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1.
试验旨在对羊白介素1受体颉颃因子(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)基因进行全长cDNA克隆及生物学分析。根据布鲁氏菌感染羊白细胞层SSH cDNA文库中的IL-1Ra基因序列信息及已知核苷酸序列(GenBank登录号:KC425613.1)设计引物,利用RT-PCR结合RACE方法扩增并克隆IL-1Ra基因,对其进行序列及相关分子特性分析。结果表明,羊IL-1Ra基因全长为1 228 bp,可编码174个氨基酸,含有1个完整的IL-1保守结构域和1个IL-1Ra结构域(PHA02651结构域)。IL-1Ra分子质量为19 765.8 u,等电点(pI)为5.72,其分子式为C885H1385N235O256S11,且含有信号肽。二级结构分析显示,IL-1Ra分子存在较多的β折叠及受体结合位点,与三级结构预测结果一致,且与人/鼠IL-1Ra分子的空间结构相似度极高,达到90%以上。羊IL-1Ra有IL-1特有的三叶草结构,其酶结合结构域位于TYR47至GLU66之间。将羊IL-1Ra与牛、虎鲸、宽吻海豚、猪、家犬、人、鼠等14个物种进行蛋白质同源性比对,发现在各物种间存在5个高度同源的半胱氨酸位点。系统进化树分析发现,羊IL-1Ra基因全长cDNA所编码的氨基酸序列同山羊、牛单独形成一个分支。本研究结果为今后深入研究IL-1Ra基因的生物学功能奠定了基础。  相似文献   
2.
将石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶102400,抗体亲和常数为3.71×106 L/mol。  相似文献   
3.
试验旨在鉴定吉林省某雏鸡孵育基地病死雏鸡组织中分离出的1株致病性菌CCGGD201101株并测定其致病性。对疑似致病菌进行生理生化试验、16S rDNA测序鉴定,并人工接种昆明鼠,测定其半数致死量,验证细菌毒力。经鉴定该菌为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。以鲍曼不动杆菌CCGGD201101分离株为研究对象,并以鲍曼不动杆菌标准株(ATCC 19606)为对照,测得半数致死量,进一步证明鲍曼不动杆菌病死鸡分离株CCGGD201101具有较强致病性。  相似文献   
4.
[目的]获得抗Cu2+的单克隆抗体。[方法]以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)为双功能螯合剂,使Cu2+分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫原(Cu-ITCBE-BSA)和检测原(Cu-ITCBE-OVA)。用非变性聚丙烯凝胶电泳鉴定偶联结果。免疫Balb/C小鼠,通过细胞融合,获得能稳定分泌抗Cu2+的杂交瘤细胞株,并通过亲和层析法纯化腹水获得抗Cu2+的单克隆抗体。[结果]获得了1株能稳定分泌抗Cu2+的单克隆抗体的细胞株(4A6),所分泌的抗体亚类为IgG1,细胞培养上清效价可达1∶1.0×103,腹水效价可达1∶6.4×105。以该细胞株接种Balb/C小鼠腹腔,获得抗Cu2+的腹水型单抗;该腹水经过亲和层析法纯化后,纯度可达95%。[结论]获得了抗Cu2+的单克隆抗体,为环境水样中Cu2+的免疫学检测奠定基础。  相似文献   
5.
本研究将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)肠毒素(B,D,E)融合表达蛋白的包涵体经过初步纯化,免疫吉戎獭兔制备血清抗体,经ELISA和琼脂扩散试验检测表明,表达的SA融合肠毒素以不同的抗体效价证明保留了天然毒素各自的抗原性,与多种非目标菌和毒素不反应,具有较好的特异性。由此说明表达产物可诱导机体产生广谱反应特性的抗体。本试验为融合肠毒素的进一步应用,以及建立食物中毒菌广谱、快速的检测方法奠定了基础。  相似文献   
6.
