龙胆草及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究

为研究龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用，本试验建立Marc-145细胞模型，在研究其对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上，结合细胞病变形态观察和MTT法，设立药物组、利巴韦林阳性对照组、病毒对照组和细胞对照组，对病毒进行阻断、抑制和直接灭活3种作用方式的测定。结果显示，龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷和利巴韦林的最大安全浓度分别为6.250、0.020、0.630和0.016 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中，龙胆草水提取物对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为43.1%、57.4%和56.4%，均低于阳性对照利巴韦林，且各作用方式下细胞均发生了明显病变。龙胆草总黄酮对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为66.1%、41.1%和42.7%，其抑制作用和直接灭活作用的抑制率均低于阳性对照利巴韦林，阻断作用下细胞轻微病变。龙胆草总苷对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为33.4%、78.2%和81.9%，其抑制和直接灭活作用较强，远高于阳性对照利巴韦林，且在这两种作用方式下细胞基本保持单层完好。综合3种作用方式，3种龙胆草提取物中龙胆草总苷抗PRRSV的效果最好，其次是龙胆草水提取物和龙胆草总黄酮。     

紫玉米花色苷抑制牛传染性鼻气管炎病毒在牛肾细胞中增殖的研究

为研究紫玉米花色苷(purple corn anthocynins,PCA)的抗病毒效果,本试验先通过观察细胞病变效应测定了PCA对牛肾细胞传代系MDBK细胞的毒性作用,以此确定PCA的安全浓度范围;然后以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测了安全浓度范围内的PCA对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中复制的影响。PCA毒性试验结果显示,PCA对MDBK细胞的最大安全浓度为262.14 μg/mL;而最小浓度为7.8125 μg/mL的PCA就能对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中的复制有明显抑制作用。MTT试验结果显示,PCA对MDBK细胞的半数抑制浓度（TC₅₀）为262.14 μg/mL,对病毒的半数抑制浓度（IC₅₀）为11.38 μg/mL,以此计算出治疗指数（TI）为23.04。由此证明PCA具有良好的抗牛传染性鼻气管炎病毒的作用,提示紫玉米可作为防制奶牛传染性鼻气管炎的饲料原料。     

中山病毒的血凝和血凝抑制试验

中山（Chuzan)病毒能凝集包括牛在内多种动物的红细胞，对牛红细胞的血浆（HA）活性依赖于NaCl克分子浓度，当该浓度为0．6M时最强，但与PH和温度无关，从2头母牛和库蒙中分离到2株中山病毒，其HA抗原性难以区分，所有感染该病毒的牛的血凝抑制HI抗体 价都升高，其变化与中和试验（NT）抗体效价相似，HI和NT抗体的相关性很高，抗体可保持1年以上，因此，HA试验可代替NT试验用于检测牛的中山病毒感染。     

抗传染性支气管炎病毒中药的研究

用细胞培养法、鸡胚培养法对车前子、麦冬等40种中药进行抗传染性支气管炎病毒（IBV）的筛选试验。通过细胞病变（CPE）抑制试验，石榴皮等5种中药有抑制CPE的作用。培养细胞有20%发生CPE，认为这些中药有抗IBV的作用。应用空斑形成抑制试验对5种抗IBV中药进行复筛，结果表明5种中药均有不同程度的抑制病毒空斑形成作用，其中以石榴皮等2种中药作用较强，空斑形成抑制率可达98%以上。应用鸡胚培养法对5种中药进行抗IBV试验，结果发现5种中药均显著地减少了鸡胚体的死亡，其中以石榴皮等2种中药抑制制胚体病变的作用最强。通过不同加药时间观察到在接毒前48h给药，有2种中药具有明显抑制CPE的作用；接毒同时加药以及接毒后1h加药，这5种中药均能明显抑制CPE。     

