清营口服液质量检测方法的研究

为了建立清营口服液的质量检测方法,对制剂处方药味金银花、连翘、黄连、丹参、玄参、麦冬进行了薄层色谱(TLC)鉴别研究,并利用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中绿原酸的含量进行了测定确定了HPLC的测定条件。结果表明,TLC鉴别方法专属性强、斑点清晰、阴性对照无干扰;在8~160 μg/mL范围内绿原酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.86%,RSD为1.2%。以上结果表明,本研究所建立的检测方法简便、准确、专属性强、重复性好,可对清营口服液的质量进行有效检测。     

白虎定喘口服液的质量检测

为了建立白虎定喘口服液的质量检测标准,采用薄层色谱法(TLC)对处方中金银花、黄芩、知母、板蓝根进行鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)对黄芩中有效成分黄芩苷进行含量测定。结果表明,薄层色谱斑点清晰,分离度好,特异性强;在0.103mg/mL~0.824mg/mL范围内黄芩苷浓度与峰面积呈良好的线性关系,阴性对照无干扰,加样回收率平均为97.98%,精密度试验RSD为0.61%。说明建立的检测方法简便、准确、专属性强、重复性好,可对白虎定喘口服液的质量进行有效检测。     

2013年第40卷第5期中药复方浸膏质量标准初步研究

本试验旨在建立抗病毒中药复方浸膏的质量标准,为剂型改革和工业化生产提供科学依据,利用薄层色谱法、高效液相色谱法对浸膏进行定性和定量检测。结果显示,薄层色谱试验能检出浸膏中的绿原酸,高效液相色谱试验能检测出浸膏中的甘草酸和绿原酸。所建立的色谱方法可准确地对该复方浸膏进行定性及初步定量检测,为后续研究奠定了基础。     

双黄连口服液质量分析

考察市售不同厂家生产的双黄连口服液的质量控制。依据2015版《中国兽药典》二部双黄连口服液质量标准~([1]),采用薄层色谱法和高效液相色谱法,分析双黄连口服液中的黄芩苷、绿原酸和连翘苷的色谱特征和含量。结果表明,测定18批双黄连口服液的合格率为33.33%:而定性检测合格的比例为66.67%;黄芩苷含量范围为0.17%～439.61%,黄芩苷含量合格率为61.11%;绿原酸含量范围为0.02%～231.48%,绿原酸含量合格率为33.33%;连翘苷含量范围为0.46%～341.87%,连翘苷含量合格率为38.89%。源于18个厂家的双黄连口服液的合格率仅为33.33%,且双黄连口服液中主要成分含量相差较大,因此,应从中药材的源头控制及制剂生产环节全过程进行产品质量控制,确保产品质量稳定可控。     

寒痢宁口服液的薄层鉴别

为了建立寒痢宁口服液的质量控制标准,采用薄层色谱法对寒痢宁口服液中的黄连、厚朴、陈皮、补骨脂进行定性鉴定。试验结果表明,黄连、厚朴、陈皮和补骨脂的特征成分在与对照品和对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。该方法专属性强,稳定性和重现性好,为寒痢宁口服液的质量控制建立了定性鉴定方法。     

鸡血浆中黄芩苷及绿原酸的HPLC法建立

建立了测定鸡血浆中复方慢呼抗口服液主要成分黄芩苷和绿原酸的高效液相色谱法.流动相为乙腈、1％冰醋酸,梯度洗脱30 min,黄芩苷和绿原酸的波长分别为280、327 nm,流速1 mL/min.分别采用高氯酸法、甲醇乙腈法、正丁醇法处理血浆,选取最优方法进行考察.甲醇乙腈法处理血浆,方法专属性好,回收率较高,线性关系良好,精密度及准确度较高,可用于药代动力学研究.     

基于转录组学技术分析绿原酸对鸡源大肠杆菌抑菌及耐药消除的作用机制

为探究绿原酸对鸡源抗生素耐药大肠杆菌抑菌及耐药消除的作用机制，以影印法分离绿原酸浓度为1.25 mg/mL（亚抑菌浓度，1/2 MIC）的LB肉汤培养的第3代禽源大肠杆菌耐药逆转菌株，以微板法测定耐药逆转菌株的左氧氟沙星最小抑菌浓度（MIC），并进一步通过转录组测序方法分析绿原酸消除大肠杆菌耐药性的分子机制。结果显示：耐药逆转菌株对左氧氟沙星的MIC由16 μg/mL降低至4~8 μg/mL，说明1.25 mg/mL的绿原酸可在一定程度上消除耐药大肠杆菌的左氧氟沙星耐药性。为进一步解析绿原酸对鸡源大肠杆菌耐药消除作用的分子机制，通过转录组测序方法对耐药性消除前后鸡源大肠杆菌基因表达水平进行对比分析发现：绿原酸作用后共有12个基因的表达量发生显著下调，通过荧光定量PCR验证结果基本一致。经过GO功能富集分析和KEGG代谢通路富集分析发现，差异表达基因在功能上集中于膜组成成分和DNA重组，在代谢通路富集中差异基因均与代谢相关，差异基因中bhsA、cysP为Coli-HB染色质转录RNA（GenBank登录号：CP020933），oqxA、oqxR、emaA、pinR、xerD、folA、repA、repC、adhP、IS26为Coli-HB质粒1转录RNA（GenBank登录号：CP020934）。从差异表达基因的分布可以看出，绿原酸可以抑制细菌DNA重组、使细菌抗逆性减弱、抑制耐药基因活性等，在一定程度上消除大肠杆菌的左氧氟沙星耐药性，起到抑菌及耐药消除作用。     

