益生菌对柔嫩艾美耳球虫感染鸡保护效果研究

接种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊和益生菌,以血便记分、存活率、体增重和抗球虫指数为指标,探讨益生菌的抗球虫活性。在接种第7天后检测结果显示,益生菌抗球虫指数为137,能降低球虫感染鸡的血便记分,减轻鸡盲肠组织病理学结构的损伤,提高球虫感染鸡体增重和存活率,提示益生菌可以辅助应用于临床球虫病的防治。     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

白头翁不同提取物及复方抗鸡柔嫩艾美耳球虫研究

以存活率、相对增重率、盲肠病变记分、卵囊值和抗球虫指数为判定指标,考察白头翁不同提取物及复方对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊致病性的影响(体外试验)和抗鸡柔嫩艾美耳球虫感染效果(体内试验)。体内、体外试验结果均表明,白头翁不同提取物及复方均能提高相对增重率,降低盲肠病变计分和卵囊值。抗球虫指数(ACI)检测表明,白头翁不同提取物及复方对球虫孢子化卵囊有微弱的抑杀效果,对鸡柔嫩艾美耳球虫感染预防效果较差,不宜作为鸡柔嫩艾美耳球虫病的预防和治疗药物。     

球抗预防鸡柔嫩艾美耳球虫病效果的观察

采用接种孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊的方法,复制鸡球虫病,观察并计算球抗对柔嫩艾美耳球虫病鸡的存活率、相对增重率、血便记分、盲肠病变记分和卵囊值的影响,并求出球抗的抗球虫指数.结果发现球抗能提高球虫病鸡的存活率和相对增重率,减少血便记分和盲肠内容物卵囊数,减轻盲肠病变.表明球抗对鸡柔嫩艾美耳球虫病有一定的预防作用.     

鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2~7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2~7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%~42.9%提高到73.2%~90.5%,病变计分减少率达50%~74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%~60.2%,表明以一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好。     

柔嫩艾美耳球虫Serpin基因的原核表达及其免疫保护效果研究

为评价Serpin基因重组表达产物对预防鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)感染的效果,克隆和表达E.tenella Serpin基因,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原.设计了重组蛋白肌肉注射组、重组蛋白口服组、重组蛋白滴鼻组3个试验组以及红、白对照组.分别于7、14和28日龄对雏鸡进行3次免疫,35日龄时用3×104个E.tenella孢子化卵囊攻虫,第7天末宰杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率、ACI等指标进行统计分析.结果表明,各免疫组的平均增重与红对照组相比均有显著增加(P＜0.05),其中以重组蛋白肌肉注射组增重最多,相对增重率为66.73％,优于其他免疫组;各免疫组卵囊产量较红对照组均有显著的下降,其中重组蛋白肌肉注射组卵囊减少率最高,为30.01％;各免疫组ACI均明显高于红对照组,其中以重组蛋白口服组最高,但仍低于160,暗示Serpin蛋白并不是一个理想的球虫疫苗保护性抗原.     

柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对几种抗球虫药的敏感性

为了探讨鸡柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对常用抗球虫药的敏感性,采用尼卡巴嗪、氯苯胍、球痢灵、地克珠利和常山酮5种抗球虫药,对由晋球1号球虫疫苗虫株复制的病鸡进行防治试验,通过相对卵囊产量(ROP)、相对增重率、抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)和最适抗球虫活性百分率(POAA)5项指标进行综合评定.结果表明,柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对盐酸氯苯胍无抗药性,对地克珠利有轻度抗药性,对常山酮、球痢灵、尼卡巴嗪有部分抗药性,它们的抗球虫指数为187.46～246.75,达到了抗球虫效果.     

