美国国家家禽改良计划标准程序(2014版)——分子检查程序

1鸡毒支原体和滑液囊支原体聚合酶链式反应(PCR )的推荐实验室程序(a)DNA提取。通过非酚类程序从放置在磷酸缓冲盐溶液(PBS )中的气管拭子中取1毫升拭子液或1毫升肉汤培养物中提取DNA。以14000×g的速度对样品离心5~10分钟。弃去上清液并用1毫升PBS洗涤沉淀物。     

鸡毒支原体病及其防制措施

鸡毒支原体(MG)是引起鸡、火鸡及其他禽类慢性呼吸道病的主要病原微生物。可水平传播,也可垂直传播,对禽类有致病力的支原体有鸡毒支原体、滑膜支原体(MS)和火鸡支原体(MM)。鸡毒支原体主要感染鸡、火鸡,也感染其他禽类,引起呼吸道疾病     

美国国家家禽改良计划标准程序(2014版)—血液检测程序(1)

美国国家家禽改良计划(National Poultry Improvement Plan, NPIP)于20世纪30年代初建立,是一个由行业、各州和联邦共同合作计划。通过该计划,新的诊断技术可以有效地应用于改善美国的家禽和家禽产品。NPIP最初的目标是净化美国鸡群中由鸡白痢沙门氏菌引起的鸡白痢。该计划后来不断进行扩充和改进,包括了预防和控制家禽疾病的各种方案,涵盖了伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸡毒支原体、滑液支原体、支原体和禽流感。NPIP目前还包括商业家禽、火鸡、水禽、展览家禽、散养家禽和野禽。该计划的参与者都是自愿的,但种鸡场、孵化场和经销商必须首先取得"鸡白痢鸡伤寒无疫"资格才能参加其他计划。NPIP的技术和管理规定由行业成员和州、联邦官员共同制定,建立了家禽在NPIP所列疾病方面无疫的评估标准,要求对满足该计划特定疾病控制标准的州、养殖场、孵化场、经销商和屠宰场进行确认,并对禽群进行检测。《国家家禽改良计划标准程序》是NPIP实施中重要的程序文件,我们对其公开发布的2014版进行了翻译和整理,包括血液检测程序、细菌学检查程序、卫生程序和分子检查程序四个部分,供读者借鉴。     

山东地区发生呼吸道性疾病的肉鸡场鸡毒支原体的分离鉴定

为了解山东省发生呼吸道疾病的肉鸡场鸡毒支原体的感染情况,2013年至2014年从山东地区发生呼吸道疾病的商品肉鸡场采集发病鸡,记录其临床表现(发病特点、临床症状和病理变化),并进行鸡毒支原体分离鉴定。对符合鸡毒支原体培养特性的分离株通过PCR扩增和测序加以鉴定,共分离鉴定出36株鸡毒支原体。3~20日龄肉鸡采集23场,分离出3株鸡毒支原体,分离阳性的样品疑来自鸡毒支原体单纯感染的病例;21~40日龄肉鸡采集78场,分离出33株鸡毒支原体,分离阳性的样品均来自混合感染病例。     

鸡毒支原体的分离鉴定及药敏试验

从云南地区某疑似慢性呼吸道病(CRD)的鸡场分离到1株支原体菌株,经菌落形态观察、血清学鉴定,证明该分离株为鸡毒支原体(MG)。     

替米考星及其他抗菌药对鸡毒支原体的体外联合抑菌试验

鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是禽类最主要的病原菌之一,能引起鸡、火鸡及其它禽类的慢性呼吸道病(Chromic respiratory disease,CRD)和火鸡传染性窦炎,造成禽体生长受阻、产蛋率下降;而且鸡毒支原体还常与其它多种病原体混合感染,加重病禽发病率和死亡率,给养禽业造成极大的经济损失[1].     