布鲁氏菌病的研究与防控进展   总被引:3,自引:2,他引:1  
布鲁氏菌病(Brucellosis,简称“布病”)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的危害严重的人畜共患病,主要危害人畜生殖系统,人与人之间几乎不传播,患病动物是主要的传染源,近几年疫情急骤回升。作者综述了布病的研究现状及其流行趋势,初步探讨布病综合防控面临的主要困境。  相似文献   
7.
Hepcidin(Hepc)是一类性质独特的抗菌肽,具有广谱的抗革兰氏阳性、阴性细菌和真菌等作用。利用RT-PCR和RACE等技术,从经过多种细菌攻毒的花鲈(Lateolabrax japonicus)肝组织中克隆出Hepc全长cDNA,命名为Hepc2,Genbank登录号为AY604195。Hepc2有581个碱基,其中阅读框有258个碱基,编码86个氨基酸。预测氨基酸序列和白鲈及其他鱼种在相同保守的区域有8个半胱氨酸,相对分子量为9418.55dal。在3’非编码区有225bp,包含终止密码子下游189nt处的多腺苷酸化AATAAA信号和212nt处的polyA信号。预测蛋白的信号肽断裂位点在第24和第25个密码子之间。通过与白鲈(Morone chrysops)、人和其他鱼种来源的Hepc cDNA和蛋白质同源性分析表明,从花鲈肝中分离的Hepc2 cDNA属于Hepc基因家族的新成员。  相似文献   
8.
成功克隆了A型肉毒毒素重链C片段部分基因.以肉毒梭菌(62A)基因组DNA为模板,以此基因特异性引物为介导,采用Touchdown PCR方法,从肉毒梭菌基因组中扩增出目的基因片段后,将其克隆入T载体,进行酶切鉴定和序列分析.结果表明,此基因片段与(Genbank中的BoNTa基因(收录号:M30196)核苷酸序列的同源性为100%,说明目的基因得到了成功地克隆,为后续研究奠定了基础.  相似文献   
9.
国家疾病控制系统涵盖2个主要组成部分——疾病预防控制中心(医学CDC)和动物疾病预防控制中心(动物CDC),但国家公共卫生系统历来重视医学CDC,忽视动物CDC。就我国COVID-19暴发及历次人兽共患病重大疫情而言,医学CDC得到了极大关注,处于"人与动物交界面"和疫病源头控制最前沿的动物CDC仍然没有得到应有重视,未来可能仍有人兽共患病源头"四处漏风"的潜在可能性,国家公共卫生系统必须不断完善、统筹兼顾,重视兽医在公共卫生体系中不可替代的关键作用。  相似文献   
10.
试验旨在通过大肠杆菌表达系统表达鼠源重组CD40L蛋白,探讨其对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)人工完全抗原在免疫BALB/c小鼠过程中的免疫增强作用。用Trizol试剂提取BALB/c小鼠脾脏总RNA并反转录成cDNA,根据CD40L CDS区设计引物,PCR扩增目的基因,构建pGEX4T-1重组载体,进行原核表达,并纯化重组CD40L蛋白;根据曼尼希反应原理,用甲醛法制备TTX免疫原TTX-BSA和检测原TTX-OVA;以人工重组蛋白CD40L佐剂组为试验组,弗氏佐剂组作为对照组,免疫BALB/c小鼠,用ELISA方法结合SPSS 19.0软件分析各组免疫效果,探讨重组CD40L蛋白在TTX-BSA免疫过程中对免疫效果的影响。结果显示,本试验成功扩增了783 bp的CD40L目的基因,原核表达并纯化了融合GST标签的55 ku鼠源CD40L重组蛋白;与人工制备的TTX-BSA协同免疫小鼠试验结果显示,在免疫初期与弗氏佐剂相比,CD40L具有极显著的免疫增强效果(P<0.01)。综上所述,重组蛋白CD40L与TTX-BSA完全抗原协同免疫小鼠,在免疫初期CD40L具有增强机体对半抗原的应答强度的作用,为进一步开发适于小分子半抗原抗体高效制备的免疫增强佐剂奠定基础。  相似文献   
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