马立克氏病疫苗免疫鸡群强毒攻击后羽囊排毒情况

分别以血清型Ⅱ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ）疫苗株（Ｚ４、ＳＢ１）、血清Ⅲ型火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗株（ＦＣ１２６）及二价疫苗（Ｚ４＋ＦＣ１２６、ＳＢ１＋ＦＣ１２６）免疫鸡群，用琼脂扩散试验（ＡＧＰＴ）检查各鸡群ＭＤＶ强毒攻击后不同时期的羽囊抗原。结果，二价苗能使试验鸡羽毛囊强毒排出高峰推迟，排毒率显著下降。     

狄高辛标记DNA探针对鸡马立克氏病的流行病学研究

用狄高辛标记的Ⅰ型马立克氏病病毒特异性ＤＮＡ探针，对自然感染鸡羽囊、人工感染鸡羽囊和脏器、同居感染鸡羽囊进行了检测。结果表明，自然感染鸡，其羽囊最早出现阳性的日龄为４２日龄，随日龄增大，羽囊阳性检出率升高，１５０日龄达最高峰（２６．７％）。以后则阳性率显著下降（６月龄为０．４８％，１年以上为０．２４％）。鸡人工感染马立克氏病国际标准强毒（ＭＤＶ－ＧＡ强毒）后３ｄ，就可从５只鸡中３只的心、肝、肺、肾、法氏囊、胸腺、肌胃等脏器检出Ⅰ型ＭＤＶ－ＤＮＡ；２５ｄ，５只鸡的脏器均能检出ＭＤＶ－ＤＮＡ；同时，感染后１０ｄ，就可从羽囊检出ＭＤＶ－ＤＮＡ，１５ｄ羽囊检出阳性率达１００％。同居感染鸡从羽囊排毒的最早时间为同居后３１ｄ，即接触强毒２１ｄ后开始持续排毒，直至死亡。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联油乳剂灭活疫苗研制及应用

用新城疫病毒（ Ｎ Ｄ Ｖ） Ｌａ Ｓｏｔａ 株、鸡传染性支气管炎病毒 （ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｍ４ １ 株接种鸡胚, 收获含毒鸡胚尿液。用传染性法氏囊病病毒 （ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） 地方强毒 Ｈ Ｂ９ ０ ９ 株接种３０ ～４０ 日龄肉用鸡, 发病后取囊组织 （ 或收集 Ｉ Ｂ Ｄ 典型发病鸡囊组织） 制备成含毒组织悬液。将三种病毒液按一定比例混合, 制备成三联油乳剂灭活苗。三联苗免疫１８ 日～２８ 日龄雏鸡, 免疫后２１ 天攻毒测保护力, 三种传染病保护率均在９０ ％ ～１００ ％ , Ｎ Ｄ Ｈ Ｉ抗体≥１∶３２ , Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ａ Ｇ Ｐ阳性率１００ ％ , Ｉ Ｂ Ｖ Ｎ 抗体≥１∶８ , 疫苗免疫期可达４ 个月以上。疫苗在４ ℃～８ ℃保存期为１８ 个月, １０ ℃～２０ ℃保存为６ 个月, 该疫苗在全省不同地区、不同品种鸡应用１５ 万羽份, 取得理想免疫效果。     

马立克氏病疫苗免疫后鸡免疫器官组织抗体生成细胞的变化

本实验分别用马立克氏病（ＭＤ）三价苗和ＨＶＴ疫苗肌肉注射免疫１日龄雏鸡，在１０、２０、４０、６０和９０日龄以兔抗鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ重链抗血清为一抗，用彩色免疫金银染色法检测法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和哈德尔腺的ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞的动态变化。结果发现：雏鸡ＭＤ疫苗免疫后，法氏囊和脾脏的ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞较对照鸡显著增多，盲肠扁桃体以ＩｇＡ抗体生成细胞为主、哈德尔腺以ＩｇＧ抗体生成细胞居多的三种抗体生成细胞数量均明显升高；三价苗免疫鸡的抗体生成细胞显著多于ＨＶＴ疫苗免疫鸡。说明ＭＤ疫苗免疫鸡全身免疫器官、呼吸道和消化道相关局部免疫组织的体液免疫反应显著增强，三价苗免疫鸡的体液免疫应答水平明显高于ＨＶＴ疫苗免疫鸡。     

