猪伪狂犬病毒和猪细小病毒双重PCR方法的建立及初步应用

目的本研究旨在建立一种适用于临床样品和动物源性生物制品中猪伪狂犬病毒和猪细小病毒同时检测的双重PCR技术。方法针对猪伪狂犬病毒(PRV)的gE基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守区域分别设计引物。结果经条件优化后,所建立的双重PCR方法能特异性地检测出样品中的PRV(581bp)和PPV(202bp)。结论本方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,适用于临床样品中对PRV和PPV的同时检测,也可用于猪源性生物制品的检测。     

人工合成的脑心肌炎病毒VP1表位基因在大肠杆菌中的表达与抗原性测定

在分析脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位基础上人工合成一段含VP1抗原表位双链DNA序列（150bp），克隆于原核表达载体pGEX-6p-1，经酶切鉴定后转化大肠杆菌（E.coli）BL21感受态细胞，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达融合蛋白。经过GSTrap FF亲和层析柱获得纯化蛋白，经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量为30800。以该纯化蛋白免疫家兔，获得效价分别为1：25600和1：1600的抗血清。Western—blot结果显示该融合蛋白与经过空载体pGEX-6p-1表达的GST蛋白孵育的抗血清反应后有明显的特异性条带。结果表明：脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位区150bp编码基因在E.coli中获得正确表达，纯化后的蛋白具有抗原性。     

重组GP5AB蛋白间接ELISA检测PRRSV抗体方法的研究

利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。抗原最适包被浓度为2μg/mL,最佳封闭液为0.15%BSA,37℃封闭2 h后,再4℃封闭24 h,血清最适稀释度为1∶200,其作用时间为60m in,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为90 m in,37℃显色10 m in,S/P≥0.284为阳性,S/P≤0.26为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准。该抗原与猪其他4种临床症状类似的疾病的阳性血清反应呈阴性。批内和批间重复性试验结果,变异系数均小于7%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用本方法初步检测了一些疫苗免疫仔猪血清样品,并与重组N蛋白和PRRSV抗原同时进行比较,结果显示3种抗原检测的结果基本一致。     

动物疫病防控净化新型监测模式——现场快速诊断检测与远程监测云平台的构建与应用

当前,我国动物疫病防控领域实验室存在现场实时快速诊断技术落后、检测工作滞后、疫病监测数据不能实时共享分析、重大动物疫病预警不及时、应急处置协调复杂困难等问题。探索建立重大动物疫病远程实时监测预警大数据云平台等新型监测模式是当前动物疫病防控信息化的当务之急。本文介绍了目前动物疫病防控净化的新型监测模式——现场快速诊断检测与远程监测云平台的构建与实际应用情况。上述平台的构建与应用,在创新推动我国重大动物疫病净化工作的同时,重点解决了当前动物疫病防控净化过程中传统实验室检测效率较低、检测数据不能够互联互通等问题,为创新我国动物疫病防控净化新型监测模式提供了借鉴,同时也为我国动物疫病防控净化提供了强而有力的技术支撑。     

猪圆环病毒2型IgM抗体间接ELISA的建立

猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症的重要原发性病原,其感染的早期检测有助于及时采取防控措施。以重组衣壳蛋白(Cap蛋白)作为包被抗原,通过对反应条件的优化,建立了PCV2 IgM抗体间接ELISA,其最适抗原包被浓度为1.25 μg／mL,最适血清稀释度为1∶100,临界值为0.35。该检测方法与其他5种常见猪疫病阳性血清无交叉反应,特异性良好。批内、批间重复试验的变异系数均在2%~6%,重复性好。对100份临床样本的检测结果表明,该检测方法与国外同类试剂盒相比,敏感性为90.3%,特异性为92.8%,总符合率为92%。试验结果表明,所建立的PCV2 IgM间接ELISA特异性好和敏感性高,适用于PCV2感染早期的流行病学调查。     

美国国家家禽改良计划标准程序(2014版)——细菌学检查程序(1)

<正>1 对环境中肠炎沙门氏菌呈阳性的蛋鸡和肉鸡种群进行细菌学检查的实验室推荐程序环境监测后,从肠炎沙门氏菌阳性的蛋鸡和肉鸡种群中抽样进行细菌学检查,应按照本"方案标准"第2(a)节所述方法进行。2 对家禽进行沙门氏菌细菌学检查的实验室推荐程序(a)蛋鸡、肉鸡、火鸡、水禽、观赏用家禽和野禽。所有对鸡白痢-鸡伤寒试验有反应的禽类(至多     

美国国家家禽改良计划标准程序(2014版)——细菌学检查程序(2)

<正>4蛋壳大肠菌群的细菌学培养程序(细菌学检查程序1～3见本刊2019年3期)在采集和实验过程中避免样品污染环境,所采取的预防措施以及样品收集后的正确处理都是至关重要的。参与蛋壳培养的每位检验员都必须接受相关授权实验室提供的必要的卫生程序、抽样程序和样品处理方面的指导。国家官方机构将保留一份记录,表明该检验员已接收过必要的指导。(a)样品选择。每次采样时,从每个鸡群中随机抽取三个装有消毒鸡蛋鸡笼顶层的四十枚鸡蛋。(b)拭子处理程序。将拭子用授权实验室提供的无菌乳糖肉汤或其他适当的液体培养基润湿后,擦拭每枚鸡蛋大头直径为2.5厘米的圆形区域。每个拭子擦拭五个鸡蛋,每四个     

规模猪场猪瘟免疫失败调查及免疫程序优化

为调查规模猪场猪瘟的免疫效果,选取北京市3个规模猪场,每场随机抽取10头仔猪分别在25、60日龄和90日龄采血分离血清,检测猪瘟抗体.A、B、C3个猪场的母源抗体阳性率分别为100％,50％,0％;2次免疫后抗体阳性率分别为10％,90％,90％.由于猪场A猪瘟免疫失败,对其免疫程序进行了优化,将首免时间推迟至50日龄.优化免疫程序后2次免疫后抗体阳性率达到70％.结果表明,母源抗体阳性率直接影响猪瘟疫苗对仔猪的免疫效果,仔猪母源抗体降至50％左右进行猪瘟免疫可取得比较理想的结果.本研究为规模猪场结合仔猪母源抗体水平制定合理猪瘟免疫方案提供了较好的参考.     

鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂的比较与评估

对市面上现有鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体平板凝集检测试剂及其不同批次,微量凝集检测试剂和ELISA共4种检测试剂进行比较与评估。用4种试剂以及试剂A的不同批次检测来自11个种鸡场的1 650份血清,计算不同试剂检测种鸡场的抗体阳性率,2种试剂之间的阳性符合率、阴性符合率和总符合率,并以Kappa检验判断不同检测方法及其试剂之间的一致性程度。平板凝集试剂A的不同批次间以及平板凝集试剂A和B之间具有高度一致性(Kappa系数=0.714~0.746),但阳性符合率不足80%。平板凝集试剂A、微量凝集试剂C、ELISA试剂D之间仅具有中度或弱一致性(Kappa系数=0.392~0.542)。不同鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂间存在差异,平板凝集试剂不同批次间也存在差异,提示试剂生产厂家应加强质量控制,同时研发敏感性、特异性、稳定性更好的替代试剂,而种鸡场在进行抗体监测时应固定使用1种检测试剂,避免影响检测结果的准确性和连续性。