绿原酸在动物生产中的研究进展

为了更好地了解绿原酸在动物生产上的应用，笔者查阅并总结了国内外近几年动物生产上绿原酸相关文献，旨在为绿原酸进一步开发用作饲料添加剂或抗生素替代品提供参考。文章主要从绿原酸来源、吸收与代谢及动物生产上的应用效果等方面进行了综述。绿原酸来源广泛，可从杜仲科植物、菊科蒿属植物及忍冬科植物中提取；其吸收代谢主要取决于肠道菌群微生物丰富度；绿原酸通过发挥自身抗炎抑菌、抗氧化及调节脂类代谢等生物功能提高动物生长性能、增强动物免疫力、改善动物肠道屏障功能、提高体外受精率和保护精子质量。总之，绿原酸符合绿色添加剂开发趋势，但其在动物生产中的应用还有待进一步深入研究。     

益母黄丹口服液的制备工艺研究

确定益母黄丹口服液的制备工艺条件并建立质量标准。采用正交试验法,对益母黄丹口服液的提取制备工艺条件进行优化,并采用紫外分光光度法,以盐酸益母草碱为对照品,在277 nm处测定按照不同工艺制备的口服液中盐酸益母草碱含量,再采用薄层色谱法对口服中益母草、黄精进行定性鉴别进行质量控制。结果表明,口服液最佳制备工艺为煎煮时间1.5 h,煎煮3次,醇沉分数50%;紫外分光光度法能测定口服液中益母草碱含量、薄层色谱中益母草、黄精斑点清晰,阴性对照无干扰。本试验制备工艺的方法简单可行,建立的质量标准适用于益母黄丹口服液的质量控制。     

肿节风三清颗粒的薄层色谱鉴别和含量测定

试验旨在建立肿节风三清颗粒的鉴别和含量测定分析方法，以期为制剂的质量标准提供方法学依据。采用薄层色谱法（TLC）对肿节风三清颗粒中的肿节风、射干、甘草进行定性分析；采用高效液相色谱法（HPLC）对制剂中的异嗪皮啶和迷迭香酸进行含量测定。薄层色谱结果表明，肿节风三清颗粒中的肿节风、射干、甘草在与其对应的标准药材或标准品的相同位置有一致的荧光斑点，而阴性样品无特征荧光斑点。HPLC结果表明，异嗪皮啶在3.795~18.975 μg/mL范围内线性关系良好（R²=0.9995），迷迭香酸在6.035~30.175 μg/mL范围内线性关系良好（R²=0.9997）；异嗪皮啶和迷迭香酸的平均回收率分别为99.13%和100.30%，RSD分别为1.98%和0.02%（n=6）。结果表明，建立的定性及定量分析方法可操作性强，结果准确可靠，可用于肿节风三清颗粒中肿节风、射干、甘草的鉴别和指标性成分异嗪皮啶和迷迭香酸的含量测定，为肿节风三清颗粒的质量标准提供了方法学依据。     

高效液相色谱法测定杨树花口服液中水杨苷的含量

建立了高效液相色谱分离测定杨树花口服液中水杨苷含量的方法。采用Waters XBridge C18色谱柱（150mm×4．6mm,5μm）,以甲醇-水（10：90）为流动相,流速为1．0mL／min,检测波长269nm,柱温30℃。水杨苷的线性范围为0．025～0．5mg／mL（r=0．9995）,平均加样回收率（n=6）为100．8％,RSD为1．49％。建立的方法准确、快速,操作简便,可用于杨树花口服液中水杨苷的含量测定。     