鸡马立克氏病活疫苗免疫效力比较试验

用ＨＶＴ冻干苗、ＨＶＴ细胞结合苗、ＣＶＩ９８８细胞结合苗、ＳＢ１＋ＦＣ１２６双价活疫苗、３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６双价活疫苗和Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫ＳＰＦ白来航鸡或普通伊莎鸡，用鸡马立克氏病病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株、京－１血毒以及鸡马立克氏病超强毒ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株分别攻击进行免疫效力比较试验。试验表明，ＭＤ单价苗的免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８、ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗，这３种ＭＤ单价苗均能给免疫鸡群提供有效的免疫保护力。ＳＢ１＋ＦＣ１２６、Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６等３种ＭＤ双价苗免疫效力显著高于ＭＤ单价苗，均能给免疫鸡群提供较强的免疫保护力，并能有效地抵抗ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株的致瘤作用。Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６ＭＤ双价苗免疫效力无显著差异     

用鸡胚检测鸡马立克氏病疫苗的免疫效果

将火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗接种于鸡胚卵黄囊、然后检查绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）上病毒痘斑（以下简称“痘斑”）生长情况,以此作为ＨＶＴ疫苗免疫前效力检测的手段,得到满意效果。１材料与方法１．１ＭＤ强毒（ｖＭＤＶ）分离自本公司某鸡场严重感染ＭＤ鸡的血液,经原北京农业大学鉴定为一株ｖＭＤＶ。历年采购的国产和进口ＨＶＴ疫苗３０批次,分甲、乙、丙３组进行观察。１．２经血清学检查（ＭＤ-ＡＧＰ）并证明无ＭＤ抗体的种鸡所产种蛋,按常规方法,孵育到４～５ｄ的鸡胚用于接种;卵黄囊接种已稀释好的ＨＶＴ疫苗,每份ＨＶＴ疫苗分１,２…     

表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。     

鸡马立克氏病单价活疫苗免疫效力比较试验

用农业部南京药械厂和三家外国动物保健品公司生产的４种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗、实验室制备的ＣＶＩ９８８细胞结合苗和ＨＶＴ细胞结合苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）单价活疫苗免疫１日龄ＳＰＦ白来航鸡，８日龄时用鸡马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）ＧＡ株攻击，同时以Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗作对照，进行免疫效力比较试验。结果表明，６种ＭＤ单价活疫苗均能使免疫鸡群获得对ｖＭＤＶ攻击的免疫保护力，免疫效力强弱顺序依     

HVT免疫鸡羽毛根中病毒抗原的检测

１日龄非免疫鸡,ＨＶＴ常规剂量免疫后,于第３周起,每周采集一次羽毛根,分别作常规ＭＤＶ琼扩抗原的检测,结果显示：在免疫后第３～８周检测,均未观察到特异性ＡＧＰ沉淀线;若取较多数量的富含羽髓的羽毛根,经２ｍｌ磷酸缓冲液（ＰＢＳ）浸提、浓缩胶浓缩约４０倍后,再作上述检测,则分别于免疫接种后的第３～５周都有特异性的ＡＧＰ沉淀线出现,且与感染细胞上清中浓缩的ＨＶＴ及ＭＤＶ琼扩抗原所形成的沉淀线基本吻合,而第６周检测时,仅与ＨＶＴ阳性血清呈微弱阳性,用同样方法对免疫后第６周后的检测结果均表明为阴性。由此推断,免疫鸡羽毛根中含有较低水平的、并与致病性ＭＤＶ抗原具有交叉反应性的ＨＶＴ琼扩抗原,但采用常规ＡＧＰ法不能直接检测到。     