紫花地丁香豆素类提取物体外对新城疫病毒抑制作用的研究

试验旨在探究紫花地丁香豆素类提取物体外对新城疫病毒的抑制作用。试验以紫花地丁为材料，制备紫花地丁香豆素提取物体，利用高效液相色谱法检测提取物中秦皮甲素和秦皮乙素的含量，利用CCK-8方法检测紫花地丁香豆素类提取物对新城疫病毒（NDV）感染鸡胚成纤维细胞的影响。结果表明，紫花地丁中秦皮甲素和秦皮乙素的含量分别为2.58、7.66 mg/g；紫花地丁香豆素类提取物在DF-1细胞中的半数致死浓度为185.2 mg/L。紫花地丁香豆素提取物浓度以剂量依赖的方式抑制NDV的复制，当提取物浓度为100 mg/L时，对NDV的复制抑制率最高，为74.31%。在NDV吸附抑制中，当紫花地丁香豆素类提取物作用浓度为100 mg/L时，对NDV吸附抑制率最高，为67.4%。研究表明，紫花地丁香豆素类提取物在体外具有明显的抗NDV感染作用。     

体外培养细胞中特异反义RNA表达对猪瘟病毒增殖的抑制作用

应用免疫荧光抗体技术检测了整合有猪瘟病毒反义基因的ＰＫ－１５细胞克隆对猪瘟病毒的抑制效应。结果表明，５个不同的反义基因片段对猪瘟病毒的抑制效率存在很大的差异，其中Ａ片段的抑制效率最高（９４％～９８％），Ｂ片段次之（５８％～７６％），Ｃ片段再次（６４％以下），Ｄ片段和Ｅ片段未见明显的抑制效应。抑制效率的差异可能与反义基因片段的位置、长短以及反义ＲＮＡ表达质粒载体有关。     

绿原酸的提取及其对猪细小病毒的体外作用研究

本试验利用水煮醇提方法提取金银花的主要成分绿原酸,通过观察PK 15细胞病变效应（CPE）来评价绿原酸不同加药方式（先加药后接种病毒,先接种病毒后加药）对猪细小病毒（PPV）的体外作用效果。结果表明,在安全浓度范围内,金银花提取物绿原酸对PPV具有显著的体外抑制作用和明显的体外阻断作用,对PPV的最小抑制浓度为1.56 μg/ml,对PPV的最小阻断浓度为0.391 μg/ml。     

紫花地丁黄酮类提取物体外抗传染性支气管炎病毒作用研究

为了在体外研究紫花地丁黄酮类提取物抗鸡传染性支气管炎病毒（IBV—M41）的作用,以鸡胚肾细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应（CPE）与空斑减数试验测定紫花地丁黄酮类提取物抗IBV活性,计算其IC50与治疗指数,并从药物对病毒的直接灭活作用、对病毒吸附的影响及对病毒穿膜的影响3个方面初探紫花地丁黄酮类提取物抗IBV活性的机理。结果：紫花地丁黄酮类提取物能明显抑制IBV的致病变作用,其IC50为16．52mg／L,TI值为15．76。研究显示,紫花地丁黄酮类提取物在体外对IBV直接灭活的效果明显,在高浓度时对抑制IBV吸附与穿入细胞具有一定作用。结果表明：紫花地丁黄酮类提取物在体外有明显的抗IBV感染作用,且主要是通过直接灭活IBV而发挥作用。     

猪白细胞干扰素在细胞培养物中干扰牛病毒性腹泻／粘膜病（BVD／MD）病毒的试验

对猪白细胞干扰素在细胞培养中干扰牛病毒性腹泻／粘膜病BVD／MD）病毒的作用进行了试验。猪白细胞干扰素在500u/ml以上浓度可完全抑制牛病毒性腹泻／粘膜病（BVD／MD）病毒所产生的细胞病变，在25u/ml浓度可部分抑制病毒所产生的细胞病变，在250u/ml以下浓度不能抑制病毒所产生的细胞病变，但可使细胞产生细胞病变的时间延长，病变程度减轻，本试验证实干扰素在猪和牛之间存在交叉活性。     

