抗CDV、CAV卵黄抗体的制备

本研究用CDV、CAV分别免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，用海藻酸钠—硫酸铵法提取卵黄抗体(IgY)，并对提取的IgY采用了SDS-PAGE和低压层析检测纯度，结果表明用该法提取的IgY纯度较高。用间接BUSA测定提取的IgY活性，结果证明提取的抗CAV IgY的活性较高，而抗CDV IgY的活性损失较大。     

卵黄免疫球蛋白IgY的提纯及应用研究进展

１IgY的性质鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）是鸡卵黄中存在的主要免疫球蛋白，当用某种抗原免疫母鸡时，母鸡产生免疫反应，在卵黄成熟期，血液中的免疫球蛋白IgG选择性的转移到卵黄中，称卵黄免疫球蛋白IgY，IgY在子鸡孵育过程中和孵育后对子鸡起保护作用。IgY的性质与哺乳动物的IgG类似，其分子量约１８０kDa，由两条轻链和两条重链组成（２H＋２L），其中轻链（L）分子量约２２０００Da，重链分子量约６７０００Da，等电点接近５．２。含氮量为１４．８％。IgY的氨基酸组成与鸡血清IgG和牛IgG不同（如表１）。持良好。根据MakotoSh…     

卵黄抗体在猪生产中的应用

卵黄抗体(IgY)是蛋鸡受特定抗原刺激后体内产生的特异性并被转移和贮存在卵黄中的免疫球蛋白。用鸡卵黄大量生产和制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。介绍了IgY的结构和进入卵黄的机制,综述了免疫鸡卵黄抗体在猪生产中的应用及其制备技术的研究进展。     

鸡卵黄抗体研究进展

当用某种抗原免疫产蛋母鸡时，可产生相应的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)储存于卵黄中：母鸡经免疫应答后．可从其不断产出的鸡卵黄中得到大量的、均一的、高效的IgY。IgY类似哺乳动物的IgG，但又有其独特的优点：本文对IgY的性质、免疫程序、分离提纯方法及其在检测诊断上和疾病防治方面的应用作了较详细的论述。可以预见，随着研究的进一步深入，IgY的应用将不断扩大。     

重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡后血清抗体与IgY变化规律研究

研究采用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,探索特异性卵黄免疫球蛋白(IgY)的产生和变化规律。产蛋母鸡经免疫后每周收集所产蛋,分别提取IgY,测定血清抗体效价与抗体的产生量,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,Western blotting检测总IgY含量。以未免疫鸡IgY作阴性对照,作血清抗体与IgY变化的动态曲线。取三次免疫后的蛋鸡,解剖分离出各级卵泡,观察各级卵泡发育程度。ELISA结果显示:随着卵泡的生长,卵泡细胞分泌的IgY聚集到卵泡卵黄,卵泡卵黄中IgY的含量在逐渐增加。Western blotting显示:随免疫次数的增加,IgY含量增加。首免后第3天血清抗体被检出,以后逐渐上升,2周后达到高峰,维持到第8周后逐渐下降,到第15周仍可检出抗体。本研究表明:用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,血液中的抗体传递到卵黄需要一定时间,卵黄IgY动态变化规律与血清抗体基本一致。     

采用改良的水稀释法提取卵黄抗体的试验

以鼠伤寒沙门氏菌免疫产蛋鸡后，收集卵黄液，用水稀释法提取卵黄抗体(IgY)。实验中所用的水稀释法，即将释释倍数和稀释时的pH值均重新调整，且采取关键性的滤纸过滤，再盐析和柱层析，最后得到IgY的纯度为90％以上，表明改良的水稀释法可以较好的提纯卵黄抗体，避免了常规方法中除脂不彻底的弊端。     

卵黄抗体IgY在猪生产中的应用

卵黄抗体(YolkImmunoglobulin,IgY)是蛋鸡受特定抗原刺激后体内会产生特异性并被转移和贮存在卵黄中的免疫球蛋白。用鸡卵黄大量生产和制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。IgY可作为替代抗生素的新型绿色饲料添加剂。本文就免疫鸡卵黄抗体在猪生产中的应用作一综述。     

东乡绿壳蛋鸡卵黄与血清中IgY水平相关性研究

鸟类血清和卵黄中的总卵黄免疫球蛋白Y(IgY)含量可以作为健康状态的一个标志,同时卵黄抗体也是生物制药的重要材料。为了阐明鸡卵黄抗体和血清抗体总量的关系,以30只43周龄单笼饲养的东乡黑羽绿壳蛋鸡为试验动物,采集每只鸡的翅下静脉血样以及其所对应的鸡蛋,分离出血清并制备IgY样品。通过间接ELISA的方法对卵黄与血清中的总IgY水平进行了检测,并分析了两者之间的Pearson相关。结果表明:卵黄中总IgY水平与血清中总IgY水平之间具有显著的相关性(r=0.619;P0.01)。研究结果为通过检测血清中的IgY水平来对卵黄中IgY水平或者后代的获得性免疫水平进行预测提供了一个重要参数。     

