羊IL-1Ra基因全长cDNA克隆及生物信息学分析

试验旨在对羊白介素1受体颉颃因子（interleukin-1 receptor antagonist，IL-1Ra）基因进行全长cDNA克隆及生物学分析。根据布鲁氏菌感染羊白细胞层SSH cDNA文库中的IL-1Ra基因序列信息及已知核苷酸序列（GenBank登录号：KC425613.1）设计引物，利用RT-PCR结合RACE方法扩增并克隆IL-1Ra基因，对其进行序列及相关分子特性分析。结果表明，羊IL-1Ra基因全长为1 228 bp，可编码174个氨基酸，含有1个完整的IL-1保守结构域和1个IL-1Ra结构域（PHA02651结构域）。IL-1Ra分子质量为19 765.8 u，等电点（pI）为5.72，其分子式为C₈₈₅H₁₃₈₅N₂₃₅O₂₅₆S₁₁，且含有信号肽。二级结构分析显示，IL-1Ra分子存在较多的β折叠及受体结合位点，与三级结构预测结果一致，且与人/鼠IL-1Ra分子的空间结构相似度极高，达到90%以上。羊IL-1Ra有IL-1特有的三叶草结构，其酶结合结构域位于TYR⁴⁷至GLU⁶⁶之间。将羊IL-1Ra与牛、虎鲸、宽吻海豚、猪、家犬、人、鼠等14个物种进行蛋白质同源性比对，发现在各物种间存在5个高度同源的半胱氨酸位点。系统进化树分析发现，羊IL-1Ra基因全长cDNA所编码的氨基酸序列同山羊、牛单独形成一个分支。本研究结果为今后深入研究IL-1Ra基因的生物学功能奠定了基础。     

鲍曼不动杆菌雏鸡分离株CCGGD201101的分离、鉴定及致病性研究简

试验旨在鉴定吉林省某雏鸡孵育基地病死雏鸡组织中分离出的1株致病性菌CCGGD201101株并测定其致病性。对疑似致病菌进行生理生化试验、16S rDNA测序鉴定，并人工接种昆明鼠，测定其半数致死量，验证细菌毒力。经鉴定该菌为鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）。以鲍曼不动杆菌CCGGD201101分离株为研究对象，并以鲍曼不动杆菌标准株（ATCC 19606）为对照，测得半数致死量，进一步证明鲍曼不动杆菌病死鸡分离株CCGGD201101具有较强致病性。     

伏马菌素FB2间接竞争ELISA检测方法的建立

用卵清白蛋白与伏马菌素B2的偶联物(OVA-FB2)做包被抗原,标准伏马菌素B2(FB2)做竞争抗原,初步建立了检测玉米粉中伏马菌素B2的间接竞争ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,线性范围为7.81～250μg/L,最低检测限为6.09 μg/L.曲线回归方程为y=-47.038x+120.25,R2=0.983 5,批内平均变异系数为3.92%,批间平均变异系数为5.53%.对玉米粉加标样品测定结果表明,利用甲醇-EDTA法提取样品的平均加标回收率达到了96.11%.     

布鲁氏菌病的研究与防控进展

布鲁氏菌病（Brucellosis,简称“布病”）是由布鲁氏菌（Brucella）引起的危害严重的人畜共患病,主要危害人畜生殖系统,人与人之间几乎不传播,患病动物是主要的传染源,近几年疫情急骤回升。作者综述了布病的研究现状及其流行趋势,初步探讨布病综合防控面临的主要困境。     

石房蛤毒素单克隆抗体的制备及其特性研究

将石房蛤毒素（Saxitoxin,STX）与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶102400,抗体亲和常数为3.71×106 L/mol。     

抗盐酸克伦特罗单链抗体基因的克隆、序列分析及表达

提取分泌抗盐酸克伦特罗单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA,通过RT-PCR技术,扩增VH和VL,用一段柔性肽链-(G4S)3将VH和VL连接成ScFv。测序后经NCBI Blast分析,所得ScFv具有重组功能性鼠抗体可变区基因的特征。将所得目的基因与pET-22b( )连接,转化E.coli BL21,用IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析,37℃培养5 h表达量较大,25℃诱导表达以可溶性为主。     

N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定

本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R²=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。     

小尾寒羊白介素1β全长cDNA序列克隆及生物信息学分析

本研究旨在克隆白介素1β(IL-1β)全长cDNA,为深入研究其生物学功能提供全长cDNA信息和试验材料.本试验利用前人构建的布鲁氏菌强、弱毒株感染小尾寒羊白细胞层抑制性差减杂交(SSH)cDNA文库,获得小尾寒羊IL-1β部分cDNA序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE),克隆小尾寒羊IL-1β全长cDNA,并申请GenBank登录号KC425612.2.该cDNA全长1494 bp,含有801 bp开放阅读框(ORF),可编码266个氨基酸残基,预测其编码蛋白分子质量为30.622 ku,与林麝、牛、海豚、虎鲸的IL-1β一致性较高,亲缘关系较近.     

铜完全抗原的合成·鉴定及单克隆抗体的制备

[目的]获得抗Cu2＋的单克隆抗体。[方法]以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸（ITCBE）为双功能螯合剂,使Cu2＋分别与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）偶联,获得免疫原（Cu-ITCBE-BSA）和检测原（Cu-ITCBE-OVA）。用非变性聚丙烯凝胶电泳鉴定偶联结果。免疫Balb/C小鼠,通过细胞融合,获得能稳定分泌抗Cu2＋的杂交瘤细胞株,并通过亲和层析法纯化腹水获得抗Cu2＋的单克隆抗体。[结果]获得了1株能稳定分泌抗Cu2＋的单克隆抗体的细胞株（4A6）,所分泌的抗体亚类为IgG1,细胞培养上清效价可达1∶1.0×103,腹水效价可达1∶6.4×105。以该细胞株接种Balb/C小鼠腹腔,获得抗Cu2＋的腹水型单抗;该腹水经过亲和层析法纯化后,纯度可达95%。[结论]获得了抗Cu2＋的单克隆抗体,为环境水样中Cu2＋的免疫学检测奠定基础。     

小鼠CD40胞外段的原核表达及多克隆抗体的制备

为了探讨CD40抗体与CD40结合对B细胞应答小分子半抗原的增强作用,利用TRIzol法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,并反转录成cDNA;根据CD40的胞外段CDS设计引物,通过PCR扩增目的基因,构建pGEX4T-1-CD40表达载体,进行原核表达及多克隆抗体制备。结果表明,成功扩增了522 bp的目的基因,表达并纯化获得了45 ku的CD40重组蛋白,多克隆抗体抗体不但可与重组蛋白结合,与小鼠脾脏天然CD40蛋白也可以特异性结合。说明CD40重组蛋白表达成功,且制备的抗体有望模拟CD40L为B细胞活化提供第二信号。