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鸡毒支原体黏附蛋白PvpA的原核表达与纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
利用基因重组技术将PvpA基因的PCR扩增产物与原核表达栽体pET-41a(+)连接,转化入DH5a感受态细胞,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入大肠杆菌BL21(D3)受体菌,用IPTG诱导蛋白表达.用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备PvpA蛋白多克隆抗血清,并用Western blotting检验抗体特异性.结果表明,本研究成功获得PvpA纯化蛋白,在免疫印迹试验中,兔抗PvpA高免血清能与目的蛋白发生阳性反应,证实表达产物为特异性蛋白. 相似文献
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为建立鸡毒支原体(MG)种特异性检测的间接ELISA检测方法,本研究以原核表达的PvpA蛋白作为包被抗原,初步建立了检测MG抗体的间接ELISA检测方法.特异性试验结果表明,重组PvpA蛋白与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、滑液支原体、大肠杆菌“O”抗原、禽沙门氏茵“O”抗原阳性血清均不发生交叉反应.该方法的批内变异系数小于8%,批间变异系数小于11%,表明具有较好的重复性.采用该检测方法与进口试剂盒对不同省份送检的鸡血清进行检测比较,两者阳性和阴性符合率均达到90%以上.本研究建立的间接ELISA检测方法为MG抗体检测试剂盒的研制奠定了基础. 相似文献
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按常规方法提取了鸡毒霉形体参考株S6-10、疫苗株F14-8及在氟喹诺酮类药物压力下筛选出来的耐药株的基因组DNA,扩增了各菌株DNA旋转酶gyrA基因片段,并进行了克隆、测序,利用DNAsis软件对测序结果进行分析。结果表明,S6-10和F14-8在恩诺沙星或环丙沙星压力下均筛选出不同程度的耐药茵,而且恩诺沙星致鸡毒霉形体发生耐药性突变的几率高于环丙沙星,S6-10株耐药突变频率高于F14-8;S6-10筛选出来的耐药菌株发生突变的位置在DNA旋转酶GyrA亚基的第83位(相对于大肠埃希氏茵GyrA亚基中的位置,以下同)和第87位上,取代模式分别为Ser→Ile、Glu→Gln,另外1株高水平耐药株(Se10,MIC≥128)在第103位也发生了氨基酸取代(Ile→Val);F14-8筛选出来的耐药菌株只在DNA旋转酶GyrA亚基的第87位发生了突变(Glu→Gly/Gln)。 相似文献
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旨在调查和分析广东省养禽场肠球菌的亚型屎肠球菌和粪肠球菌耐药性及其毒力因子流行分布特征,为控制禽源肠球菌耐药性传播、保障公共卫生安全提供理论依据。作者于2018年从广东省4个养禽场采集肠道样品493份,进行屎肠球菌和粪肠球菌的分离鉴定;采用琼脂二倍稀释法测定肠球菌的最小抑菌浓度(MIC);PCR方法检测肠球菌的耐药基因和毒力基因。结果显示:1)共分离到125株肠球菌,其中粪肠球菌84株(鸡源66株,鸭源18株);屎肠球菌41株,均来自鸡肠道样本。2)菌株对四环素、多西环素、红霉素几乎全部耐药,对氟苯尼考和氯霉素的耐药率高达89.60%和74.40%。屎肠球菌耐药率普遍高于粪肠球菌,而粪肠球菌对环丙沙星和利奈唑胺的耐药率高于屎肠球菌;鸭源粪肠球菌对利奈唑胺的耐药率(94%)显著高于鸡源粪肠球菌(39.4%),屎肠球菌对利奈唑胺均敏感。从鸡分离的1株粪肠球菌对万古霉素耐药。3)耐药基因在屎肠球菌中的检出率高于粪肠球菌,鸭源分离株检出率高于鸡源。耐药基因tetL、fexA、ermB最为流行,检出率均高于90%。其次是optrA基因,检出率为73.60%,poxtA和fexB的检出率均低于20%。在3株鸭源粪肠球菌中检测出cfr基因。4)已检测的毒力基因中efaA的携带率最高,为63.04%(58/92),其他依次为gelE(54.35%,50/92)、ace(47.83%,44/92)、asa1(44.57%,41/92)。对环丙沙星及高浓度氨基糖苷类耐药的菌株及携带cfr基因的菌株,大多携带agg、asal、gelE或ace。本研究显示养殖场禽源肠球菌耐药严重,鸭源肠球菌对利奈唑胺耐药率高,耐药基因和毒力基因流行且多样,且检测出人医临床重要抗生素耐药基因,应加强对养禽场肠球菌耐药性监测。 相似文献
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沙拉沙星对实验性感染猪链球菌病及大肠杆菌病的药效学 总被引:6,自引:1,他引:5
为兽医临床合理应用沙拉星(Sarafloxacin)提供理论依据,就其对实验性感染猪链球菌 病及大肠杆菌病的药效学进行了研究。以试管2倍稀释法测得沙拉沙星对兰氏C群类马链球菌(C55120)和猪大肠杆菌(O55)的最小抑菌浓度(MIC)分别是0.8mg/L及0.05mg/L。肌注给药对猪链球菌病和大肠杆菌病的试验性治疗结果不明,低、中 高剂量沙拉沙星组2.5、5、10mg/kg)及环丙沙星组(5mg/kg)用药5d(每隔12 相似文献
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为研究大肠杆菌(E.coli)分离株ED28的acrR基因中777bp插入片段对外排泵AcrAB表达水平及多重耐药性的影响,本研究将野生型acrR通过互补实验导入ED28中得到C-ED28。通过药物的最低抑菌浓度(MIC)测定、有机溶剂耐受性试验和实时定量PCR(qPCR)等方法检测菌株中AcrAB外排泵的活性。通过PCR方法检测ED28和C-ED28喹诺酮耐药决定区(QRDR)的氨基酸突变及携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。结果显示,临床分离菌株ED28对12种抗生素呈多重耐药表型,而互补菌株C-ED28恢复了对多种药物的敏感性。当能量抑制剂(CCCP)存在时,喹诺酮类和β-内酰胺类药物对ED28的MIC普遍降低,而对C-ED28的MIC保持不变。ED28对染料溴化乙锭(EB)的MIC为512μg/mL,对正己烷和环己烷耐受;而C-ED28对染料EB的敏感性增强,MIC为16μg/mL,对正己烷耐受,对环己烷不耐受。qPCR结果显示,基因acrA和acrB在C-ED28中的表达水平低于亲本菌株ED28,而基因marA在C-ED28中的表达水平高于ED28。靶位突变检测和耐药基因检测结果显示,ED28存在gyrA(Ser83Leu和Asp87Asn)和parC(Ser80Ile)双突变,携带aac(6’)-Ib-cr、blaCTX-M-27和blaTEM-13个质粒编码耐药基因;而C-ED28仅存在gyrA(Asp87Asn)一个突变位点,并丢失aac(6’)-Ib-cr、blaTEM-1两个基因。 相似文献