板蓝根、黄芪等中药活性提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究

本试验利用Marc-145细胞体外培养系统，通过观察细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）对细胞的感染作用，并通过改变加药方式（先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入），初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内，板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用；连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用，为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。     

绿原酸的提取及其对猪细小病毒的体外作用研究

本试验利用水煮醇提方法提取金银花的主要成分绿原酸,通过观察PK 15细胞病变效应（CPE）来评价绿原酸不同加药方式（先加药后接种病毒,先接种病毒后加药）对猪细小病毒（PPV）的体外作用效果。结果表明,在安全浓度范围内,金银花提取物绿原酸对PPV具有显著的体外抑制作用和明显的体外阻断作用,对PPV的最小抑制浓度为1.56 μg/ml,对PPV的最小阻断浓度为0.391 μg/ml。     

黄芪、金银花体外对伪狂犬病病毒作用研究

选用黄芪、金银花作为抗病毒药物，利用CPE抑制实验测定出黄芪、金银花单独使用及1：1联合使用在PK15培养上对PRV的最小直接杀灭浓度和最小阻断浓度。结果表明：黄芪、金银花对PK15的无毒浓度分别为62.5mg/ml，15.62mg/ml，金银花体外对PRV有抑作用，其对PRV的直接杀灭浓度为3．90mg/ml；最小阻断浓度为1．95mg/ml。与黄芪联合使用，其抑制作用增强，对PRV的直接杀灭浓度为1．95mg/ml，最小阻断浓度提高0．93mg/ml。黄芪单独使用对PRV的抑制作用不显著，但与金银花合用可使其抑制作用增强。     

紫花地丁黄酮类提取物体外抗传染性支气管炎病毒作用研究

为了在体外研究紫花地丁黄酮类提取物抗鸡传染性支气管炎病毒（IBV—M41）的作用,以鸡胚肾细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应（CPE）与空斑减数试验测定紫花地丁黄酮类提取物抗IBV活性,计算其IC50与治疗指数,并从药物对病毒的直接灭活作用、对病毒吸附的影响及对病毒穿膜的影响3个方面初探紫花地丁黄酮类提取物抗IBV活性的机理。结果：紫花地丁黄酮类提取物能明显抑制IBV的致病变作用,其IC50为16．52mg／L,TI值为15．76。研究显示,紫花地丁黄酮类提取物在体外对IBV直接灭活的效果明显,在高浓度时对抑制IBV吸附与穿入细胞具有一定作用。结果表明：紫花地丁黄酮类提取物在体外有明显的抗IBV感染作用,且主要是通过直接灭活IBV而发挥作用。     

8种中药成分体外抗犬细小病毒的研究

本研究旨在观察8种中药成分黄芪多糖（APS）,白术多糖（RAPS）,黄芩多糖（BSPS）,金银花多糖（FLPS）,栀子苷（CS）,苦参生物碱（SFA）,黄芪皂苷（AS）和金银花黄酮（FLF）体外对犬细小病毒（CPV）感染细胞能力的影响。分别将8种中药成分通过先加中药再接病毒、病毒和中药感作后加入和先接种病毒再加中药3种加药方式加入到培养24h的F81细胞中,于病毒接种后72h用MTT法测定F81细胞活性以评价各中药成分对F81细胞抵抗犬细小病毒感染的影响。结果,在第1种加药方式下,APS、RAPS、BSPS、FLPS抗CPV作用较强;在第2种加药方式下CS的抗病毒作用最为显著;在第3种加药方式下CS、SFA抗病毒作用最为显著。结果表明,8种中药成分均能不同程度地促进F81细胞抵抗病毒感染,部分中药成分的抗病毒作用与加药方式有关且呈一定的量效关系。     

黄芪、金银花提取物体外抗禽流感病毒的试验研究

选用黄芪、金银花作为抗病毒药物,利用细胞病变(CPE)抑制实验测出黄芪、金银花提取物单独使用及1:1联合使用在鸡胚成纤维细胞(CEF)上培养对禽流感病毒AIV(H9N2亚型)的最小直接杀灭浓度和最小阻断浓度.结果表明:黄芪、金银花提取物对CEF的无毒浓度分别为62.5mg/ml、31.25mg/ml.金银花提取物体外对AIV有抑制作用,其对AIV的直接杀灭浓度为7.81mg/ml;最小阻断浓度为3.90mg/ml;黄芪提取物单独使用对AIV的抑制作用不显著.金银花与黄芪提取物联合使用,其抑制作用增强,对AIV的直接杀灭浓度为0.98mg/ml,最小阻断浓度提高1.95mg/ml.     