甜叶菊绿原酸增强大肠杆菌感染蛋雏鸡免疫力研究

旨在评价甜叶菊绿原酸增强人工腹气囊感染大肠杆菌O₇₈蛋雏鸡免疫力的作用效果,为功能性抗生素替代品研发提供基础参数支持。本试验随机将1日龄、体重无显著差异的健康海兰蛋鸡360只分为6组：空白对照组（C）、大肠杆菌O₇₈处理组（EC0）、1.0 g·L^-1杜仲素+大肠杆菌O₇₈处理组（ED1）、1.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC1）、2.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC2）、4.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC4）,预饲7 d后开始正式试验。第7天时将大肠杆菌O₇₈通过腹气囊感染蛋雏鸡,饮水投喂药物,每天1次,连用3 d。随后通过ELISA法检测血清IL-1β、IL-2、IL-6、IgM、IgA、TNF-α水平;RT-qPCR检测空肠和回肠IL-1β、IL-2、TNF-α、Claudin-1和ZO-1基因表达;高通量测序分析盲肠内容物微生物种类。结果显示：1）腹气囊感染大肠杆菌O₇₈显著增加了蛋雏鸡死亡率（P<0.05）,而甜叶菊绿原酸处理组（EC2、EC4）蛋雏鸡的死亡率显著降低（P<0.05）。2）甜叶菊绿原酸对大肠杆菌O₇₈感染蛋雏鸡血清IgA和IgM含量有提高趋势,可不同程度降低血清炎性因子含量,其中EC1、EC2、EC4组血清TNF-α含量显著降低（P<0.05）;EC2显著降低大肠杆菌O₇₈感染蛋雏鸡回肠促炎细胞因子IL-1β、IL-2、TNF-α的基因表达（P<0.05）。3）甜叶菊绿原酸可促进蛋雏鸡空肠紧密连接蛋白基因表达,改善腹气囊感染大肠杆菌O₇₈对肠道屏障的损伤。4）腹气囊感染大肠杆菌O₇₈导致鸡肠道特有OTUs增加,增加肠道拟杆菌门、变形菌门和梭杆菌门的相对丰度,降低厚壁菌门的相对丰度;而甜叶菊绿原酸处理组（EC2）蛋雏鸡盲肠厚壁菌门的相对丰度升高,拟杆菌门和变形菌门的相对丰度降低。甜叶菊绿原酸可增强腹气囊感染大肠杆菌O₇₈蛋雏鸡机体的免疫功能,抵御大肠杆菌O₇₈对蛋雏鸡的侵袭,其中应用剂量为2.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸的效果较好。这预示绿原酸具有抗生素替代品的功效,其对大肠杆菌感染蛋雏鸡机体免疫力的积极作用可能是通过调控免疫相关基因和维持盲肠微生物菌群稳态达到的,但其作用机制仍需深入的研究。     

甜地丁中槲皮素的薄层鉴别和含量测定

为完善甜地丁质量标准,采用薄层色谱法对甜地丁中槲皮素的鉴别进行了研究,并用高效液相色谱法测定其含量。薄层色谱以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7：5：0．5）为展开剂,高效液相法色谱柱为C18（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-0．3％磷酸溶液（50：50）,检测波长为360nm,流速1mL／min,柱温25℃,进样量10μL。结果表明薄层色谱法能对槲皮素实现有效分离,高效液相色谱法槲皮素进样浓度在5。100μg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=O．9997）;样品平均回收率为96．1％（n=6）,RSD为0．7％。本方法为进一步控制甜地丁的质量提供了依据。     

HPLC法测定徐长卿中绿原酸的含量

建立HPLC法测定徐长卿中绿原酸的含量。采用索氏提取法以70％的甲醇水溶液为提取剂对徐长卿中的绿原酸进行提取。在SHIMADZU C18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相乙腈-0．5％磷酸水溶液（1：9,V/V）;流速1．0mL/min;柱温25℃;检测波长327nm的条件下进行检测。结果表明,绿原酸在0．232—4．640μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0．9997。平均回收率为99．32％,RSD为0．216％（n=5）。该方法简便、可靠、重现性好,可作为徐长卿中绿原酸含量测定的方法。     

Effects of the Oral Liquid of Astragalus and Lucidum Polysaccharides on Immunological Function in Chickens Immuned with ND Vaccine

In order to study the effects of the oral liquid of Astragalus and Lucidum polysaccharides on immunological function in chickens,one hundred and eighty 14-day-old chickens were randomly divided into 9 groups and inoculated with the Newcastle disease vaccine.1 to 3 experimental groups were respectively the oral liquid of Astragalus and Lucidum polysaccharides high,middle and low dose groups;4 to 6 experimental groups were respectively the oral liquid of Astragalus and Lucidum polysaccharides with cyclophosphamide high,middle and low dose groups;7 to 9 experimental groups were respectively cyclophosphamide group,positive control group and saline control group.The proliferation index of spleen lymphocyte and Newcastle disease virus antibody level by HI method were determined on days 7,14,21 and 28 after vaccination.The results showed that the oral liquid of Astragalus and Lucidum polysaccharides could apparently promote lymphocyte proliferation and enhance antibody titer,and alleviate the immunosupperession of the chickens in some degree,the low dose of the oral liquid of Astragalus and Lucidum polysaccharides promoted lymphocyte proliferation best,implying that the oral liquid of Astragalus and Lucidum polysaccharides would be expected as a candidate of new-type immunopotentiator.     

