山东省白羽肉鸡中MDV、REV、CAV和ARV感染状况的病原学调查

为了解鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病毒(CAV)、禽网状内皮增生病病毒(REV)和禽呼肠孤病毒(ARV)在山东省白羽肉用型鸡中的流行情况,试验采用地高辛标记的核酸探针-斑点杂交法对淘汰的商品肉鸡、病死商品肉鸡及淘汰肉种鸡进行了上述4种病毒病原的检测。结果表明:ARV主要以单一形式感染,在病死商品肉鸡中感染率最高(30.07%),在3种类型鸡中ARV感染率高于MDV,REV,CAV。MDV在淘汰肉种鸡中感染率(12.82%)高于其他2种鸡群,而REV,CAV,ARV感染率在病死商品肉鸡中最高。混合感染亦相当普遍,以淘汰肉种鸡最高(混合感染率达10.25%),高于任一病毒单独感染率,其次为病死商品肉鸡。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。     

肉种鸡肿瘤病料中MDV、REV和CAV共感染的检测

从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区肉种鸡群采集102份有肿瘤病变的病、死鸡肝脏样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)、网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)、鸡传染性贫血病病毒(chicken anemia virus,CAV)检测.结果显示,MDV、REV、CAV的检出率分别为88.24%、79.41%、47.06%,且存在严重的共感染现象,三重感染检出率达30.39%;二重感染检出率为59.80%,以MDV和REV共感染检出率最高,为44.12%;单一感染和阴性个体仅占3.92%和1.96%.结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前肿瘤性疾病发病率日趋上升的重要流行病学因素之一.     

免疫抑制鸡群鸡传染性贫血病毒和网状内皮增生症病毒共感染检测

分别用digoxigenin标记的鸡传染性贫血病毒（CAV)和禽网状内皮增生症病毒（REV）核酸探针以及PCR技术对某种鸡场进行检测，检测结果表明，在20个样品中，CAV和REV感染的阳性率分别为10％和5％，这一结果显示，CAV和REV感染是导致该鸡场发生免疫抑制的主要病因之一。     

鸡群中免疫抑制性病毒的共感染及其相互作用——对新城疫和禽流感疫苗免疫反应的抑制作用

在鸡场中对NDV和高致病性禽流感疫苗的免疫失败时而发生,由不同免疫抑制性病毒亚临床感染造成的免疫抑制很可能是引起这种免疫失败的流行病学因素。我们的研究表明,在这些亚临床感染中,网状内皮增生病病毒(REV)是最强的免疫抑制性病毒。在中国鸡群中REV感染非常普遍,而且经常是以与其它病毒共感染的形式存在,如马立克氏病病毒(MDV)、传染性贫血病病毒(CAV)、J亚群白血病病毒(ALV-J)等。动物试验表明,REV的早期感染可显著抑制NDV,H5-和H9-AIV疫苗的抗体反应。而且,这种免疫抑制作用至少可持续4个半月。REV与ALV-J、MDV和CAV的共感染又能进一步增强这种免疫抑制作用。由免疫抑制性病毒亚临床感染造成的免疫抑制有可能造成不完全免疫抑制的个体,进而成为鸡群中被NDV和AIV进一步感染的靶动物和传染源。鸡群的免疫抑制状态还将有助于NDV和AIV在鸡场中持续循环和变异。     

我国白羽肉用型鸡群中CAV、REV和REOV感染状况的血清学调查

为了解鸡传染性贫血病毒（CAV）、禽网状内皮增生病病毒（REV）和呼肠孤病毒（REOV）在我国白羽肉用型鸡中的感染状态，在2003—2004年，检测了来自5省市8个公司不同年龄鸡群血清样品中3种病毒抗体的存在状况。结果表明，在送检的75个鸡群中，对CAV、REV和REOV呈现抗体阳性的鸡群分别有64个（85．3％）、36个（48％）和74个（96％）。在总共检测的1764份血清样品中，对这3种病毒的平均抗体阳性率分别为51．4％、9．8％和75．1％。在1日龄雏鸡，对CAV和REOV的平均母源抗体阳性率可达100％和81．1％，但对REV只有7．4％。抗体阳性率随年龄变化的动态分析表明，对REV和REOV的母源抗体在出壳后2～3周内消失，而对CAV的母源抗体则可持续3～4周。对CAV和REOV的抗体从5周龄起再次出现，到20周龄时，所有送检鸡群全部阳性，平均阳性率在90％以上。有近一半送检鸡群对REV呈现抗体阳性，抗体阳性率普遍较低，即使在达到开产年龄后，仍还有很高比例鸡为抗体阴性，即对REV仍为易感鸡。研究表明，我国多数鸡群中都同时存在着这3种病毒的感染，但它们在感染的程度和动态等流行病学特点上显著不同，应根据鸡群中抗体的阳性率分别采取不同的措施。     

