柔嫩艾美耳球虫大配子发育和卵囊的超微结构

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫大配子发育和卵囊的超微结构进行了观察。结果表明，大配子体和小配子体寄生于相邻的宿主细胞内，相伴产生。大配子体的发育、大配子的形成、受精及卵囊形成均于带虫空泡内完成。大配子体系由末代裂殖子侵入肠上皮细胞后，缩短、长大、变圆而形成，大配子体和大配子外被单位膜，细胞核位于大配子体中央，早期大配子体的细胞核有1个明显的核仁，细胞质内逐渐形成大量成囊体1、成囊体2、大量支链淀粉和脂肪体，成囊体1比成囊体2形成的早。卵囊壁有5'层，内有大量支链淀粉和指肪体。含有大配子体、大配子和合子的带虫空泡内有丰富的泡内小管，它们是大配子体、大配子和合子获得营养物质和排出代谢废物的途径。     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2~7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2~7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%~42.9%提高到73.2%~90.5%,病变计分减少率达50%~74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%~60.2%,表明以一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好。     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

柔嫩艾美耳球虫研究概况

本文简要介绍柔嫩艾美耳球虫生活史、生物学特性、卵囊形状、以及卵囊产量的影响因素，对柔嫩艾美耳球虫日龄与粪便卵囊产量进行科学的分析，旨在为疾病的治疗和预防提供依据。     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

应用柔嫩艾美耳球虫苗预防鸡球虫病的试验

鸡球虫病是雏鸡肠道感染、由一种或多种球虫引起的急性流行性原虫病，是危害养鸡生产的主要疾病之一。长期以来，鸡球虫病的控制方法是采用药物防治，但在生产实践中，抗球虫药无一不遇到产生耐药性问题。近几年来．我市养鸡生产普遍采用连续应用多种抗球虫药的方法，解决了耐药性l司题，获得较好的保护效果。但是．药费开支较多，投药麻烦费工，尚有15％的发病率，0.49％的几亡率和生长受阻等生产损失。为提高养鸡生产的经济效益，在1995年10月至1996年底，我们采用球虫苗预防鸡球虫病，从试验观察到推广应用，均收到今人满意的效果，为防…     

柔嫩艾美耳球虫的抗原分析

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳，免疫印渍技术，用抗柔嫩艾美耳球虫抗体分析了第二代型殖子、子孢子和未孢子化卵囊的蛋白质。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳银染表明第二代裂殖子主要蛋白质为：１７．６ＫＤ，２９．９ＫＤ，３８．９ＫＤ和５３．７ＫＤ，但用抗Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ抗体免疫印渍法检测出的主要抗原为：７８．０ＫＤ，８３．２ＫＤ和９５．５ＫＤ，这说明并不是含量高的蛋白质就是产生抗体的抗原；子孢子蛋白质含     

NO在雏鸡球虫感染过程中的作用

研究以腹腔注射途径给予试验雏鸡cNOS抑制剂L－NAME、L－NA以及iNOS抑制剂L－AG，通过测定血浆NO2^-水平、肠道粘膜NOS活性、雏鸡日增重以及肠道病变计分、肠道组织切片中球虫数量、O.P.G值、异常粪便百分率等指标，研究了NO在雏鸡感染E.tenella或E.acervulina过程中的作用。试验结果表明，在雏鸡感染E.tenella或E.acervulina后，每日连续给予L－AG或L－NAME，不但加重了雏鸡的肠道组织显微病变，而且使肠道组织切片中的球虫数量增多。此外L－AG或L－NAME处理还使感染雏鸡的O.P.G值和肠道病变记分等指标出现不同程度的升高，但与感染对照组的相比未见显著性影响。另外，无论是NO2^-测定结果，还是NOS活性测定结果均表明，3种NOS抑制剂对感染E.acervulina雏鸡体内NO的生成均有较好的抑制作用，其中以L－AG的抑制作用最为理想，L－AG处理组雏鸡血浆NO2^-水平或肠道粘膜NOS活性值均与给予的L－AG剂量之间呈现较好的剂量依赖性递减关系。结果提示，在雏鸡感染球虫过程中，体内大量生成的NO对球虫具有一定的毒性作用。NO可能是在雏鸡E.tenella和E.acervulina感染过程中发挥作用的一种效应分子。     

柔嫩艾美耳球虫TA4重组抗原的免疫试验

构建了能表达柔嫩艾美耳球虫TA4抗原的重组质粒,使其在乳球菌中表达。用刚出壳的健康雏鸡为实验对象,对乳球菌表达的TA4重组抗原进行免疫效果的研究。用表达球虫TA4抗原的工程乳球菌以5×108个/(只·d)的剂量给雏鸡口服10d,同时设置乳球菌组、未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,于11日龄用5×104个强毒卵囊进行攻毒。结果表明TA4重组抗原组抗球虫指数为160.12,实验鸡可获得一定免疫保护力。     

柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)BJ株SO7重组抗原的免疫试验

将柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）ＢＪ株Ｓ０７基因插入ｐＴｈｉｏＨｉｓＢ载体中,构建了１个表达载体,命名为ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７。将此表达载体转入大肠杆菌ＤＨ５ａ,经ＴＰＴＧ诱导表达后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物。结果表明,含ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７质粒原工程菌具有明显的表达产物,表达效率为１７．１％。用超声波粉碎仪裂解含重组抗原的工程菌,加入钾加矾作佐剂,用２个剂量（１０、１０     

柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建

在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用Phage Maker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella3-1E基因,并进行测序。结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×106pfu/mL,插入片段约100~3000 bp,扩增得到特定的E. tenella3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。     

球安等药物抗Eimeria tenella的效力

将１日龄罗曼公雏于无球虫条件下饲养至１３日龄时随机分组,按组分别投予球安９Ａｖａｔｅｃ,含２５％Ｌａｓａｌｏｃｉｄ）１２５ｍｇ／ｋｇ。球佳（含２％Ｄｉｌａｚｕｒｉｌ）１ｍｇ／ｋｇ,加福（Ｃｙｇｒｏ,含１％Ｍａｄｕｒａｍｙｃｉｎ）５ｍｇ／ｋｇ和球净（Ｎｅｃｏｘｉｎ,含２５％ Ｎ ｉｃａｂａｚｉｎｅ和１．６５ Ｅｔｈｏｐａｂａｔａ）１２５ｍｇ／ｋｇ,并设立不给药不感染,不给药感染对照组。     

堆型艾美尔球虫的分离与病理学研究

采用单卵囊感染技术,从鸡球虫混合种中分离出一株堆型艾美尔球虫(Eimeria acenrulina).并对该株堆型艾美尔球虫的病理学做了进一步研究.利用堆型艾关尔球虫的寄生部位、肉眼病变、最小潜在期等生物学特性进行鉴定,并做回归试验,用此球虫卵囊1×105个感染雏鸡.取感染5d后有明显病理变化的十二指肠组织,采用石蜡切片技术,进行病理学观察.结果表明,虫体寄生于肠绒毛上皮细胞内,大量的肠绒毛遭到破坏、断裂和脱落.     

青蒿素与柳氮磺吡啶对柔嫩艾美尔球虫感染的疗效观察

为了探讨青蒿素（artemisinin,ART）和柳氮磺吡啶（sulfasalazine,SASP）单独给药与联合给药对鸡球虫病的防治效果。试验选用50只1日龄黄羽肉鸡,正常饲养至1周龄时分为5组,2周龄时除空白组外,ART组、SASP组、ART＋SASP组和感染对照组分别以105个/羽的剂量接种柔嫩艾美尔球虫（Eimeria tenella,E.tenella）孢子化卵囊,各给药组于攻虫前3d开始给药至试验结束。试验结束后对各组的抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）、卵囊的孢子化率、血清NO含量、脏器指数及血清生化指标等数据进行统计。结果表明,ART、SASP以及两者联合用药均能显著提高鸡群的ACI,并使卵囊的孢子化率降低,缓解了球虫感染所致的NO水平升高,且联合用药效果更明显。这提示ART与SASP联合应用在E.tenella感染的防治中具有增效作用。各组鸡群之间血清生化参数无显著性差异,说明该2种药物均无明显毒副作用。     

常山提取物对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效的观察

为了探讨常山提取物对鸡球虫病的治疗效果,通过人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫后在饲料中添加一定比例的药物,试验设常山提取物组(分别为200、100、50 mg/kg饲料)、鸡球虫散组(300 mg/kg饲料)、地克珠利组(1 mg/kg饲料)、感染对照组和健康对照组.结果显示,与感染对照组比较,所有给药组试验鸡盲肠和十二指肠肿胀明显减轻,血液性内容物明显减少,抗球虫指数分别为171.98、169.18、169.01、163.84和166.74,均达到中等抗球虫水平.结果表明,常山提取物具有良好的抗球虫效果,且作为一类中药组分,具有绿色环保、低毒低残留的特点,有望成为新型抗球虫药物.     

白头翁不同提取物及复方抗鸡柔嫩艾美耳球虫研究

以存活率、相对增重率、盲肠病变记分、卵囊值和抗球虫指数为判定指标,考察白头翁不同提取物及复方对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊致病性的影响(体外试验)和抗鸡柔嫩艾美耳球虫感染效果(体内试验)。体内、体外试验结果均表明,白头翁不同提取物及复方均能提高相对增重率,降低盲肠病变计分和卵囊值。抗球虫指数(ACI)检测表明,白头翁不同提取物及复方对球虫孢子化卵囊有微弱的抑杀效果,对鸡柔嫩艾美耳球虫感染预防效果较差,不宜作为鸡柔嫩艾美耳球虫病的预防和治疗药物。