鸡传染性法氏囊病病毒X-28弱毒株的致病性试验

在Vero细胞上适应且连续传17代的传染性法氏囊病病毒X毒株IBDVX,再经鸡胚成纤维细胞CEF连续传代后,得到了适应CEF细胞生长且毒力相对稳定的的弱毒株(IBDVX-28)。IBDVX-28~IBDVX-43代毒均能在72h~96h内产生明显的细胞病变效应(CPE),半数细胞感染量(TCID50)在10-8.47/0.1mL~10-9.26/0.1mL之间,半数鸡胚感染量(EID50)在10-4.71/0.2mL~10-5.80/0.2mL之间。致病性试验表明,各代次毒能引起10日龄鸡胚40%~50%的感染或死亡,对30日龄SPF小鸡基本无致病性,所有试验鸡均未见法氏囊明显的眼观病变,囊指数(b/B)平均为0.35±0.040;IBDVX-28代毒在雏鸡体内回归6代,均未见法氏囊明显的眼观病变,囊指数保持稳定。     

致病性鹅源新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞的致病变特性

选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染细胞形成大量合胞体,到84～144h时,CEF单层彻底破坏;鸡源和鸽源MDV接种CEF后也在24h左右开始有病变产生,最初病变与鹅源毒株导致的病变相似,但病变进展迅速,细胞显著裂解并导致单层的严重破坏,60～84h时细胞单层即彻底破坏。对病毒接种后不同时间段培养物上清血凝(HA)效价的测定结果表明,鹅源NDV接种后84～120h培养物上清HA效价达到高峰,为5～8 log2,鸡源和鸽源NDV接种后60～84h HA效价即可达到高峰,但其最高效价只有4 log2。     

犬瘟热病毒在不同组织细胞上增殖特性的研究

将犬瘟热病毒(CDV)分别接种于长满单层的鸡胚成纤维细胞(CEF)、非洲绿猴肾细胞系(Ve-ro)、犬肾细胞系(MDCK),观察其病变时间、病变特征,并对其进行RT-PCR鉴定和TCID50测定。结果表明,CDV在这3种细胞上均能增殖,并产生明显的细胞病变(CPE),但在Vero细胞上产生病变的时间短,病变明显,且TCID50最高;RT-PCR检测CDV在不同细胞上的病毒培养液,均能扩增出337bp的片段;CDV在Vero细胞上的增殖滴度明显高于在CEF、MDCK细胞上的增殖滴度。表明本试验所选用的3种细胞中,Vero细胞最适宜培养CDV,所获得的CDV的毒价最高,病变最明显。     

传染性法氏囊病疫苗的研究——Ⅰ.传染性法氏囊病病毒2512——弱毒株在鸡胚成纤维细胞培养内的适应

将引自国外的传染性法氏囊病(IBD)—2512鸡胚弱毒成功地适应于鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物。该病毒增殖对生长液要求不苛刻,并能对CEF培养物呈现规律性的稳定的致细胞病变作用(CPE);经反复传代及回归鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)重复性试验,都呈现出IBD病毒规律性变化。经毒价测定、安全实验、效力试验证明,该毒株没有因传代和其他因素而改变其特性,其滴度基本稳定在10~(5.50～5.75)EID50/0.2ml,TCID50/0.1ml为10~(7.83～8.17)。     

新城疫Ⅰ系和Ⅱ系疫苗毒株在鸡胚细胞中增殖规律的研究

新城疫Ⅰ、Ⅱ系疫苗毒株可在鸡胚细胞中生长和引起细胞病变效应(CPE),并可从中获得高滴度的病毒。因此,目前在国内外已有用鸡胚细胞代替鸡胚生产疫苗的方法。但是,关于Ⅰ、Ⅱ系疫苗株病毒在鸡胚细胞内的增殖以及向培养液中释放的规律,至今研究尚少。本试验以荧光抗体技术及红细胞凝集试     