金银花提取物对炎性反应细胞模型的作用

目的：研究金银花及其不同提取物对炎性反应细胞模型抗炎作用。方法：将金银花及其不同提取物按一定浓度添加到用大肠杆菌滤过液制作的炎性反应细胞模型中,观察细胞形态的变化。结果：金银花黄酮类致使细胞全部裂解破碎;金银花绿原酸类及其水提液组细胞生长旺盛,形态规整,与对照组基本相同。在高浓度菌液中,金银花绿原酸类炎性反应细胞模型的细胞形态有不同程度的改变,稀疏,聚集,较对照组差,随后有圆形细胞产生,而加有金银花水提液的细胞与对照组基本相同。结论：大肠杆菌滤过液随着浓度的升高对细胞形态的改变愈加显著。金银花黄酮类物质对细胞有损害作用,而金银花绿原酸类物质及其水提液在体外有很强的抗炎性反应作用。在高浓度菌液中,金银花水提液的抗炎效果比金银花绿原酸类好。     

岩生忍冬不同提取成分的体外抗菌抗病毒活性研究

对岩生忍冬不同提取成分进行抗菌抗病毒活性研究,为岩生忍冬资源开发与利用提供参考资料和理论依据。采用理化反应方法对岩生忍冬主要化学成分进行定性分析;采用微量肉汤稀释法测定岩生忍冬不同提取成分对14种标准菌株的最小抑菌浓度(MIC);以鸭坦布苏病毒(DTMUV)和牛轮状病毒(BRV)分别感染BHK-21细胞和MA-104细胞,通过光镜观察细胞病变结合噻唑蓝比色法,选择治疗指数作为药物体外抗病毒效果的评价指标,采用药物对病毒入侵细胞的阻断作用、直接灭活作用及增殖抑制作用3种方式分别检测岩生忍冬提取物体外抗DTMUV和BRV的效果。结果表明,岩生忍冬含有多糖、黄酮类、有机酸类、酚和鞣质类、三萜、甾体类和皂苷类等化学成分;岩生忍冬的多糖、黄酮、鞣质和皂苷4种成分对14种实验菌株均表现出抑制作用,但其抑菌活性存在一定差异;岩生忍冬水提物对DTMUV和BRV均表现出阻断作用、抑制作用和杀灭作用;岩生忍冬水提物3种作用方式抗DTMUV的药物半数抑制浓度分别为2.01 mg/mL、0.81 mg/mL和0.28 mg/mL,TI值分别为5.81、14.42和41.71;岩生忍冬水提物通过3种作用方式抗BRV的药物半数抑制浓度分别为0.06 mg/mL、0.27 mg/mL和0.19 mg/mL,TI值分别为121.67、27.04和38.42。说明岩生忍冬不同提取成分具有不同程度的抗菌抗病毒作用。     

生物表面活性素体外抗病毒活性

测定了表面活性素(Surfactin)的体外抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作用,并对其可能的机理进行了初步的探讨.结果表明,生物表面活性素对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)的TD50和TD0分别为62.5、16.125 mg/L;对猪肾(Porcine kidney,PK-15)细胞的TD50和TD0分别为31.25、4.03 mg/L;对NDV LaSota株、PRV株所致细胞病变效应有明显的抑制作用,可使细胞存活率显著升高;表面活性素可以直接作用于NDV LaSota株、PRV株,具有一定的抗病毒作用;同时还具有一定的预防NDV LaSota株感染及抑制其复制的作用.但对PRV病毒作用不显著.其抗病毒效果和相应的阳性对照抗病毒药物病毒唑(Ribavirin),无环鸟苷(Acyclovir,ACV)相当,并且由于其细胞毒性较弱,可作为一种抗病毒药物进行开发研究.     

肉桂酸衍生物抗PRV及其作用机制研究

以猪伪狂犬病病毒(PRV)感染PK-15细胞,对27种天然化合物的抗PRV作用进行筛查,并探讨抗PRV活性物质的作用机制。分别将27种天然化合物以不同方式作用于感染细胞,采用细胞病变法(CPE)和噻唑蓝比色法(MTT)测定其细胞毒性及对病毒吸附、复制和直接杀灭的作用。在药物与PRV共同作用于PK-15细胞24、48、72 h后,RT-PCR检测PRV的代表基因IE180、UL30和UL22在胞内的表达量。结果显示,肉桂酸衍生物(cinnamic acid derivative,CAD)具有抗PRV的活性,其EC50为(8.443±0.216)μg/m L,SI为6.6,最高抑制率为76%。3个时间点胞内IE180、UL30和UL22基因的拷贝数显著降低(P0.01),且呈剂量依赖性。结果表明,CAD对PRV有直接灭活作用,其作用机制是阻断PRV在细胞内的生物合成过程,但CAD对PRV的吸附过程没有阻断作用。CAD可作为抗PRV的候选药物。     