鸡巨型艾美耳球虫早熟株免疫效果试验

为确定使雏鸡获得良好免疫效果的最小巨型艾美耳球虫(E.maxima)早熟株接种量,分别于4日龄对免疫攻毒组以不同剂量进行首免,11日龄以首免2倍剂量对二次免疫攻毒组鸡进行二免。一次或二次免疫后7 d或10 d用同源亲本株进行攻毒,检测免疫攻毒鸡相对增重率、卵囊减少率、病变记分减少率(RLS)和抗球虫指数(ACI)。结果显示,一次免疫剂量≥400个孢子化卵囊/只或两次免疫的一免剂量和二免剂量≥100个孢子化卵囊/只和200个孢子化卵囊/只时,各免疫攻毒鸡的相对增重率≥85%,RLS≥70%,卵囊减少率≥75%,相对保护率≥90%,ACI≥170,均达到良好免疫效果。故将E.maxima早熟株的一次免疫最小免疫剂量定为400个孢子化卵囊/只,两次免疫最小免疫剂量定为一免100个孢子化卵囊/只和二免200个孢子化卵囊/只。     

柔嫩艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为了确定柔嫩艾美耳球虫（Eimenatenella）早熟株合适的免疫剂量,本文设立7个早熟株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1000和2000个／羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以8×10^4个／羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以存活率、增重、肠道病变记分、血便数量、卵囊减少率为观测指标。对免疫保护效果较好的3个免疫剂量进行重复试验,同时设置商品化球虫疫苗对照组,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验。结果显示：攻虫后,不免疫攻虫组出现5％死亡,而各免疫组来出现死亡;各免疫组卵囊减少率在61．57％～69．52％;200～2000免疫组的增重与不免疫不攻虫组差异不具备显著统计学意义（P〉0．05）;600～2000免疫组的肠道病变记分和血便数量均明显少于不免疫攻虫组（P〈0．05）。用600、800和1000进行重复试验,三个免疫组攻虫期间均来出现死亡,而不免疫组和疫苗对照组均出现5％死亡;三个免疫组的增重均明显高于不免疫攻虫组和疫苗对照组（P〈0．05）;早熟株免疫组的肠道病变记分和血便数量明显低于不免疫攻虫组（P〈0．05）,而疫苗对照组与不免疫攻虫组的相当（P〉0．05）;卵囊减少率在66.30％-78．75％,高于疫苗对照组的51．82％。结果表明,该柔嫩艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中600、800和1000个／羽的免疫效果均优于疫苗对照组,可考虑以600个／羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。     

巨型艾美耳球虫免疫对其它几种球虫的血清学反应和临诊抗感染交叉保护力的研究

为探讨鸡艾美耳球虫种间交叉免疫这一尚有争议的问题,本文用ELISA方法检测了巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）免疫血清与其它主要虫种（柔嫩艾美耳E．tenella、毒害艾美耳E．necatrix及堆型艾美耳球虫E．acervulina）抗原的血清学反应,同时观察了E．maxima免疫（1×104个卵囊/只）鸡遭受上述虫种大剂量（1×105个卵囊／只）强毒攻击后的死亡率和肠道病变,对临诊交叉保护力进行了评估。结果表明,E．maxima免疫血清与E．tenellaE．acervulina可溶性抗原有不同程度的交叉反应;E．maxima免疫后用E．tenella,E.acervulina,E.necatrix大剂量强毒攻击,分别有70％、40％、6％的鸡获得了完全保护;25％、60％、27％的鸡获得了部分保护。     

紫云英嫩梢矿质元素成分及作为菜用营养价值的分析

为探明不同紫云英(Astragalus sinicus L.)品种嫩梢矿质元素含量的差异,分析其菜用营养价值,本研究测定了10个不同紫云英品种的分枝期地上部嫩梢的8种矿质元素含量,同时,结合主成分分析法与系统聚类法筛选了适宜菜用的品种。结果表明紫云英嫩梢中矿质元素含量由高到低为钙(Ca)>磷(P)>镁(Mg)>铁(Fe)>锰(Mn)>锌(Zn)>铜(Cu)>硒(Se);矿质元素含量综合得分排名前3的品种分别为‘湘紫1号’、‘闽紫7号’和‘弋江籽’;将10个紫云英品种聚为四类(A,B,C,D),其中A,B,C类分别以高Ca, Fe及Cu含量为特征,D类为‘湘紫1号’,其矿质元素含量均较高,综合评价最高。因此,紫云英种质间嫩梢矿质元素含量均有不同程度的差异,‘湘紫1号’嫩梢矿质元素含量高,作为菜用综合品质高。     

