝脏组织液无细菌生长。针对新城疫病毒（NDV）强弱毒基因序列之间的差异设计通用、强毒和弱毒引物,样本RNA经RT-PCR扩增后,通用型和强毒型鸡新城疫病毒扩增出特异性片段,弱毒引物未扩增出相应片段。由此确诊该场病死斗鸡为新城疫强毒感染。     

规模化猪场致病性仔猪黄白痢大肠杆菌耐药性检测

为揭示规模化猪场致病性仔猪黄白痢大肠杆菌的耐药性,为生猪养殖选择用药提供借鉴,2012年至2014年期间,通过细菌分离鉴定,从贵州省贵阳市21家发生仔猪黄白痢的规模化猪场分离得到21株致病性仔猪黄白痢大肠杆菌。药物敏感性检测结果表明,分离细菌不同比例地对14种兽医常用抗生素表现耐药性,链霉素和氨苄青霉素耐药性最为严重;头孢噻呋钠和氟苯尼考是较为敏感的抗生素药物,但随着时间推移,头孢噻呋钠和氟苯尼考的敏感菌株比例在逐步下降。     

荔波瑶山鸡催乳素基因5′-调控区24-bp插入／缺失变异与早期产蛋性状的关系

为提高贵州地方鸡种荔波瑶山鸡的产蛋性能,以催乳素基因 PRL 为候选基因之一,利用 PCR 方法直接检测催乳素基因 PRL 的5′-调控区24-bp插入／缺失（－377～－354bp）变异情况,并分析其与产蛋性能的关系。结果表明,荔波瑶山鸡该位点83．8％为缺失型,无插入纯合子;不同基因型（PRL＋／＋、＋／－和－／－型）对荔波瑶山鸡早期产蛋性能均无显著影响（P＞0．05）。     

猪繁殖与呼吸综合症感染的诊断

猪繁殖与呼吸综合症是猪的一种高度接触性传染病,主要特征是引起妊娠母猪早产、流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍及各种年龄猪呼吸系统疾病,仔猪高死亡率、感染猪出现免疫抑制等。高致病性猪繁殖与呼吸综合症由于持续感染、无特效药物以及隐性感染等原因,造成难以防控。猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）感染猪时能够引起免疫抑制,从而导致猪瘟病毒（ SCFV）、猪细小病毒（PPV）、猪狂犬病病毒（PRV）等混合感染或继发感染。针对贵州省贵阳市某猪场发病母猪送检样,根据流行病学与临床症状,对送检病死猪进行PRRSV、 SCFV、 PPV和PRV检测,对疫情做出确定性诊断。