应用聚合酶链反应鉴别诊断马立克氏病病毒及免疫效果监测

应用３对引物建立了３套聚合酶链反应检测体系。用该技术分别检测马立克氏病毒１型，３型毒株，并能鉴别１型致癌性强毒株和非致癌性弱毒株；可从强毒感染 病鸡病变脏器和弱毒免疫的ＳＰＦ雏鸡不同时期采集的弱髓中检测到ＭＤＶ１型病毒的ＤＮＡ；可鉴别强毒发病鸡羽髓和弱毒免疫鸡羽髓。以羽髓为检测材料，应用上述ＰＣＲ技术可以ＭＤＶ１型弱毒疫苗免疫鸡群进行免疫效果监测。     

SPF鸡卵内接种的探索

最近 ,美国明尼苏达大学的ＭａｊａＧａｇｉｃ等人用含有多种活病毒制剂的混合物组成的疫苗进行卵内接种使鸡对多种疾病产生保护。一次卵内注射含有马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清型１、２、３和传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）血清型１的疫苗株、用新城疫病毒ＨＮ和Ｆ基重组的禽痘病毒（ｒＦＰ -ＮＤＶ）的疫苗引起对强毒ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、新城疫病毒及禽痘病毒的保护。多种制剂疫苗引起抗混合物中存在的病毒抗原的特异性抗体 ,并且对孵出鸡的存活没有不良影响。虽然在混合物中加入ｒＦＰ -ＮＤＶ使孵化率降低２３ %～２６ % ,但是由ＭＤＶ血清…     

气雾接种鸡新城疫和鸡痘联苗

气雾接种鸡新城疫和鸡痘联苗盘宝进编译郑儒标校广西兽医研究所５３０００１对鸡群的免疫，气雾接种最为方便和有效。小鸡对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡痘病毒（ＦＰＶ）高度易感。用１０日龄鸡胚增殖ＮＤＶ疫苗Ｆ株和Ｒ２Ｂ株，已高度致弱的ＦＰＶ疫苗ＨＰ１株用１２日龄...     

HVT免疫鸡羽毛根中病毒抗原的检测

１日龄非免疫鸡,ＨＶＴ常规剂量免疫后,于第３周起,每周采集一次羽毛根,分别作常规ＭＤＶ琼扩抗原的检测。结果显示,在免疫事第３～８周检测,均未观察到特异性ＡＧＰ沉淀线,若取较多数量的富含羽髓的羽毛根,经２ｍｌ磷酸缓冲液（ＰＢＳ）浸提,浓缩胶浓缩约４０倍后,再作上述检测,则分别于免疫接种后的第３～５周都有特异性的,ＡＧＰ沉淀线出现,且与感染细胞上清中浓缩的ＨＶＴ及ＭＤＶ琼扩抗原所形成的沉淀线基本吻合,     

雏鸡MD三价疫苗及HVT疫苗免疫后免疫器官组织的免疫学变化

对探讨ＭＤ疫苗免疫后器官组织的免疫学变化，采用ＭＤ三价疫苗和ＨＶＴ疫苗免疫１日龄雏鸡后，观察中枢和外围免疫器官以及消化道，呼吸道相关局部免疫组织的免疫学变化。结果ＭＤ两种疫苗免疫后，胸腺，法氏囊，脾脏和盲肠扁桃体，肺支气管粘膜焉淋巴组织及哈尔腺中ＴＡＭＡＥ＋细胞，ＴＡＣＰ＋细胞，浆细胞和淋巴细胞明显增多，表明ＭＤ疫苗免疫应签明显增强，其中ＭＤ三价苗较ＨＶＴ疫苗更明显。     