Epidemiological and genetical studies in Norwegian pig herds. III. Herd effects

Herd differences in disease incidence in 70 Norwegian pig herds were assessed by health card registrations. Such differences proved to be considerable. The incidence of the MMA-syndrome, mastitis, metritis and neonatal diarrhoea was higher in herds producing only weaners ("weaner herds") than in herds with combined production. The mean disease incidence in herds providing breeding stock for the Norwegian Pig Breeders' Association ("breeding herds") was at the same level as in ordinary combined production herds. There was no consistent relationship between changes in disease incidence and herd size, though the incidence of the MMA-syndrome was lower in the largest herds.     

Coxiella burnetii associated reproductive disorders in domestic animals-a critical review

The bacterium Coxiella burnetii has been detected in the fetal membranes, birth fluids and vaginal mucus, as well as in the milk and other excretions of several domestic mammals. The finding of C. burnetii in association with abortion, parturition and in the postpartum period has led to the hypothesis that C. burnetii causes a range of reproductive diseases. This review critically evaluates the scientific basis for this hypothesis in domestic mammals.The review demonstrates a solid evidence for the association between C. burnetii infection and sporadic cases of abortion, premature delivery, stillbirth and weak offspring in cattle, sheep and goats. C. burnetii induced in-herd epidemics of this complete expression of reproductive failure have been reported for sheep and goats, but not for cattle. The single entities occur only as part of the complex and not as single events such as generally increased stillbirth rate. Studies show that C. burnetii initially infects the placenta and that subsequent spread to the fetus may occur either haematogenous or by the amniotic-oral route. The consequences for the equine, porcine, canine and feline conceptus remains to the elucidated but that infection of the conceptus may occur is documented for most species. There is no solid evidence to support a hypothesis of C. burnetii causing disorders such as subfertility, endometritis/metritis, or retained fetal membranes in any kind of domestic animal species.There is a strong need to validate non-pathology based methods such as polymerase chain reaction for their use in diagnostic and research in relation to establishing C. burnetii as the cause of abortion and to adapt an appropriate study design and include adequate control animals when linking epidemiological findings to C. burnetii or when evaluating effects of vaccination in production herds.     

不同密度甘肃马先蒿寄生和内生真菌互作对紫花针茅内源激素及生物碱含量的影响

根寄生植物是禾草生长过程中的一种生物逆境,禾草内生真菌能增强其对生物或非生物逆境的耐受能力;然而,有关禾草内生真菌对不同密度根寄生逆境下禾草生长、内源激素水平和生物碱含量变化的研究鲜有报道。基于此,通过开展温室盆栽试验,以建立根寄生关系的带菌(E+)和未带菌(E-)紫花针茅及根寄生植物-甘肃马先蒿为研究对象,比较E+和E-紫花针茅在不同甘肃马先蒿寄生强度下生长、内源激素和生物碱含量变化。结果表明,与未寄生紫花针茅相比,随着甘肃马先蒿密度增加,紫花针茅生物量降低80%,株高、分蘖数和根长均降低25%,吲哚乙酸、脱落酸含量分别增加43%和51%,细胞分裂素含量降低50%。内生真菌侵染显著提高紫花针茅生长特性,增加内源激素和生物碱含量;带菌紫花针茅在根寄生逆境下生物碱含量持续增加,同时甘肃马先蒿利用根部木质部通道可获取寄主内生真菌合成的生物碱。由此可见,内生真菌通过调控紫花针茅体内有关生长和逆境预警相关内源激素水平及改变生物碱含量的方式增强紫花针茅对甘肃马先蒿根寄生逆境的耐受能力,为利用禾草内生真菌共生体修复甘肃马先蒿型退化草地提供新视角。     