辣蓼黄酮正丁醇部分体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

为明确辣蓼黄酮正丁醇部分（n-butanol part of flavonoids from Polygonum hydropiper L.,FNB）体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PPRSV）的效果。本研究以Marc-145细胞和PPRSV弱毒疫苗毒株（TJM-F92）为对象,通过CCK-8法检测FNB对细胞的毒性作用,并检测先给药后接毒、先接毒后给药、药物与病毒同时作用这3种方式处理细胞后药物对病毒的抑制率。结果发现,FNB对细胞的最大安全浓度为500 μg/mL,因此,选择25~500 μg/mL浓度范围的FNB进行后续试验。各浓度的FNB处理病毒后,能不同程度的抑制PRRSV在细胞上的增殖,并呈现一定的剂量效应关系,药物的浓度越高,抗病毒效果越好。其中,先接毒后给药、药物与病毒同时作用这两种方式抗PRRSV效果显著,在25~500 μg/mL浓度范围内细胞存活率分别为21.55%~65.23%和24.85%~73.60%。而先给药后接毒,不能有效降低病毒的感染力,在药物最高剂量（500 μg/mL）时细胞存活率仅为7.00%,抗病毒效果不明显。FNB预先作用于Marc-145细胞虽未降低PRRSV感染细胞的能力,即药物对于PRRSV预防作用效果不理想,但是FNB对病毒感染细胞后呈现一定的作用,药物能够通过抑制病毒的合成、释放及直接杀灭病毒,进而能够有效抑制PRRSV在细胞上的增殖。本试验结果不仅为FNB在临床上治疗猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）提供参考依据,而且可以为辣蓼的深度开发和利用提供理论依据。     

板蓝根、黄芪等中药活性提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究

本试验利用Marc-145细胞体外培养系统，通过观察细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）对细胞的感染作用，并通过改变加药方式（先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入），初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内，板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用；连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用，为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。     

黄芩抑制鸡传染性支气管炎病毒增殖的作用机制研究

为研究黄芩乙醇提取物对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的体外抑制作用及对IBV感染细胞内抗病毒基因表达的影响,进行以下试验:①以人肺癌H1299细胞为供试细胞,在IBV感染过程中在细胞培养体系中加入一定量的黄芩乙醇提取物,24 h后检测病毒增殖量;②将黄芩乙醇提取物稀释成4个不同浓度,观察不同浓度的提取物对IBV的抑制作用;③用RT-PCR检测黄芩乙醇提取物对IBV感染细胞内抗病毒基因OASL、IFI27、STAT1表达的影响。结果显示:黄芩乙醇提取物对IBV具有明显的抑制作用,且药物浓度越高抑制作用越明显;此外,黄芩乙醇提取物可增加IBV感染细胞内抗病毒基因的表达量。     

蓝舌病病毒甘肃分离株的定型研究

继利用蚀斑抑制中和试验对蓝舌病病毒山东分离株（L001）进行血清型鉴定后，又对蓝舌病病毒甘肃分离株进行了血清型鉴定，证实甘肃分离株为蓝舌病病毒11型。     

银杏叶提取物抑制鸡新城疫病毒增殖试验

进行了银杏叶提取物对1O日龄鸡胚人工感染新城疫病毒(NDV)的抑制试验.抑制NDV增殖试验结果表明,NDV强毒组在48h的鸡胚保护率为20%,0.500 g/mL银杏叶提取物+NDV组鸡胚保护率为50%,两者差异显著(P<0.05);0.250 g/mL+NDV组、0.125 g/mE+NDV组的鸡胚保护率分别为70%、80%,与强毒组相比,差异显著(P相似文献   

中药复方提取物对细胞抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染能力的影响

中药复方提取物经临床验证对预防猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型等引起的疾病有效。本试验测定细胞安全浓度范围内中药复方提取物对细胞抗PRRSV感染能力的影响。试验用中药主要成分为虎杖、女贞子、杠板归等。提取方法为水浸,旋转蒸发干燥。制成生药原液浓度为25mg／mL,稀释成2500、1250、625．0、312．5、156．25、78．13、39．06、19．53、9．77、4．88ug／mL。培养细胞选用Marc-145。试验方法：1）细胞培养液中加入0．1mL中药提取物培养2h后加入PRRSV病毒液0．1mL,培养72h;2）细胞培养液中加入病毒液0．1mL培养2h后加入中药提取物0．1mL,培养72h;3）同时将各浓度中药提取物0．1mL和病毒液0．1mL加入细胞培养液中;3种加药方式均设细胞对照和病毒对照,每个浓度设4～6个重复。结果表明,第1种加药方式下,19．53—2500ug／mL效果显著,其中39．06ug／mL效果最好;第2种加药方式下,156．25～2500ug／mL效果显著,1250ug／mL效果最佳;第3种方式下,19．53—2500ug／mL效果显著,2500ug／mL效果最好。这可能是中药复方提取物预防PRRSV感染的作用机制之一。     

