鸡传染性法氏囊病灭活疫苗接毒方法改进试验

利用鸡胚成纤维细胞生产鸡传染性法氏囊病(X株)灭活疫苗的过程中,生产规程要求在接毒时一般采用弃去原生长液,接种病毒后37℃吸附1 h,再加入维持液进行病毒增殖的方法。本试验通过直接接毒的方法进行病毒繁殖,并与吸附接毒法对比。结果表明,直接接毒法不论是抗原收获的时间还是病毒含量(TCID50),与传统吸附接毒法都无显著差异,且按直接接毒法生产的疫苗安全性检验全部合格,说明可用不换液直接接毒来进行(X株)灭活苗的生产。     

犬细小病毒病研究进展

犬细小病毒病是由犬细小病毒感染幼犬所引起的一种急性传染病。临床上有两种表现型,出血性肠炎型以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征;心肌炎型则以突然死亡为特征。无论那种类型的临床表现,均以发病率高、死亡率高和传染性强为特点,是危害养犬业最为严重的传染病之一,可造成严重的经济损失。论文从病毒生物学特性、基因组结构、病原的检测方法,流行病学、发病机理及病理变化、临床症状以及疫苗研制等角度对犬细小病毒病近年来的研究进展做以概述。     

布鲁菌病多重PCR快速检测方法的建立及应用

根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法从布鲁菌标准菌株中扩增出了特异性的目的片段,而对大肠埃希菌等细菌的扩增结果均为阴性。经过对10倍倍比稀释的模板进行检测,多重PCR的敏感度为最低可检出1.1×10-3ng的DNA,在感染布鲁菌病奶牛乳汁模拟标本中最低可检出细菌数为80 cfu/mL。不同人员用该方法重复检测,结果均一致,表明重复性好。应用该方法对88份临床疑似布鲁菌感染的奶牛乳样进行了检测,结果检出17份阳性,阳性检出率约为19.3%。检测结果表明,该方法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于奶牛布鲁菌病的临床检测及流行病学监测等。     

牛传染性鼻气管炎病毒XA株的分离与鉴定

【目的】利用MDBK细胞进行牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)XA株的分离与鉴定。【方法】用MD-BK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离IBRV;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;根据GenBank公布的IBRV基因组序列,利用gB保守序列设计1对引物,对分离病毒进行PCR扩增并测序。【结果】分离病毒在MDBK细胞上产生了明显的特征性细胞病变(CPE):细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞,偶见含有几个细胞核的巨大细胞;用标准抗IBRV特异性抗血清能完全中和分离株;用IBRV gB特异性引物进行PCR,可扩增出1 182 bp的特异性条带,目的序列与已发表的IBRV基因组序列一致。【结论】该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒,将其命名为IBRV XA株。     

鸡传染性法氏囊病免疫失败的原因分析及防制

传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease，IBD)是由双RNA病毒科的传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的、主要见于3-12周龄幼鸡的一种急性、高度接触性传染病。IBDV主要侵害鸡的中枢免疫器官——法氏囊和携带IgM的早期分化的B淋巴细胞，使鸡体免疫器官和免疫活性细胞功能受到严重影响，出现免疫抑制，导致其他疫苗接种后机体免疫应答功能低下或不发生免疫应答，因而常继发多种疫病，如鸡的大肠杆菌病、坏疽性皮炎、细菌性关节炎、禽传染性贫血、新城疫、马立克氏病、禽传染性支气管炎、鸡慢性呼吸道病等。     

乳猪料中添加抗生素药物筛选试验

为筛选出抗腹泻、促生长效果双佳的乳猪料抗生素添加剂,试验设计了五个处理组,即杆菌肽锌组、喹乙醇组、土霉素组、喹乙醇+杆菌肽锌组、喹乙醇+土霉素组,进行了为期40天的(20—60日龄)的对比观察。结果表明:土霉素在仔猪前期(20—35日龄)表现出良好的抗腹泻作用,但后期(36—60日龄)促生长作用较差;喹乙醇在前期抗腹泻作用次于土霉素,而在后期促生长作用较强,与土霉素联合应用效果较佳;杆菌肽辞抗腹泻效果较差,但促生长作用明显。仔猪全期(20—60日龄)日增重、经济效益均以杆菌肽锌最高,喹乙醇与杆菌肽锌复合组最低。     

