四种牛分枝杆菌特异性蛋白融合表达及在牛结核病诊断中的临床应用

以原核表达的MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6融合蛋白作为诊断抗原,建立牛结核病抗体检测间接ELISA(iELISA)。该iELISA与导致常见牛病的非相关抗原无交叉反应。用iELISA检测90份健康牛血清,确定样本阴阳性临界值(S/P)为0.17。与商品化胶体金试剂条(ICG)平行检测150份临床奶牛血清样本,结果与ICG的符合率为93.33%(140/150)。以结核菌素皮内试验(TST)为参考方法,检测了华中地区四个奶牛场的560头中国荷斯坦奶牛和90份进口奶牛结核阴性血清,结果iELISA与TST的总符合率为87.32%(489/560)。对其中22头奶牛进行鼻拭子分菌检验,4头分菌阳性奶牛的血清抗体检测也为阳性,iELISA与细菌培养的总符合率为77.27%(17/22)。以TST为参考方法,iELISA的敏感性和特异性分别为72.37%和89.67%。     

猪口蹄疫免疫抗体不同检测方法的对比试验

通过对92份猪血清样本分五组用两种方法进行FMD免疫抗体检测,采用正向间接血凝（IHA）方法的抗体合格率为54.3％,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法的抗体合格率为19.6％,两者差异极显著。在小样本情况下各组之间以及各组内部都出现了相同的情况。而采用两种检测方法同时合格的仅占14.1％,另有45.7％出现分离现象,说明两种检测方法不具有平行相关性。因此,必须选择一种可靠的、通用的啪免疫抗体检测方法来指导基层动物防疫免疫工作是一项急需的工作。     

猪瘟与附红细胞体混合感染的诊治

阐述了猪瘟与猪附红细胞体混合感染的临床症状、病理变化、诊断要点及采取的新的治疗药物及控制方法。对基层兽医防疫人员有一定的借鉴作用。     

黄芪、金银花提取物体外抗禽流感病毒的试验研究

选用黄芪、金银花作为抗病毒药物,利用细胞病变(CPE)抑制实验测出黄芪、金银花提取物单独使用及1:1联合使用在鸡胚成纤维细胞(CEF)上培养对禽流感病毒AIV(H9N2亚型)的最小直接杀灭浓度和最小阻断浓度.结果表明:黄芪、金银花提取物对CEF的无毒浓度分别为62.5mg/ml、31.25mg/ml.金银花提取物体外对AIV有抑制作用,其对AIV的直接杀灭浓度为7.81mg/ml;最小阻断浓度为3.90mg/ml;黄芪提取物单独使用对AIV的抑制作用不显著.金银花与黄芪提取物联合使用,其抑制作用增强,对AIV的直接杀灭浓度为0.98mg/ml,最小阻断浓度提高1.95mg/ml.     

基于结核菌素与CFP10／ESAT6的牛IFN-γ检测法在牛结核病诊断中的比较研究

本研究通过比较三种刺激物（牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核菌特异性抗原CFP10／ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景。无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液．肝素抗凝。每1mL全血与1mL RPMI1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL（20μg）PHA（阳性对照孔）、0．1mL（20μg PHA）CFP10／ESAT6融合蛋白、0．1mL（2000U）＆结核菌素（PPD／B）、0．1mL（2500u）禽结核菌素（PPD／A）或等量PBS（无刺激阴性对照）,37℃培养过夜。次日用夹心ELISA法检测各刺激组0．1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度。结果,特异性抗原CFP10／ESAT6刺激组与牛结核菌素（PPD／B）刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性．相关系数为0．84。但CFP10／ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应（以两刺激组IFN-γ浓度差值表示）间无相关性,相关系数为-0．11。分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应。以OD630=0．17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10／ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应（以OD值差值表示）检出14头,禽PPD阳性反应3头。扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0．54。结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高。当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时．应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛。而基于CFP10／ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆菌的影响,检测具有良好的特异性与敏感性。