利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究

利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,进而确定 AEV培养的最佳时机。结果表明 :以 AEV在 CEF上培养 7天最好 ,病毒滴度可达 10 2 .8EID50 / 0 .2 ml。将经 CEF培养的 AEV差速离心 (浓缩约 5 0 0倍 ) ,接种 SPF鸡胚 ,可产生典型的鸡胚病变 ,其滴度为 8× 10 5.0 EID50 / 0 .2 m l。通过 Cs Cl密度梯度离心提纯病毒 ,在电镜下观察到了大小基本一致的病毒粒子 ,病毒直径约为 2 5 nm。利用 AEV感染的 CEF或通过“细胞飞片”制备荧光片 ,建立了间接免疫荧光快速检验 CEF是否感染 AEV的方法。     

减蛋综合征病毒AA-2株适应体外培养的研究

在分离并系统鉴定了减蛋综合症病毒AA-2株的基础上，进行了该毒株的体外培养试验，以寻求适应于细胞培养物中继代的细胞适应毒。结果表明，AA-2毒株可在鸭胚成纤维细胞（DEF）、鸭胚肾细胞（DEK）、鸭胚肝细胞（DEL）、鸡胚成纤维细胞（CEF）、鸡胚肾细胞（CEK）和鸡胚肝细胞（CEL）上增殖和继代，并随着继代次数的增加，CPE潜伏期缩短，持续期延长，半数细胞感染量（TCID50）呈逐代增加趋势，血凝效价（HA）逐代稳步增强，至第15代之后，之些变化趋于稳定。证明用鸭胚细胞培养的AA-2株病毒在PK-15，BHK-21，SP2/0等细胞中增殖的迹象。还较为系统的测定了第19代DEF毒的其它特性。发现在接毒后120小时，HA及TCID50值最高，细胞适应毒对鸭胚致死率为10%，比原毒降低23%，理化特性与原毒一致，且仍保持原毒的抗原性。     

鸡新城疫病毒分离株细胞培养特性的研究

该试验对实验室保存的已适应于鸡胚的鸡新城疫病毒(NDV)分离株进行了鸡胚成纤维细胞(CEF)和仓鼠肾传代细胞(BHK21)的接种传代,同时利用96孔微量多孔板培养BHK21细胞单层,并在其上测定NDV分离株的细胞半数感染量(TCID50)。结果表明：NDV分离株在CEF和BHK21细胞上引起典型的细胞病变,细胞变圆、聚集、脱落,残留的细胞呈拉网状结构。NDV分离株在BHK21细胞上的TCID50为0．02mL 10^-6.75稀释的病毒液。     

鸡传染性法氏囊病病毒快速适应鸡胚成纤维细胞的研究

将鸡传染性法氏囊病病毒的鸡胚组织毒或法氏囊组织毒直接在鸡胚成纤维细胞(CEF)上盲传3～13代后。能产生特征性细胞病变效应(CPE)。病毒在含65℃灭能30分钟的犊牛血清的细胞生长液制备的CEF上传代,比在含有56℃灭能的犊牛血清的生长液制备的CEF上传代能早3～5代出现CPE,而得到适应;鸡胚高代毒比鸡胚低代毒更易适应CEF;法氏囊组织毒和鸡胚低代毒对适应CEF的进程没有显著差异。     

中药黄芩苷体外抗马立克氏病病毒作用的研究

探讨黄芩苷体外抗马立克氏病病毒(MDV)作用,应用细胞病变观察法(CPE)观察MDV对鸡胚成纤维细胞(CEF)的影响,采用Reed-Muench法计算MDV细胞半数感染量(TCID50),以CEF为宿主细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法从黄芩苷对MDV的增殖抑制、感染阻断以及直接灭活3个给药途径探讨黄芩苷抗MDV作用。结果显示:MDV对CEF的TCID50为10-4.5/0.1 m L;3种给药途径下,黄芩苷浓度在312.5~78.13μg/m L范围都具有较好的抗MDV感染作用,并且感染阻断途径下黄芩苷浓度为312.5~156.25μg/m L时能够促进细胞的生长,直接灭活途径下黄芩苷浓度为312.5μg/m L时能够促进细胞的生长。其中感染阻断与直接灭活途径给药比增值抑制途径给药的抗MDV感染作用效果要好,直接杀灭途径给药时的病毒抑制率最高。