商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV多重感染的检测

从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区自然发病和临床健康AA商品肉鸡群中分别采集脏器样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus,CAV）和禽呼肠孤病毒（Avian reoviruses,ARV）检测。结果显示,自然发病AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV的检出率均较高,分别为69．30％、57．46％、63．60％和67．11％;临床健康AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV的检出率分别为36．96％、43．48％和30．42％,且自然发病和健康鸡群中均存在不同病毒组合的多重感染,感染率分别为85．96％和43．46％。用x2检验进行分析发现,自然发病商品肉鸡群与临床健康商品肉鸡群中MDV、CAV、MDV＋REV、REV＋CAV的检出率和未检出的比例差异极显著（P〈0．01）;REV、MDV＋CAV检出率差异显著（P〈0．05）。对自然发病商品肉鸡的肝脏、脾脏、法氏囊中4种病毒检出率进行X2检验分析发现,MDV在脾脏中检出率显著高于肝脏和法氏囊;REV在法氏囊中检出率显著高于肝脏和脾脏,而CAV和ARV分别在脾脏和肝脏中检出率较高。结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前AA商品肉鸡易发病且生长缓慢的重要流行病学因素之一。     

我国自然发病鸡中MDV、REV和CAV共感染的检测

从山东、河南、河北、北京、江苏、广东、广西、四川、吉林、辽宁、台湾11省42个不同鸡群收集临床有发病表现的828只病、死鸡的病理组织样品，用点杂交方法检测各个样品中马立克氏病病（Marek’s disease virus，MDV）、网状内皮细胞增生病病毒（Reticuloendotheliosis virus，KEV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus，CAV）的感染情况。结果表明：828只病鸡中这3种病毒的检出率均相当高，分别为83．94％（MDV）、61．0％（CAV）和57．25％（REV），并且存在非常严重的双重感染（31．16％）和三重感染（44．69％），     

2016年鲁北地区鸡群病毒性肿瘤病例的检测分析

为了解鸡马立克病病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)和禽网状内皮组织增生症病毒(REV)在鲁北地区鸡群中的感染情况,对来自21个鸡群的送检病例进行了病原核酸的PCR检测.结果显示,MDV阳性率为28.5%,ALV-J阳性率为23.8%,REV阳性率为14.3%,肿瘤病毒的二重感染率为28.6%.结果表明,3种肿瘤病毒在鲁北地区蛋鸡和地方品种鸡群中的感染严重,病毒的混合感染较多.因此,做好MD的疫苗防护,对ALV-J及REV的感染状况要进行定期检测,控制好养殖环境,尽量避免3种肿瘤病毒的继发感染.     

芦花鸡REV与MDV混合感染的诊断分析

从山东某鸡场收集临床有发病表现的发病鸡只,采取新鲜组织样品,分离DNA,做PCR检测.用细胞培养和间接荧光抗体试验的方法从这些病料中同时分离到了禽网状内皮组织增生病病毒(REV)和马立克氏病病毒(MDV),通过组织病理学检查的方法表明该鸡场的疫病为REV和MDV共感染引起的肿瘤病.     

山东省肉种鸡群三种家禽肿瘤性疾病流行病学调查

为调查山东省家禽肿瘤性疾病的流行情况,本研究以血清学、病理组织学、免疫组织化学、病原学等检测手段,在山东省境内17家AA种鸡场进行检测.血清学试验结果显示:马立克氏病病毒(MDV)平均抗原阳性率为1.87%;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)和网状内皮组织增生症病毒(REV)平均抗体阳性率分别为9.52%和39.78%;双重及三重感染,MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV及MDV+ALV-J+REV感染率分别为1.12%、1.21%、3.92%和0.65%.对57羽疑似肿瘤病的病鸡检测显示:MDV、ALV-J和REV的抗体阳性率分别为19.3%、47.37%和57.89%;MDV+ALV-J、MDV+REV和ALV-J+REV的双阳性率分别为1.75%、3.5%和19.3%;无三重感染.病理组织学观察显示:病鸡体内既有各病毒引起的单纯肿瘤,也有双重肿瘤共存的现象.免疫组织化学检测显示,MDV、ALV-J和REV抗原阳性信号在病鸡中的比例分别为38.6%、54.39%和28.07%.PCR检测结果表明:MDV、ALV-J和REV的阳性率分别为43.86%、64.91%和33.33%;MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV和MDV+ALV-J+REV阳性率分别为15.79%、10.53%、12.28%和7.02%.本研究结果表明,山东省境内AA肉鸡群中仍存在较高的肿瘤性病毒感染率.     