表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免？…

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２,该病毒性在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒,经翅皮下５×１０＾５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡,免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒,获得了５／６的保护,但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩,实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原,提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ     

用羽髓物鸡胚接种法诊断鸡马立克氏病

利用鸡胚卵黄囊接种试验 ,以绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）上病毒痘斑生长情况为依据 ,诊断鸡ＭＤ ,收到满意效果。１健康鸡胚经隔离饲养、血清学检验（ＡＧＰ）并证明无ＭＤ抗体的种鸡所产种蛋孵化的鸡胚。２羽髓浸液ＭＤ可疑鸡５只（７０日龄） ,每只鸡取翅羽２０根 ,剪下带羽囊的羽根放入消毒过的试管内 ,加入灭菌生理盐水３ｍＬ ,用消毒过的镊子挤出羽髓 ,弃去羽囊壳 ,破碎羽髓 ,搅拌后即为１份羽髓浸液 ,备用。３接种试验用上述羽髓浸液 ,按常规方法 ,即时（不加保存）接种于已孵化４～５ｄ的健康鸡胚卵黄囊 ,每份羽髓浸液接种１２个鸡胚 ,每胚…     

表达马立克氏病病毒CV1988／Rispens糖蛋白B重组鸡痘病毒的免？…

用表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ（Ｉ型疫苗株ＣＶ１９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因的重组鸡痘病毒（ｒＦ－ＰＶ－ｇＢ／Ｒ）和鸡痘病毒（ＦＰＶ）疫苗株２８２Ｅ４免疫１日龄不同品种的鸡,来评价２种病毒株的安全性及免疫母源抗体的商品是我毒性,而对无毒源抗体的ＳＰＦ鸡的毒性则不同。斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交产,ｆＦＰＶ－ｇＢ／Ｒ中无氨苄青霉素的抗性基因。     

表达马立克氏病病毒CVI988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB）基因构建成重组鸡痘病毒（rFPV）。以MDV　GA或Md5和RBIB混合攻毒，在不同品种的鸡中评价rFPV－gB／R单价苗和与火鸡疱疹病毒（HVT）组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明，MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中，rFDV－gB／R均能提供免疫保护作用，且其中一种商品蛋鸡中rFPV－gB／R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用，均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出，rFPV－gB／R与常规疫苗一样，可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。     

表达马立克氏病病毒CV1988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB)基因构建成重组鸡痘病毒（rF-PV)。以MDV GA或Md5和RBIB混合攻毒，在不同品种的鸡中评价rFPV-gB/R单价苗和与火鸡疱疹病毒（HVT）组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明，MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中，rFDV-gB/R均能提供免疫保护作用，且其中一种商品蛋鸡中rFPV-gB/R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用，均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出，rFPV-gB/R与常规疫苗一样，可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。     

鸡马立克氏病Z4＋HVT二价苗的免疫效力试验

用鸡马立克氏病(MD)血清Ⅱ型和Ⅲ型病毒制备了几种二价苗和单价苗。在实验室以高度易感的SPF鸡和商品鸡进行疫苗的免疫效力试验。结果表明,马立克氏病病毒(MDV)血清Ⅱ型毒株和Ⅲ型毒株之间存在协同保护作用。由血清Ⅱ型和Ⅲ型病毒组成的二价苗免疫效果明显优于单价苗。在以SPF鸡进行的免疫效力试验中,Z_4+HVT、SB_1+HVT、HVT、Z_4和SB_1的保护指数分别为78.9、78.6、41.7、46.7、和45.0;在以商品鸡进行的免疫效力试验中,Z_4+HVT、SB_1+HVT、HVT、Z_4和SB_1的保护指数分别为93.9、88.1、64.3、69.4和60.8。我们还用琼扩试验检查了强毒攻击后不同时期鸡羽囊排毒情况,发现Z_4+HVT二价苗抑制排毒的作用要比SB_1+HVT二价苗强。