黄芪灵芝口服液对免疫新城疫疫苗雏鸡免疫功能的影响

为研究黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫功能的影响,本试验将180只14日龄雏鸡随机分成9组并通过点眼滴鼻免疫新城疫(ND)疫苗。1~3组分别是黄芪灵芝口服液高、中和低剂量组;4~6组分别是环磷酰胺+黄芪灵芝口服液高、中和低剂量组;7~9组分别为环磷酰胺组、阳性对照组及生理盐水对照组。分别于免疫后的第7、14、21、28天测定脾脏淋巴细胞增殖和抗体滴度的动态变化。结果表明,黄芪灵芝口服液能提高雏鸡脾脏淋巴细胞的增殖能力和促进新城疫病毒(NDV)抗体的产生,能一定程度上缓解环磷酰胺的免疫抑制,其中黄芪灵芝口服液低剂量组对脾脏淋巴细胞增殖效果最好,黄芪灵芝口服液可作为一种新型的免疫增强剂。     

五皮口服液的薄层色谱鉴别研究

建立控制五皮口服液中主要成分的薄层色谱鉴别方法。方法：采用薄层色谱法对桑白皮、陈皮、姜皮进行定性鉴别,更好的进行质量控制。所拟定的TLC色谱条件,斑点分离效果佳,稳定性和重现性良好,专属性强,阴性无干扰,可用于产品的质量控制。结论：该方法定性明确可靠、操作简便、可供本品质量控制。     

豆科牧草水浸提液的酚酸物质含量及化感潜力

酚酸是豆科牧草水浸提液中一类重要的化感物质。试验采用高效液相色谱法(HPLC)测定了紫花苜蓿(Medicago sativa L.cv.Alfaking)、毛苕子(Vicia rillosa Roth.)、黄花草木樨(Melilotus of ficinalis Desr.)、白三叶(Trifolium repens L.cv.Haifa)、红三叶(Trifolium pretense L.)和杂三叶(Trifolium hybridum L.)地上部分水浸提液中对羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、原儿茶酸、丁香酸、香草酸和肉桂酸9种酚酸的含量,并检测了这6种豆科牧草水浸提液处理以及不同浓度的酚酸纯品溶液处理对多花黑麦草(Lolium multiflorum Lam.cv.Tetragold)幼苗根生长的影响。结果表明:豆科牧草水浸提液处理能显著地抑制多花黑麦草幼苗根生长,抑制率达59.6%～97.7%;所测9种酚酸在供试豆科牧草水浸提液中普遍存在;酚酸类物质的化感作用强弱因种类而有显著差异,但均随浓度升高而加强;豆科牧草水浸提液中酚酸类物质的化感潜力存在相互作用。     

GC法测定马香苓口服液中百秋李醇含量研究

试验旨在建立测定马香苓口服液中百秋李醇含量的研究方法。本研究采用气相色谱法,其色谱条件是使用色谱柱HP-5毛细管柱;柱温采用程序升温（初始温度150 ℃,保持18 min,以50 ℃/min速率升至280 ℃,保持5 min）;进样口温度为280 ℃;载气：高纯氮气;流速1 mL/min;进样量1 μL,分流比20：1;检测器为氢火焰离子化检测器,温度为280 ℃;氢气流速40 mL/min,空气流速370 mL/min;分别进行系统适用性试验、专属性试验、线性范围考察、检测限和定量限的确定、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验、耐用性试验,并对10批样品进行了含量测定。结果显示,专属性溶液中的溶剂峰、药液的杂质峰与主成分峰能达到有效分离且分离度符合要求（R ≥ 1.5）,表明该方法系统适用性良好;阴性对照溶液未检出色谱峰,表明样品中其他成分不干扰测定;百秋李醇定量限和检测限分别为2.842和0.812 μg/mL;百秋李醇检测质量浓度在15.86~1 015 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（y=0.869x-10.45,R²=0.999,n=7）。精密度试验、稳定性试验（日内和日间精密度）、重复性试验的平均RSD分别为0.90%、1.63%和1.83%、2.90%,其RSD均在可控范围内（RSD ≤ 3%）;平均加样回收率为95.36%,RSD=2.82%（n=6）,表明所建立的气相色谱法检测百秋李醇的含量回收率良好;进行耐用性试验,最终验证所建立的色谱方法可以稳定检测百秋李醇的含量。经方法学验证,该方法准确稳定,简便可行,能够作为马香苓口服液君药广藿香中百秋李醇的含量控制方法,同时也为该制剂质量控制提供了一种有效的检测方法,暂定本品中广藿香药材按百秋李醇计不少于47.53 μg/mL。