抗肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌鸡卵黄抗体(IgY)的研究

通过ELISA试验发现鸡抗肠炎沙门氏菌或抗鼠伤寒沙门氏菌卵黄抗体(IgY)具有很高的特异活性。用冻干的卵黄水溶性组分制成的肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY粉末分别含有15．5％和10％的特异性IgY。抗肠炎沙门氏菌IgY与鼠伤寒沙门氏菌有53.3％的交叉反应，抗鼠伤寒沙门氏菌IgY与肠炎沙门氏菌有42.4％的交叉反应。曾有报道证明沙门氏菌特异性IgY可以抑制沙门氏菌在液体培养基中的生长。肠炎沙门氏菌在含有鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY的培养基中培养4—6小时的生长速率比对照组少4倍。通过细菌计数发现鼠伤寒沙门氏菌在含有特异性IgY培养基中培养6个小时后的数量比对照组少l.6cfu／ml。用免疫荧光技术和免疫电镜技术对IgY的特异结合活性作进一步的研究，发现沙门氏菌特异性IgY能够结合沙门氏菌表面的抗原上，并导致细菌表面结构改变。     

"酸化水-超滤"一体化技术提取IBDV IgY的研究

用“酸化水-超滤”一体化技术从高免鸡卵黄中提取IgY，其提取率为92％，适宜条件是：①原始高免卵黄14倍的蒸馏水做溶剂，pH值在7．0，静置孵化温度16℃，时间72h，吸出上清；②沉淀卵黄8倍的蒸馏水做溶剂，pH值在7．00，静置孵化温度16℃、时间24h，吸出上清，合并上清，进行超滤。超滤采用分子量为30kD的滤膜，可使上清液浓缩80倍以上，IgY被完全截留，去除水分和小分子杂质达到浓缩IgY的目的。     

Characterization of specific egg yolk immunoglobulin (IgY) against mastitis-causing Escherichia coli

The objective of this study was to estimate the in vitro activity of egg yolk immunoglobulin (IgY) against mastitis-causing Escherichia coli. Specific IgY was produced by hens immunized with formaldehyde killed E. coli O111 in long-standing immunization response (titer > or =6400 for 100 days) and was isolated from yolks with a purity of 86% by water dilution, salt precipitations and ultrafiltration. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) indicated the produced IgY specifically targeted E. coli O111 and five other E. coli strains which were isolated from mastitic cows. The growth inhibition activity of the specific IgY to bacteria was dose-dependent with an effective concentration of 20mg purified IgY per milliliter. The phagocytic activity of E. coli either by milk macrophages (MPhi) or by polymorphonuclear neutrophil leukocytes (PMN) in the presence of specific IgY was significantly higher than that with nonspecific IgY or without IgY (p<0.05), suggesting that it enhanced phagocytic activity. The current work suggests that this specific IgY has potential as a therapeutic treatment for mastitis in dairy cows.     

抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究

为制备抗猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法，本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡，收集免疫后所产的鸡蛋，分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯，然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果，获得可用于规模化生产的提纯方法；同时研究不同温度、pH条件下抗体活性，寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示，本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明，水稀释法提取的IgY浓度最高，为6.204 mg/mL；PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之，为4.673 mg/mL；水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低，为3.359 mg/mL。间接ELISA检测结果表明，水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高，为1：12 800；其次是PEG-6000，为1：6 400；而水稀释法最低，为1：1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价，发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明，提纯的IgY在37~60℃活性稳定；pH为4.0~11.0时具有良好的活性；在酸性条件下，20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。     

对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较

本文比较了水稀释-饱和硫酸铵沉淀法（法一）和水稀释-冰乙醇分级沉淀法（法二）分离提纯鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）的产率、纯度及抗体效价。结果表明：两种方法提取的IgY纯度均较高,法一纯化的IgY的产率及蛋白活性相对更好。     

蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取和纯化

通过对蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取,分别进行了两种粗提方法(水稀释法、Pectin法)和纯化方法(硫酸铵法、PEG6000法)的比较。结果显示,当蛋黄液经pH5.0蒸馏水10倍稀释粗提后,上清液中脂肪和IgY残余率分别为32.69%和68.34%,效果较好。采用12%(w/v)PEG6000、33%(v/v)饱和硫酸铵纯化IgY,其免疫活性残余率分别为63.5%和64.1%。SDS-PAGE显示,水稀释法和Pectin法提取的上清液中杂蛋白减少,硫酸铵和PEG6000纯化后的上清液中几乎无其他杂带。研究表明,水稀释法和Pectin法提取IgY具有简便、高效和无污染的特点,硫酸铵和PEG6000适合纯化IgY。     