Effects of Mixed Caulis Lonicerae japonicae Extracts on Fracture Healing and Anti-inflammation

This experiment was aimed to study the effects of mixed Caulis Lonicerae japonicae extracts on fracture healing and inflammation. Rabbit right radius fracture model was induced by dental drill in order to study the medicine's effect on fracture healing. Moreover,the contents of Ca,P and alkaline phosphatase in serum were measured to explore the influences of mixed Caulis Lonicerae japonicae extracts on serum biochemical indexes of fractured rabbits.RAW264.7 cell was induced by LPS in order to research the effect of medicine on inflammation. The concentrations of TNF-α,IL-1β,IL-6 and NO were measured by ELISA. The results showed that the rabbit fracture model was successfully prepared by dental drill, and the extracts of Caulis Lonicerae japonicae could increase the levels of Ca and alkaline phosphatase and reduce the P content in the serum of fractured rabbits. The TNF-α,IL-1β and NO levels in RAW264.7 cell induced by LPS were significantly inhibited by the extracts with concentrations ranging from 50 to 200 μg/mL (P<0.05). However, the extracts had no significant effect on the level of IL-6 (P>0.05). These results demonstrated that the extracts of mixed Caulis Lonicerae japonicae could promote the fracture healing and possessed good resistance inflammation effect.     

复方忍冬藤提取物促进骨折愈合及抗炎作用研究

试验旨在探讨复方忍冬藤提取物对骨折愈合和抗炎的作用。采用牙科电钻制备兔右侧桡骨骨折模型,通过测定血清中钙、磷和碱性磷酸酶的含量,探明其对骨折家兔血清生化指标的影响。利用LPS诱导的RAW264.7细胞建立炎症模型,采用ELISA法测定复方忍冬藤提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放的炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和NO含量的变化。结果显示,利用牙科电钻可成功制备兔骨折模型,复方忍冬藤提取物可增加骨折家兔血清中钙和碱性磷酸酶的水平,降低血清中磷含量。与LPS组相比,50~200 μg/mL复方忍冬藤提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的炎症因子TNF-α、IL-1β和NO的含量具有显著的抑制作用（P<0.05）,对IL-6的含量无显著影响（P>0.05）。综上所述,复方忍冬藤提取物对骨折愈合有促进作用,并具有较好的抗炎效果。     

四种植物提取物对大肠杆菌的抑菌效果研究

 为充分利用当地资源和进一步开发植物药进行畜禽大肠杆菌病防治提供科学依据,采摘了本地生长的马鞭草、马齿苋、忍冬藤、蒲公英等四种植物,应用水提醇沉法制备提取液,用纸片扩散法和试管两倍稀释法对猪源、鸽源、牛源大肠杆菌进行体外抑菌效果试验,同时以小鼠为试验动物,检测四种植物提取液体内的抗菌作用。结果显示,四种植物对猪源大肠杆菌的抑菌圈在10～14 mm之间,均为中敏;对鸽源大肠杆菌在10～22 mm之间,马鞭草极敏,蒲公英高敏;对牛源大肠杆菌在7～14 mm之间,马鞭草高敏,蒲公英、忍冬藤中敏,马齿苋低敏。马鞭草对猪源、鸽源大肠杆菌的MIC和MBC是31.25 mg/mL,对牛源是62.5 mg/mL;蒲公英对猪源、鸽源的大肠杆菌MIC和MBC是62.5 mg/mL,对牛源是125 mg/mL;马齿苋对猪源的MIC和MBC是62.5 mg/mL和125 mg/mL,对鸽源、牛源的MIC和MBC分别是125 mg/mL和250 mg/mL;忍冬藤对猪源、牛源的MIC和MBC分别是125 mg/mL和250 mg/mL,对鸽源MIC和MBC是62.5 mg/mL和125 mg/mL。小鼠体内抗菌作用提示,用蒲公英和马鞭草1.88 g/kg、马齿苋和忍冬藤3.75 g/kg进行预防,可使感染大肠杆菌的小鼠成活率为达100%。四种植物提取液对大肠杆菌体外抑菌和体内抗菌均有较好的效果,马鞭草效果最好     

金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明金银花抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药3种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在3种不同的加药方式中,不同浓度的金银花提取液均能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,其作用效果与提取液浓度呈正比例相关。结果表明,金银花提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