细胞因子IL-17作为牛结核病诊断标志物的研究及实时荧光定量PCR检测方法的建立

试验旨在评价细胞因子IL-6和IL-17 mRNA转录水平与牛分枝杆菌感染之间的关系,及其在牛结核病诊断中的应用潜力。通过皮内变态反应试验和IFN-γ释放试验临床筛选结核病阳性牛和结核病阴性牛,采集试验动物抗凝全血,分离、收集外周血淋巴细胞,分别用牛结核菌素（PPD-B）、禽结核菌素（PPD-A）、重组蛋白CFP-10-ESAT-6（CE）、pET-32a载体标签蛋白（PET）或PBS 37℃培养6 h,用实时荧光定量PCR检测细胞因子IL-6、IL-17和IFN-γ的mRNA相对转录水平。结果显示,PET和空白对照PBS类似,不能刺激细胞因子mRNA转录水平的提高,表明CE中包含的PET对试验的影响可忽略不计;牛外周血淋巴细胞经PPD-B、PPD-A或CE刺激后,结核病阳性牛样品中IL-17和IFN-γ的mRNA转录水平均显著高于结核病阴性牛（P<0.05）,其中PPD-B刺激效果强于CE和PPD-A,而CE刺激的特异性更好;选取CE作为最佳刺激源,结果显示,IL-17和IFN-γ的mRNA转录水平之间相关性良好（spearman r=0.79）,并初步建立了基于IL-17和IFN-γ转录水平的实时荧光定量PCR检测方法;以此方法对14头结核病阳性牛进行临床检验,IL-17实时荧光定量PCR法的阳性样本检出率为85.7%,高于IFN-γ（71.4%）。本研究结果初步表明,牛分枝杆菌特异性抗原（PPD-B、CE）诱导的IL-17 mRNA转录水平与牛结核病相关,以CE为刺激源建立的IL-17实时荧光定量PCR检测方法具有用于牛结核病诊断的潜力。     

氟苯尼考-羟丙基-β-环糊精包合物的研制

为了提高氟苯尼考在水中的溶解度,探讨氟苯尼考包合物批量生产工艺,采用胶体磨和喷雾干燥技术制备氟苯尼考-羟丙基-β-环糊精包合物,并用正交试验法优化工艺参数,以包合率和得率为判断指标,得到包合物的最佳条件为氟苯尼考与羟丙基-β-环糊精摩尔投料比是1∶1,包合时间为1 h,氟苯尼考在整个溶液体系中的药物浓度为6 mg/mL。所得包合物经红外光谱法、差示扫描量热分析法进行分析鉴定,表明氟苯尼考与羟丙基-β-环糊精形成了包合物,其包合率可达到83.74%,得率达98.48%,氟苯尼考溶解度由原来的1.25 mg/mL提高到了40.76 mg/mL。表明该工艺能够用于氟苯尼考-羟丙基-β-环糊精包合物的批量制备。     

Surveys on Coxiella burnetii infections in Swedish cattle,sheep, goats and moose

Background

Q fever is a zoonotic disease caused by the bacterium Coxiella burnetii. Prevalence data in ruminant species are important to support risk assessments regarding public and animal health. The aim was to investigate the presence of or exposure to C. burnetii in cattle, sheep, goats and moose, and to compare two enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). National surveys of antibodies against C. burnetii were performed for dairy cattle (n=1537), dairy goats (n=58) and sheep (n=518). Bovine samples consisted of bulk milk, caprine of pooled milk, and ovine of pooled serum. Antibodies were investigated in moose samples (n=99) from three regions. A one-year regional cattle bulk milk survey was performed on the Isle of Gotland (n=119, four occasions). Cattle, sheep and goat samples were analysed with indirect ELISA and moose samples with complement fixation test. For the sheep, goat, and parts of the cattle survey, samples were run in parallel by ELISAs based on antigens from infected ruminants and ticks. Bulk milk samples from the regional cattle survey and vaginal swabs from a subset of the sheep herds (n=80) were analysed for the agent by polymerase chain reaction. Spatial clustering was investigated in the national cattle survey.