1株鸡毒支原体的分离鉴定及体外敏感中药的筛选

本研究旨在对山东泰安地区鸡毒支原体的流行菌株进行分离培养及鉴定和纯化,并针对该分离株筛选体外敏感的中药,为后续进一步研究提供材料。采用液体培养法与固体培养法从病鸡组织样品中分离、培养和纯化鸡毒支原体,并通过瑞士染色和姬姆萨染色、血清学方法及分子生物学方法对分离株进行初步鉴定,在此基础上,采用微量稀释法测定8种中药对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）,从而筛选到对分离菌株敏感的中药。结果显示,分离菌株在鸡毒支原体液体培养基中增殖后,培养基颜色由红变黄且呈半透明状态,在固体培养基中培养后呈典型的"煎蛋"样儿菌落,均符合鸡毒支原体培养特性;瑞士染色和姬姆萨染色结果显示,菌体形态符合鸡毒支原体的特征;血清学鉴定结果显示,分离株与鸡毒支原体阳性血清发生凝集;分子生物学鉴定结果显示,所扩增的核酸序列与鸡毒支原体匹配度高达99%;MIC测定结果显示,中药黄连和黄柏对分离的鸡毒支原体的抑菌活性较强,属敏感范畴,其MIC分别为≤0.98和0.39 mg/mL,而中药金荞麦和鱼腥草对鸡毒支原体中度敏感,MIC均≥125 mg/mL,板蓝根、白鲜皮、当归、艾叶对鸡毒支原体均不敏感。综上所述,本研究成功分离到1株鸡毒支原体,并且筛选出4种对该菌株敏感的中药,分别为黄连、黄柏、金荞麦和鱼腥草,为后期进一步研究防治鸡毒支原体病的中药组方时提供参考依据。     

鸡毒支原体的分离培养和初步鉴定

从济南地区某疑似慢性呼吸道病(CRD)的鸡场分离到1株支原体菌株,经菌落形态观察、生化试验、血清学鉴定,证明该分离株为鸡毒支原体(MG)。     

美国家禽改良计划条文内容(连载四)

<正>(摘自美国《联邦规章典集》第九篇——动物和动物产品)第145部国家家禽改良计划——种禽(ⅱ)来源于鸡毒支原体净化的原种群父母代禽群,应随机抽取50%的个体作为一个样本,样本量最多200个,最低30个,按照145.14(b)中所述在4月龄之后或性成熟时进行鸡毒支原体检测:为维持此分级,禽群应遵守下列程序之一:(A)随机选择2%以上的个体,不少于30     

鸡毒支原体的分离与鉴定

从广东、四川及北京地区患有慢性呼吸道疾病的不同鸡场采集194份样本,接种FM-4培养基进行分离培养。对符合鸡毒支原体培养特性培养物采用PCR加以鉴定,结果培养鉴定出69株鸡毒支原体,其分离率为35.57%(69株/194株)。     

鸡毒支原体诊断方法研究进展

鸡毒支原体诊断方法研究进展郭建华＊陈德威（中国农业大学实验动物研究所，北京海淀１０００９４自从１９３３年Ｎｅｌｓｏｎ［１］首次观察到鸡毒支原体至今，人们对鸡毒支原体已有比较全面、系统的了解和认识。在此期间，鸡毒支原体的诊断方法也从原来的分离和鉴定，发...     

鸡毒支原体不同地区分离株对常用抗菌药物的敏感性试验

从广东、四川和北京等地疑似鸡毒支原体感染鸡中分离并利用种特异性基因（fMG-2）PCR方法鉴定了51株鸡毒支原体,并测定了这些分离株对常用抗菌药物的敏感性。结果表明,三个地区临床分离鸡毒支原体对泰乐菌素仍然保持较好的敏感性,可作为鸡毒支原体感染的首选药物。三个地区的鸡毒支原体对林可霉素和庆大霉素敏感性显著下降,广东、四川两地分离株对强力霉素也有明显耐受性,部分广东分离株对氟喹诺酮类药物敏感性显著下降。     

鸡毒支原体红霉素和替米考星耐药体外诱导及其23S rRNA基因V域突变特征分析

鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）是禽类主要病原菌之一，其感染引起鸡慢性呼吸道病（CRD）和火鸡传染性窦炎。目前预防鸡毒支原体感染仍主要依靠抗菌药物，但长期广泛应用抗菌药物造成鸡毒支原体耐药性不断发展。有调查表明，鸡毒支原体临床株对四环素类、大环内酯类及氟喹诺酮类等抗菌药物已产生了耐药性，造成药物疗效下降甚至失效。由于支原体分离培养困难，国内外对动物源支原体耐药性研究十分有限，至今未见有鸡毒支原体大环内酯类抗生素耐药机制的研究报道。本文以鸡毒支原体S6株为模式菌，研究红霉素和替米考星在体外诱导鸡毒支原体的耐药情况，并分析耐药菌株23S rRNA基因V域的耐药突变特征。     

