用斑点杂交法同时检测鸡群中的CAV MDV和REV

为研究鸡传染性贫血病毒(CAV)在鸡群中的感染状况以及马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮细胞增生病病毒(REV)在鸡群中的发病率，用斑点杂交法对山东省4个肉鸡场和2个肉种鸡场进行CAV、MDV和REV的检测，结果表明除一个肉种鸡场没有检测出REV以外，其他鸡场均同时检测出CAV、MDV和REV，并且发现直接从病科中检测CAV的阳性率(20％)远远低于将病科接种SPF鸡胚后的检出率(80％)。     

我国白羽肉用型鸡群中CAV、REV和REOV感染状况的血清学调查

为了解鸡传染性贫血病毒（CAV）、禽网状内皮增生病病毒（REV）和呼肠孤病毒（REOV）在我国白羽肉用型鸡中的感染状态，在2003—2004年，检测了来自5省市8个公司不同年龄鸡群血清样品中3种病毒抗体的存在状况。结果表明，在送检的75个鸡群中，对CAV、REV和REOV呈现抗体阳性的鸡群分别有64个（85．3％）、36个（48％）和74个（96％）。在总共检测的1764份血清样品中，对这3种病毒的平均抗体阳性率分别为51．4％、9．8％和75．1％。在1日龄雏鸡，对CAV和REOV的平均母源抗体阳性率可达100％和81．1％，但对REV只有7．4％。抗体阳性率随年龄变化的动态分析表明，对REV和REOV的母源抗体在出壳后2～3周内消失，而对CAV的母源抗体则可持续3～4周。对CAV和REOV的抗体从5周龄起再次出现，到20周龄时，所有送检鸡群全部阳性，平均阳性率在90％以上。有近一半送检鸡群对REV呈现抗体阳性，抗体阳性率普遍较低，即使在达到开产年龄后，仍还有很高比例鸡为抗体阴性，即对REV仍为易感鸡。研究表明，我国多数鸡群中都同时存在着这3种病毒的感染，但它们在感染的程度和动态等流行病学特点上显著不同，应根据鸡群中抗体的阳性率分别采取不同的措施。     

鸡群中免疫抑制性病毒的共感染及其相互作用——对新城疫和禽流感疫苗免疫反应的抑制作用

在鸡场中对NDV和高致病性禽流感疫苗的免疫失败时而发生,由不同免疫抑制性病毒亚临床感染造成的免疫抑制很可能是引起这种免疫失败的流行病学因素。我们的研究表明,在这些亚临床感染中,网状内皮增生病病毒(REV)是最强的免疫抑制性病毒。在中国鸡群中REV感染非常普遍,而且经常是以与其它病毒共感染的形式存在,如马立克氏病病毒(MDV)、传染性贫血病病毒(CAV)、J亚群白血病病毒(ALV-J)等。动物试验表明,REV的早期感染可显著抑制NDV,H5-和H9-AIV疫苗的抗体反应。而且,这种免疫抑制作用至少可持续4个半月。REV与ALV-J、MDV和CAV的共感染又能进一步增强这种免疫抑制作用。由免疫抑制性病毒亚临床感染造成的免疫抑制有可能造成不完全免疫抑制的个体,进而成为鸡群中被NDV和AIV进一步感染的靶动物和传染源。鸡群的免疫抑制状态还将有助于NDV和AIV在鸡场中持续循环和变异。     

商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV多重感染的检测

从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区自然发病和临床健康AA商品肉鸡群中分别采集脏器样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus,CAV）和禽呼肠孤病毒（Avian reoviruses,ARV）检测。结果显示,自然发病AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV的检出率均较高,分别为69．30％、57．46％、63．60％和67．11％;临床健康AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV的检出率分别为36．96％、43．48％和30．42％,且自然发病和健康鸡群中均存在不同病毒组合的多重感染,感染率分别为85．96％和43．46％。用x2检验进行分析发现,自然发病商品肉鸡群与临床健康商品肉鸡群中MDV、CAV、MDV＋REV、REV＋CAV的检出率和未检出的比例差异极显著（P〈0．01）;REV、MDV＋CAV检出率差异显著（P〈0．05）。对自然发病商品肉鸡的肝脏、脾脏、法氏囊中4种病毒检出率进行X2检验分析发现,MDV在脾脏中检出率显著高于肝脏和法氏囊;REV在法氏囊中检出率显著高于肝脏和脾脏,而CAV和ARV分别在脾脏和肝脏中检出率较高。结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前AA商品肉鸡易发病且生长缓慢的重要流行病学因素之一。     