Results

The prevalence of antibodies in dairy herds was 8.2% with large regional differences. High risk clusters were identified in the southern regions. The prevalence among dairy herds on the Isle of Gotland varied from 55.9% to 64.6% and 46.4% to 58.9.0% for antibodies and agent, respectively, overall agreement between agent and antibodies was 85.2%. The prevalence of antibodies in sheep was 0.6%, the agent was not detected the vaginal swabs. Antibodies were not detected in goats or moose, although parts of the moose samples were collected in an area with high prevalence in cattle. The overall agreement between the two ELISAs was 90.4%.

Conclusions

The prevalence of antibodies against C. burnetii in dairy cattle in Sweden shows large regional differences. The results suggest that C. burnetii is a rare pathogen among Swedish moose, dairy goat and sheep. ELISAs based on ruminant and tick antigen performed in a similar manner under Swedish conditions.     

高寒草甸优势禾草-异针茅内生真菌的分离与鉴定

异针茅作为青藏高原地区重要的乡土草种之一,是高寒草甸草原主要的建群禾草种类。迄今为止,有关异针茅所感染内生真菌的种类和分类地位的研究尚未见报道。基于此,以青海高原地区两个地理种群的异针茅为研究对象,采用常规分离培养形态观测和管家基因扩增目的片段基因并与已公布的内生真菌序列构建系统发育树的方法,确定异针茅感染内生真菌的种类和分类地位。结果表明:异针茅分离出的内生真菌菌落形态、生长速度和分生孢子形态等均与Epichloё属内生真菌的形态特征相似。编码蛋白tub和肌动蛋白actin序列构建的系统发育树表明,异针茅感染的内生真菌种类分别为Epichloёgansuensis和Epichloёsylvatica,而转录延长因子tef序列构建的系统发育树发现异针茅感染的内生真菌种类分别为Epichloёinebrians和E.sylvatica。由此可见,异针茅感染的内生真菌分别为甘肃内生真菌E.gansuensis、醉马草内生真菌E.inebrians和欧洲短柄草内生真菌E.sylvatica;进一步揭示异针茅感染的内生真菌表现出多样性,异针茅与其感染的内生真菌间未形成严格的宿主特异性。     

硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制鸡的颉颃作用

为探究硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制的颉颃作用,将336只11日龄非免疫健康罗曼雏鸡随机均分为7组：空白对照组（BC）、免疫对照组（VC）、环磷酰胺对照组（Cy）、sGPS3、sGPS5、sGPS6和药物对照组（APS）,每组6个重复,每个重复8只鸡。BC组和VC组注射0.5 mL生理盐水,其余组均肌肉注射8 mg/mL环磷酰胺0.5 mL,每天1次,连续3 d;14日龄时,除BC组外,其余组均用新城疫疫苗免疫,同时3个硒大蒜化多糖组分别注射0.5 mL浓度为1 mg/mL的sGPS₃、sGPS₅、sGPS₆,APS组肌肉注射黄芪多糖注射液0.5 mL,Cy组、VC组和BC组注射生理盐水0.5 mL,每天1次,连续3 d,28日龄二免。分别于首免后的第7、14、21、28天,每组随机抽取6只罗曼鸡翼静脉采血,分离血清,β-微量法检测血清ND-HI抗体效价、ELISA法检测血清γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素2（IL-2）含量。称量体重后采集胸腺、脾脏和法氏囊组织并称重,计算免疫器官指数。结果显示,各给药组的血清ND-HI抗体效价、血清IFN-γ和IL-2含量、法氏囊指数均显著高于Cy组（P<0.05）;sGPS₆组血清抗体效价、IFN-γ含量在28 d,血清IL-2含量在21、28 d均显著高于其余各组（P<0.05）;在免疫后21、28 d,4个给药组中sGPS₆组体重、法氏囊指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）;在免疫后28 d,4个给药组中sGPS₆组胸腺指数、脾脏指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）。结果表明,硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致的免疫抑制具有颉颃作用,其中sGPS₆组的活性最高,可作为新型免疫抑制颉颃剂的候选药。     

羊痘病毒的研究进展

从羊痘的流行特点、羊痘病毒基因组结构特征、热点蛋白研究、羊痘的诊断和检测、疫苗研究五个方面进行了较为详细的综述,以期为羊痘病毒的研究及预防控制羊痘提供参考。