混合感染中鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从冀南地区某养鸡场患呼吸道疾病的病鸡群采集5份样品（气管和眶下窦分泌物）中，同时分离到鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌两种病原体。通过病原的分离培养、细菌L型检验、生化试验、血清学试验等鉴定，证明分离的鸡毒支原体与国际标准株S6的血清型一致，副鸡嗜血杆菌的血清型为A型，动物试验表明，分离的鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌均具有明显的致病性，说明该病鸡群同时混合感染了鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌。     

潍坊地区鸡毒支原体的流行病学调查

为了解鸡群中鸡毒支原体的流行现状,对该病防控措施的制定及药物筛选提供科学依据,从潍坊地区76所肉鸡场的疑似病料进行鸡毒支原体分离。采用瑞氏-姬姆萨染色及PCR鉴定等方法,共鉴定出鸡毒支原体33株,分离阳性的病例多数在临床中都出现了明显的呼吸道症状,剖检时可见不同程度的大肠杆菌的混合感染,对支原体分离株进行测序,并进行了序列分析。结果表明,抑制杂菌的生长是鸡毒支原体分离成功的关键因素,流行病学数据证实鸡毒支原体感染目前在养鸡场中仍然非常普遍,混合感染的发生导致鸡群死亡率上升。     

美国国家家禽改良计划标准程序(2014版)——细菌学检查程序(1)

<正>1 对环境中肠炎沙门氏菌呈阳性的蛋鸡和肉鸡种群进行细菌学检查的实验室推荐程序环境监测后,从肠炎沙门氏菌阳性的蛋鸡和肉鸡种群中抽样进行细菌学检查,应按照本"方案标准"第2(a)节所述方法进行。2 对家禽进行沙门氏菌细菌学检查的实验室推荐程序(a)蛋鸡、肉鸡、火鸡、水禽、观赏用家禽和野禽。所有对鸡白痢-鸡伤寒试验有反应的禽类(至多     

二株禽支原体的分离与鉴定

本研究从广东某鸡场送检的患有呼吸道疾病的病鸡中取病料,进行了霉形体的分离与鉴定。通过培养特性、血清学特性和分子生物学鉴定,分离到2株支原体,一株为鸡毒支原体,命名为GX1;另一株为滑液囊支原体,命名为GX2。为今后支原体方面的研究工作奠定了基础。     

鸡传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、鸭源鸡杆菌混合感染病例的病原学诊断

为确诊贵州省六盘水市某养殖场蛋鸡群发病死亡的原因,采集病料进行新城疫病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体核酸检测,以及细菌分离培养、鉴定和药敏试验。结果:(1)鸡传染性喉气管炎PCR试验扩增出大小为537 bp目的基因条带,鸡毒支原体PCR试验扩增出大小为636 bp目的基因条带,呈阳性;其余病毒核酸检测均呈阴性。(2)分离菌在血液琼脂培养基上生长呈白色半透明状、可溶血的小菌落,经革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌,分子生物学鉴定为鸭源鸡杆菌;对硫酸安普霉素、氟本尼考、延胡索酸泰妙菌素高度敏感,对硫酸粘菌素、盐酸多西环素、替米考星中度敏感,对酒石酸泰乐菌素低度敏感,对盐酸大观霉素、盐酸林可霉素、磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林耐药。结论:确诊病例为鸡毒支原体、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭源鸡杆菌混合感染。     

四川地区鸡毒支原体的分离鉴定及血清学定型

在成都、重庆等１０个市、地、县，从患有慢性呼吸道疾病的鸡场采集１０８份样品，分离的２７个菌株，经Ｌ型细菌检验，理化特性鉴定，符合支原体的生物学特性。通过血清学鉴定（生长抑制试验），证实分离的支原体与鸡毒支原体国际代表株Ｓ６为同一血清型。人工复制试验结果，表明分离的鸡毒支原体ＳＭＧ－１和ＳＭＧ－２具有高致病性，感染鸡出现典型的慢性呼吸道病症状     

鸡毒支原体PCR检测方法的建立

根据已发表的鸡毒支原体种特异性序列fMG-2设计1对引物,建立检测鸡毒支原体的PCR方法.该法对鸡毒支原体能特异性扩增726 bp的目的片段,而对其他禽病原DNA模板的扩增结果为阴性.建立的PCR方法对鸡毒支原体的最少检出量为3 Pg.用建立的PCR方法对临床采集的样品进行检测,同时对相应的样品进行细菌分离,结果临床样品PCR的阳性检出率为20.5%,细菌分离培养的阳性率为0.9%,表明PCR的敏感性高于细菌分离鉴定.