禽网状内皮组织增生病病毒和马立克氏病病毒共感染对鸡的致肿瘤作用

用禽网状内皮组织增生病病毒(REV)和马立克氏病病毒(MDV)共感染肉鸡，研究这2种病毒对鸡的致瘤作用，结果表明肉鸡共感染MDV和REV后13d即可发生死亡．接种后100d死亡率达84％。死亡鸡的肝脏、脾脏、肾脏和心脏等可以形成2种外观明显不同的散在的大肿瘤结节和弥漫性的小肿瘤结节。取发病鸡的肝脏、脾脏、肾脏、心脏和腺胃等组织样品做连续石蜡切片，HE染色后发现这些脏器均存在2种不同类型的肿瘤细胞增生。对这些连续切片分别用MDV和REV的单克隆抗体进行间接荧光试验，则同1份样品存在可以与REV和MDV分别呈现阳性反应的肿瘤细胞团，结果表明REV和MDV可以在感染鸡的体内分别诱发形成肿瘤。在接种后14、21、28和42d随机采集3只鸡的全血分离MDV和REV，均可以同时分离到MDV和REV。表明REV和MDV的共感染延长了病毒血症的时间。     

商品代肉鸡群中禽网状内皮组织增生病病毒和马立克氏病病毒的混合感染

山东兖州某商品代肉鸡场的 2 0日龄肉鸡开始出现大批死亡 ,剖检发现肝脏、脾脏、肾脏和心脏等主要脏器均出现大小不等的肿瘤结节 ,采用细胞培养和间接荧光抗体试验的方法从这些病料中同时分离到了禽网状内皮组织增生病病毒 (REV)和马立克氏病病毒 (MDV) ,通过组织病理学检查和斑点杂交的方法表明该鸡场的疫病为REV和MDV共感染引起的肿瘤病。这是国内从商品代肉鸡中同时分离到REV和MDV的首次报道     

CAV与REV共感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用

用1日龄SPF鸡人工感染鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV),探讨病毒感染对鸡体疫苗免疫反应的影响。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV与REV单独感染均显著抑制了鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。CAV单独感染后鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应受到抑制,但与对照组在统计学上的差异不显著,然而,CAV可以显著加重REV感染对鸡体在NDV和IBDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。从而证实CAV与REV共感染在疫苗免疫抑制上有协同作用。     

发酵床连续养殖对白羽肉鸡病毒感染状态影响的分析

发酵床连续养殖是环保,节能的养殖技术,但它是否对疫病控制有不良影响,则是需关注的另一方向。采集同一地区不同养殖方式的白羽肉鸡样品,采用斑点杂交技术和抗体检测技术检测,试验结果表明,两种养殖方式在马立克氏病病毒(MDV)、网状内皮细胞增生病病毒(REV)检测结果上没有差别;在禽贫血病病毒(CAV)检测上抗体差异明显:发酵床养殖阳性率为28%,普通网上养殖阳性率为86%;NDV HI抗体滴度差异极显著(P<0.01)。综合评价发酵床连续养殖可有效控制疫病的感染。     

核酸探针检测山东省鸡群中马立克病毒、传染性贫血病毒、网状内皮增生病病毒和呼肠孤病毒的流行状况

为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒（Marek’s disease virus, MDV）、传染性贫血病毒（chicken anemia virus,CAV）、网状内皮增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和呼肠孤病毒（reovirus,REOV）的感染情况。结果发现,MDV、CAV、REV、REOV的感染率分别为5.17%、8.17%、1.17%、2.5%,检出率较以前的研究报道有降低趋势,有多种双重感染和三重感染,表明山东家禽业在免疫抑制病方面总体控制较好,但不同的养殖场发病情况差异极显著,管理水平参差不齐,个别地区发病情况严重,检出率超过其他地区的总和。     

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV（A、B亚群）抗体检测。在572份血清样品中,除了一个8．1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13．3％和75％外,其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫,抗体阳性率均为100％。在212份血清样品中,REV抗体阳性率在16．7％～62．5％之间;ALV（A、B亚群）抗体阳性率在0％～75％之间。本研究结果表明,所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。     

鸡传染性贫血病毒套式PCR检测方法的建立

本试验根据GenBank中登录的禽传染性贫血病毒(CAV)基因序列,设计合成2对引物,外引物的扩增片段大小为485 bp,内引物的扩增片段大小为297 bp,建立了适合CAV快速检测的套式PCR方法(nested PCR),并采用该方法对CAV阳性毒株及临床病料进行了检测。结果显示,该方法能扩增到297 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽网状内皮增生病病毒、减蛋综合征病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1步扩增的敏感性是100 pg,第2步PCR扩增的敏感性是1 fg,敏感性提高了10⁵倍。本研究建立的CAV套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于CAV的临床诊断和分子流行病学调查等。