禽脑脊髓炎活疫苗免疫持续期试验

将200009批疫苗分三个剂量组（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ），病毒含量分别为每羽份合500、1000、1500EID50，口服免疫13周龄SPF鸡，同时设进口同类疫苗组（Ⅳ）和未接种空白组（Ⅴ）作为对照。，分别于免疫后7d、14d、17d、21d、28d、42d、56d、70d、84d、105d、126d、149d、169dR血，分离血清，采用IDEXX禽脑脊髓炎抗体检测ELISA试剂盒检测血清中AEV抗体水平，并通过鸡胚易感试验和后代雏鸡试验评价产蛋后鸡群的免疫状态。结果表明，疫苗接种后14d，免疫鸡血清已全部阳转，免后42d时抗体出现第一个峰值，此后一直保持较高水平，并且抗体水平的高低与接种疫苗的病毒含量呈正相关关系。用AEVVR强毒进行的鸡胚易感试验，免后6～55周免疫组鸡胚的感染率在35％以下；后代雏鸡攻毒保护率在92．9％以上。     

禽脑脊髓炎冻干活疫苗安全性、最小免疫剂量及免疫效力试验

检测了4批自制禽脑脊髓炎冻干活疫苗的安全性和最小免疫剂量,并对疫苗进行了病毒含量测定和攻毒保护试验。结果表明,鸡接种疫苗后精神、食欲及发育均正常,疫苗安全性良好;接种病毒剂量为500 E ID50时,可使免疫鸡产生可靠的免疫力,抵抗AEV VR株强毒的攻击,降低鸡群发病率,所以该疫苗的最小免疫剂量≤500 E ID50/羽。4批疫苗病毒含量均大于103.5E ID50/羽份,攻毒后保护率均在87.5%以上。     

H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的原核与真核表达

【目的】构建H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因的原核和真核表达载体,将其分别在大肠杆菌和293细胞中进行表达,为进一步研究NS1蛋白的功能及其与宿主的相互作用,以及鉴定禽流感疫苗免疫禽和野毒感染禽ELISA诊断试剂盒的制备提供理论依据。【方法】用RT-PCR方法扩增H9N2亚型AIV的NS1基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中构建NS1基因的原核重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;同时,将NS1基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建NS1基因真核重组质粒,将其瞬时转染293细胞,48h后收集感染细胞,对大肠杆菌表达产物和293细胞表达产物进行Western-blotting分析。【结果】成功构建了NS1基因的原核表达载体pET-32a-NS1和真核表达载体pEGFP-C1-NS1。Western-blotting结果表明,大肠杆菌和293细胞的表达产物均能检测到特异性条带(大肠杆菌的表达产物在约44ku处出现阳性条带,293细胞表达产物在约55ku处出现特异条带)。【结论】NS1基因在大肠杆菌和293细胞中得到成功表达,获得的NS1蛋白具有良好的抗原活性。     

鸡传染性法氏囊病病毒X-28弱毒株的致病性试验

在Vero细胞上适应且连续传17代的传染性法氏囊病病毒X毒株IBDVX,再经鸡胚成纤维细胞CEF连续传代后,得到了适应CEF细胞生长且毒力相对稳定的的弱毒株(IBDVX-28)。IBDVX-28~IBDVX-43代毒均能在72h~96h内产生明显的细胞病变效应(CPE),半数细胞感染量(TCID50)在10-8.47/0.1mL~10-9.26/0.1mL之间,半数鸡胚感染量(EID50)在10-4.71/0.2mL~10-5.80/0.2mL之间。致病性试验表明,各代次毒能引起10日龄鸡胚40%~50%的感染或死亡,对30日龄SPF小鸡基本无致病性,所有试验鸡均未见法氏囊明显的眼观病变,囊指数(b/B)平均为0.35±0.040;IBDVX-28代毒在雏鸡体内回归6代,均未见法氏囊明显的眼观病变,囊指数保持稳定。