鸡新城疫卵黄抗体IgY的分离提纯研究

本文对母鸡经鸡新城疫疫苗免疫接种后产生并富集在卵黄中的抗体IgY的提取纯化工艺条件进行了研究与优化，确定了去脂、提取抗体最佳工艺为：卵黄液用0．05mol／L,pH5.0的乙酸一乙酸钠缓冲液1：9倍稀释，搅拌15min，4℃静置10小时，抗体回收率为90％，去脂率为99％；该提取液用40％饱和度的硫酸铵盐析，得到的盐析液抗体回收率为82％，纯度达到69％。盐析液经截留分子量为100KD的有机陶瓷膜超滤后，截留液抗体回收率达到92％。纯度为85％。     

共表达K88/987p菌毛产肠毒素性大肠杆菌的分离鉴定及其卵黄抗体的制备

为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白免疫蛋鸡制备IgY,对该IgY的效价、特异性和体外抑菌效果进行了检测。结果表明,该分离株具有K88和987p 两种菌毛基因,纯化后的分离株菌毛具有较强的免疫原性,经3次免疫后产生的IgY对K88和987p全菌和菌毛的效价可达到1:64 000,分离株菌毛IgY能特异地与K88和987p反应,与K99、F41无交叉反应,5 mg/mL分离株菌毛IgY在体外具有很好的抑菌效果。     

Preparation and Identification of N-glycolylneuraminic Acid IgY Antibody

The experiment was carried out to establish a method for preparation and identification of N-glycolylneuramic acid IgY antibody.Neu5Gc was linked to carrier proteins by carbodiimide(EDC)method.After the immunization of immunogen to laying hens,the IgY antibody was gained.Neu5Gc-IgY was analyzed and identified by ELISA.The results of UV and agarose gel electrophoresis showed that the artificial antigens of Neu5Gc were successfully synthesized.The development of the IgY antibody titer was monitored by indirect ELISA.The result showed that the IgY antibody was generated at 7th day after the first immunization.The titer was gradually increased and reached its peak (1:10 000) at 63th day after the first immunization.The high titer of the IgY antibody maintained through the whole observation period.The sensitivity of anti-Neu5AGc IgY antibody was detected by the competitive blocking ELISA.The linearity about the first chicken of the standard curve showed good,the liner regression equation was y=30.28x+16.923,R²=0.9581.The IgY antibody gained in this study laid the foundation for the establishment of indirect ELISA immunoassay method for detecting Neu5Gc in red meat,milk and tumor tissues.     

N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定

本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R²=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。     

饲粮中添加卵黄抗体对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、肠道形态及肠道微生物菌群的影响

本试验旨在研究饲粮中添加卵黄抗体对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、肠道形态及肠道微生物菌群的影响。试验选取160头(25±1)日龄"杜×长×大"断奶仔猪,分为4个组,每个组4个重复,每个重复10头猪。各组分别饲喂以下4种饲粮:基础饲粮(对照组)、基础饲粮+0.4 kg/t硫酸黏杆菌素(抗生素组)、基础饲粮+1.0 kg/t卵黄抗体(卵黄抗体组)、基础饲粮+0.2 kg/t硫酸黏杆菌素+0.5 kg/t卵黄抗体(联用组)。试验期共计28 d。结果表明:1)与对照组相比,卵黄抗体组显著提高了断奶仔猪平均日增重(P0.05),显著降低了断奶仔猪料重比和腹泻率(P0.05),断奶仔猪平均日采食量无显著差异(P0.05)。与抗生素组相比,卵黄抗体组断奶仔猪生长性能无显著差异(P0.05),两者表现出相近的使用效果。2)与对照组相比,卵黄抗体组显著提高了断奶仔猪血清中总蛋白、白蛋白的含量(P0.05)。3)与对照组相比,卵黄抗体组显著增加了断奶仔猪回肠绒毛高度和绒隐比(P0.05),断奶仔猪十二指肠和空肠的绒毛高度、隐窝深度和绒隐比无显著差异(P0.05)。4)与对照组相比,卵黄抗体组显著降低了断奶仔猪回肠、盲肠中大肠杆菌数量(P0.05),显著增加了断奶仔猪回肠、盲肠中的乳酸杆菌数量(P0.05)。综上所述,饲粮中添加卵黄抗体能显著改善断奶仔猪生长性能,增强仔猪免疫力,提高肠道健康水平,促进有益菌生长,与抗生素有相近的使用效果,是很有发展潜力的抗生素替代品之一。