禽腺病毒血清4型贵州株全基因序列分析

为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因组,获得FAdV-4贵州株的全基因序列,并对其进行序列和遗传进化分析。结果显示,通过PCR分段扩增成功获得了2株FAdV-4贵州株(GZ-BJ株和GZ-QL株)的全基因序列,长度分别为43352、43723 bp,FAdV-4 GZ-BJ株全基因序列长度比FAdV-4 GZ-QL株短371 bp,少6个ORF(22K、putative 9.1 ku、u-exon、ORF17、ORF28、ORF42),二者的氨基酸同源性为57.1%。2株FAdV-4贵州株同国内外不同地区FAdV-4毒株核苷酸同源性在88.7%~100%,与FAdV-4经典毒株ON1比对,2株FAdV-4贵州株和国内FAdV-4分离株均缺失ORF19、ORF27、ORF30。系统进化树分析显示,2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株仍属于Ⅰ群C种FAdV。研究结果表明,2株贵州株FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4 GZ-QL株较国内外FAdV-4毒株均存在进化与突变,且FAdV-4 GZ-BJ株变化较大,但尚未改变其血清型,这为探索FAdV-4致病机理的分子机制研究提供依据。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染病例的病原学诊断

为确诊贵州省都匀市某养殖场的猪死亡病因,采集病死猪病料进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型核酸检测,细菌分离鉴定及药物敏感试验。结果:猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量RT-PCR检测和猪圆环病毒2型PCR检测核酸均为阳性,其余病毒核酸检测均为阴性。细菌分离培养表明存在细菌感染,分子生物学鉴定为奇异变形杆菌;分离菌对硫酸安普霉素、硫酸粘菌素、盐酸大观霉素+盐酸林可霉素、氟苯尼考较敏感,对多种药物产生耐药。结论:确诊病例为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染。     

鸡传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、鸭源鸡杆菌混合感染病例的病原学诊断

为确诊贵州省六盘水市某养殖场蛋鸡群发病死亡的原因,采集病料进行新城疫病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体核酸检测,以及细菌分离培养、鉴定和药敏试验。结果:(1)鸡传染性喉气管炎PCR试验扩增出大小为537 bp目的基因条带,鸡毒支原体PCR试验扩增出大小为636 bp目的基因条带,呈阳性;其余病毒核酸检测均呈阴性。(2)分离菌在血液琼脂培养基上生长呈白色半透明状、可溶血的小菌落,经革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌,分子生物学鉴定为鸭源鸡杆菌;对硫酸安普霉素、氟本尼考、延胡索酸泰妙菌素高度敏感,对硫酸粘菌素、盐酸多西环素、替米考星中度敏感,对酒石酸泰乐菌素低度敏感,对盐酸大观霉素、盐酸林可霉素、磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林耐药。结论:确诊病例为鸡毒支原体、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭源鸡杆菌混合感染。     

禽腺病毒4型Penton和Fiber1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

为开展禽腺病毒4型(FAdV-4)五邻体蛋白(Penton)和纤丝蛋白(Fiber1)多克隆抗体的制备及评价,研究通过对Penton和Fiber1基因优势抗原表位基因片段进行生物信息学分析,设计特异性引物PCR扩增获得Penton和Fiber1优势抗原表位基因片段,将其克隆至原核表达载体pColdⅠ,转入表达宿主菌BL21(DE3)进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,将纯化、鉴定后的目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,对抗体进行Western blot鉴定及间接ELISA抗体效价测定。结果可见,FAdV-4 Penton基因序列共编码525个氨基酸,Fiber1基因序列共编码432个氨基酸,其优势抗原表位点分别有7、6个区域,且均集中于N端;成功构建pColdⅠ-P和pColdⅠ-F1重组原核表达质粒,其诱导表达的重组蛋白Penton和Fiber1均与His标签单抗发生特异性反应,动物免疫获得的Penton、Fiber1多克隆抗体均能与目的蛋白反应形成特异性条带,且Penton多克隆抗体效价高于Fiber1多克隆抗体。综上,研究获得的纯化重组蛋白Penton较Fiber...     

猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪附红细胞体混合感染病例的实验室诊断

为确诊贵州省兴义市某养殖场生猪的发病原因,分别采集病死猪组织样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒核酸检测,以及病猪耳静脉血进行血液原虫检查。结果:(1)实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒核酸和PCR检测猪圆环病毒2型核酸均为阳性。其余病毒核酸检测均为阴性。(2)血涂片姬姆萨染色观察发现红细胞变形,呈齿轮状、星芒状等形态,为附红细胞体感染典型特征。结论:确诊病例为猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪附红细胞体混合感染。     

一例鸡葡萄球菌病的病原学鉴别诊断

为查明某生态鸡养殖场鸡群出现死亡的原因,进行现场调查、临床症状观察、病理解剖和实验室病原学鉴别诊断.结果:鸡群发病率为8.2%,病死率为81.2%;主要症状和病理变化为呼吸道症状、下痢、消化道出血、关节肿大等;禽流感病毒、新城疫病毒、滑液囊支原体和鸡毒支原体核酸检测均为阴性;细菌分离培养鉴定显示为葡萄球菌感染;药物敏感实验显示分离菌对磺胺间甲氧嘧啶、硫酸粘菌素、硫酸安普霉素、泰妙菌素、替米考星、多西环素较敏感.     

一例鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定

为确诊某养鸡场发病的原因,采集临床病死鸡的肝脏、脾脏进行细菌分离培养,并通过细菌形态学观察、生化试验、分子生物学鉴定和药物敏感性试验.结果:分离细菌为革兰氏阴性杆菌,菌落形态和生化鉴定特征与大肠杆菌相符;16S rDNA PCR扩增及基因同源性分析确定为大肠杆菌;菌株对安普霉素、泰妙菌素、多西环素、硫酸粘菌素较敏感,对替米考星、泰万菌素、磺胺间甲氧嘧啶、泰乐菌素、阿莫西林存在耐药性.     

一例鸡马立克氏病的病原学诊断

为确诊贵州省福泉市某养殖场鸡群死亡病因,采集病鸡的组织病料进行细菌分离培养,同时采用普通PCR和荧光定量PCR方法对组织病料进行相关病原核酸检测。结果:病鸡组织中未分离出细菌;病原核酸检测显示,马立克氏病病毒阳性,新城疫病毒、禽流感病毒、鸡滑液囊支原体均呈阴性。结论:确诊病例为马立克氏病病毒感染。     

一例牛病毒性腹泻病毒与大肠杆菌混合感染的实验室诊断

为查明贵阳市某养牛场犊牛发病死亡的病因,采集2头病死犊牛的病料进行细菌分离培养鉴定、药敏试验,以及牛支原体、病毒性腹泻病毒核酸检测。结果:分离细菌为革兰氏阴性短杆菌,16S rDNA测序分析鉴定为大肠杆菌,药敏试验显示其对硫酸安普霉素、硫酸粘菌素高度敏感;牛病毒性腹泻病毒核酸检测为阳性,牛支原体核酸检测为阴性。结论:诊断病例为牛病毒性腹泻病毒与大肠杆菌混合感染。     

牛支原体与附红细胞体混合感染病例的实验室诊断

为查明贵州省安顺市某养殖场牛群发病死亡的原因,采集病料进行支原体核酸检测、血液原虫检查以及细菌分离培养。结果:肺脏样品PCR扩增出351 bp的牛支原体目的基因条带,血液样品姬姆萨染色镜检观察到大量附红细胞体,未分离培养出细菌。结论:根据病牛临床症状、病理变化和实验室检测结果,确诊为牛支原体与附红细胞体混合感染。