小分子药物索非布韦对牛病毒性腹泻病毒体外复制的影响

试验旨在研究小分子药物索非布韦是否具有抑制牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）复制的作用。通过MTT法测定了不同时间和不同浓度索非布韦对牛肾细胞（MDBK）增殖的影响;采用免疫荧光染色试验筛选出能有效抑制BVDV复制的索非布韦最适浓度,用实时荧光定量PCR、致细胞病变作用（CPE）和病毒半数组织细胞感染量（TCID₅₀）测定的方法检测索非布韦对BVDV复制的影响。结果显示,索非布韦处理MDBK细胞24和48 h能极显著抑制细胞增殖（P<0.01）;与对照组相比,当索非布韦浓度为800 μmol/L时免疫荧光染色检测BVDV感染MDBK细胞的双链RNA（dsRNA）含量极显著降低（P<0.01）;实时荧光定量PCR检测发现,与DMSO处理组相比,BVDV感染索非布韦处理组MDBK细胞,BVDV 5'UTR mRNA含量在病毒感染24和48 h时极显著降低（P<0.01）;BVDV感染索非布韦处理组MDBK细胞病变现象明显减弱;索非布韦处理24 h后能极显著减弱BVDV感染MDBK细胞后子代病毒颗粒的形成组与释放（P<0.01）,降低病毒滴度。综合上述结果表明,小分子药物索非布韦能有效抑制BVDV体外复制。     

金银花、山银花黄酮类提取物体外抗伪狂犬病病毒作用研究

分别提取湖南金银花和山银花黄酮类活性成分,利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应（CPE）来评价中药金银花和山银花黄酮类提取物体外抑制伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）对细胞的感染作用,并通过MTT法检测细胞活性。研究比较金银花、山银花的抗病毒作用,初步探讨中药抗病毒机制。结果表明：在安全浓度范围内,金银花和山银花黄酮类提取物均具有显著的抗病毒作用,体外对PRV分别具有明显的阻断、抑制和中和作用,其中山银花对PRV体外的抑制作用强于金银花,而阻断作用和中和作用,两者差异不显著。     

板蓝根、黄芪和青蒿提取物抗PRRSV作用比较

本试验对板蓝根、黄芪的提取物以及青蒿素的萃取液抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用机制进行研究。采用光学显微镜观察各细胞株形态上的变化,同时根据试验收集到的不同中草药提取物在不同浓度下(1、2、4、6μg/m L)的细胞保护率,采用SPSS18.0软件对数据进行统计分析。分析结果表明:不同浓度的中草药提取物抑制PRRSV所导致的细胞变性效果有显著差异,浓度越高,抑制效果越好。同时,不同的中草药提取物对PRRSV的抑制效果也存在显著差异,板蓝根提取物具有一定的减少病毒造成细胞病变的作用,而青蒿素提取物保护细胞的能力效果最佳,有效降低PRRS病毒复制与抑制病毒导致细胞变性效果,阻断病毒的复制以降低感染的机会。     

复方术芩提取液体外抗PEDV感染PK-15细胞的作用效果

为探讨复方术芩提取液体外抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染Vero细胞作用效果,以Vero细胞为宿主细胞,通过检测药物抗PEDV活性,计算其IC50和治疗指数TI,并从药物对PEDV的直接灭活作用、阻滞作用、吸附抑制、穿入抑制及复制抑制5个方面探讨复方术芩抗PEDV作用机理。结果显示复方术芩提取液能明显抑制PEDV的致病变作用,其IC50为17.41mg/L,TI为23.40。各浓度术芩提取液对PEDV病毒复制过程中均有一定的抑制作用,其中直接灭活作用和复制抑制试验效果比较明显,且质量浓度C=100mg/L,与病毒对照相比差异极显著(P<0.01),质量浓度C≥25mg/L,细胞保护率均超过50%。而阻滞试验、吸附抑制试验和穿入抑制试验,药物质量浓度需要达到100mg/L才出现显著的保护作用。表明复方术芩提取液在体外抗PEDV主要是通过对病毒的直接灭活和对病毒复制抑制而达到抗病毒功效。     

血凝和血凝抑制试验及易出现问题的原因分析

某些病毒能够与动物的红细胞发生凝集,即为红细胞凝集反应（HA）。这种凝集反应易被加入的特异性血清所抑制,即为红细胞凝集抑制试验（HI）。在禽病中目前这2种方法较常用作新城疫病毒、禽流感病毒等的诊断和血清学监测。