12味中药对鸡血清型O_(78)大肠杆菌的抗菌活性观察

本研究旨在观察乌梅、芦荟等12味中药的水煎液对鸡致病性大肠杆菌O78的抗菌活性。选取乌梅、芦荟等12味中药加水煎煮以获得中药水提取物,测定其对鸡致病性大肠杆菌O78的最低抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC),并对体外抑菌效果较好的单味中药进行体内试验。乌梅、芦荟、白头翁抗菌活性较好,桔梗、连翘、大黄、白芍、白术几乎无抗菌活性,其中乌梅、白头翁与芦荟水提取物对鸡致病性大肠杆菌O78的MIC分别为2.57、2.06和2.31mg/mL。乌梅、芦荟、白头翁具有一定的抗鸡致病性大肠杆菌O78的作用,将为开发新的抗鸡致病性大肠杆菌的药物奠定理论基础。     

山西白猪的微卫星标记与其体重、体尺性状的关联分析

 采用单变量动物模型分析了21个微卫星标记对山西白猪初生重、断奶重、6月龄体重、体长、体高、胸围和活体背膘厚等7个性状的影响。结果表明，S0227和S0218标记对6月龄活体背膘厚有显著影响（P<0.05）。在S0227座位上，杂合子AB型个体的6月龄背膘厚最薄；在S0218座位上，BB和CC型个体的背膘最薄。S0101标记对6月龄体高有显著影响（P<0.05），对6月龄体重的影响也接近显著水平（P=0.0854）。在S0101座位上， CC型个体的6月龄体重最大，显著高于AB型个体，而与其他类型差异不显著；BC型个体的体高最高，显著高于AB型，而与其他类型差异不显著。     

凝结芽孢杆菌对蛋鸭产蛋性能、蛋品质及血清生化指标的影响

 试验旨在研究饲粮中添加不同水平凝结芽孢杆菌对蛋鸭产蛋性能、蛋品质及血清生化指标的影响。选取200日龄,产蛋率约80%的临武鸭240羽,随机分成4组,每组6个重复,每个重复10羽鸭,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加100 mg/kg、150 mg/kg和200 mg/kg凝结芽孢杆菌,预试期7 d,正试期28 d。结果表明：（1）饲粮添加凝结芽孢杆菌可提高蛋鸭产蛋率、平均日产蛋量、平均蛋重和饲料转化率,但未达显著水平（P>0.05）;添加100 mg/kg和150 mg/kg凝结芽孢杆菌可显著降低产蛋鸭采食量（P<0.05）,添加200 mg/kg与各组间均无显著差异（P>0.05）;(2）饲粮添加凝结芽孢杆菌可显著降低鸭蛋蛋壳厚度（P<0.05）,当添加150 mg/kg和200 mg/kg时,差异达极显著水平（P<0.01）,凝结芽孢杆菌还可显著提高鸭蛋蛋黄颜色,蛋白高度和哈氏单位（P<0.05）;（3）芽孢杆菌对产蛋鸭血清中血糖、总蛋白、总胆固醇、甘油三脂等血清生化指标均无显著影响（P>0.05）。由此可知,饲粮中添加凝结芽孢杆菌能在一定程度上提高蛋鸭饲料转化率和产蛋性能,虽会引起蛋壳厚度降低,但不影响合格蛋率,还可提高蛋黄颜色和哈氏单位,对蛋品质有一定改善。综合考虑,蛋鸭饲粮中凝结芽孢杆菌的添加量以150 mg/kg较为适宜。     

梅花鹿γ 干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT PCR方法扩增出梅花鹿γ 干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI neo CerIFN γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK 21)和牛肾细胞（MDBK）中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16 ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。     

云南省牧草品种混播及示范推广研究报告

总结三年在思茅、广南和丽江三个试验点分别进行的牧草混播试验,得出在思茅南亚热带环境条件下适宜的混播组合为:大叶千斤拔+阿玛瑞罗落花生+贝斯莉斯克伏生臂形草;在广南中亚热带环境条件下适宜的混播组合为:纳罗克非洲狗尾草+威提特东非狼尾草+海法或拉丁诺白三叶+绿叶或银叶山蚂蝗;在丽江温带环境条件下适宜的混播组合为:海法白三叶+雷得昆红三叶+猎人田紫花苜蓿+沙弗蕾肯尼亚白三叶+波特鸭茅+德梅特苇状狐茅+维多利亚多年生黑麦草。据此结论,分别在思茅、广南和丽江各建植133 3hm2共400hm2的示范草场,为相似生态环境进行大面积的草场改良提供理论和实践的指导依据。