核酸探针检测山东省鸡群中马立克病毒、传染性贫血病毒、网状内皮增生病病毒和呼肠孤病毒的流行状况

为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒（Marek’s disease virus, MDV）、传染性贫血病毒（chicken anemia virus,CAV）、网状内皮增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和呼肠孤病毒（reovirus,REOV）的感染情况。结果发现,MDV、CAV、REV、REOV的感染率分别为5.17%、8.17%、1.17%、2.5%,检出率较以前的研究报道有降低趋势,有多种双重感染和三重感染,表明山东家禽业在免疫抑制病方面总体控制较好,但不同的养殖场发病情况差异极显著,管理水平参差不齐,个别地区发病情况严重,检出率超过其他地区的总和。     

CAV与REV共感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用

用1日龄SPF鸡人工感染鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV),探讨病毒感染对鸡体疫苗免疫反应的影响。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV与REV单独感染均显著抑制了鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。CAV单独感染后鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应受到抑制,但与对照组在统计学上的差异不显著,然而,CAV可以显著加重REV感染对鸡体在NDV和IBDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。从而证实CAV与REV共感染在疫苗免疫抑制上有协同作用。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。     

不同方法对网状内皮组织增殖病病毒的检测

从山东、江苏、上海等地的鸡场中，收集疑为网状内皮组织增殖病病毒（REV）感染鸡的脾脏、肝脏56份，分别通过聚合酶链式反应（PCR）、斑点杂交试验（Dot-blot)和间接免疫荧光试验（IFA）对其进行REV检测。结果有21份呈PCR阳性，20份呈Dot-blot阳性，15份呈IFA阳性，且所有IFA阳性样品，PCR和Dot-blot检测都呈阳性，20份Dot-blot阳性样品中有19份呈PCR阳性。研究表明，PCR检测REV较其他方法敏感，可作为REV的常规检测方法之一。     

我国自然发病鸡中MDV、REV和CAV共感染的检测

从山东、河南、河北、北京、江苏、广东、广西、四川、吉林、辽宁、台湾11省42个不同鸡群收集临床有发病表现的828只病、死鸡的病理组织样品，用点杂交方法检测各个样品中马立克氏病病（Marek’s disease virus，MDV）、网状内皮细胞增生病病毒（Reticuloendotheliosis virus，KEV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus，CAV）的感染情况。结果表明：828只病鸡中这3种病毒的检出率均相当高，分别为83．94％（MDV）、61．0％（CAV）和57．25％（REV），并且存在非常严重的双重感染（31．16％）和三重感染（44．69％），     

网状内皮组织增生病病毒、鸡贫血病毒、大肠杆菌混合感染诱导肉鸡腺胃炎

为诊断2019年11月山东某规模化养鸡场商品肉鸡暴发腺胃炎的病因，本试验对病鸡进行临床、大体病变、组织病理和血涂片观察以及病原学检测。结果显示，发病鸡主要表现为生长停滞(矮小),精神沉郁，消瘦，消化不良等；大体病变表现为胸肌苍白，腺胃肿大，腺胃乳头消失，脾脏和法氏囊萎缩；组织病变表现为腺胃炎性细胞浸润，腺管上皮细胞增生，腺胃和十二指肠均有淋巴细胞浸润，可见核分裂象；血涂片中发现大量幼稚红细胞和异形性红细胞，并且异嗜性粒细胞增多；血琼脂培养基长出大小均匀一致的灰白色单一菌落；聚合酶链式反应(PCR)检测显示为大肠杆菌(E.coli);病毒PCR检测显示为网状内皮组织增生病病毒(REV)、鸡贫血病毒(CAV)。最终该病例诊断为REV、CAV、E.coli混合感染引起肉鸡腺胃炎。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染和鸡群的免疫抑制

近几年来，我国鸡群中一些免疫抑制性综合症候，越来越常见。不久前，我们分别在江苏和山东的二个种鸡场遇到了典型的例。虽然二个鸡群对网状的内皮增生病病毒（ＲＥＶ）和鸡贫血病毒都有较高的感染率。但在对鸡群的系统病史、病理剖解变化实验室检查结果做综合分析判断的基础上，确定这二个鸡群的免疫抑制主要是由于整个鸡群在早期感染了网状内皮增生病病毒所致。本文还讨论了造成这种早期感染的可能原因。     

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV（A、B亚群）抗体检测。在572份血清样品中,除了一个8．1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13．3％和75％外,其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫,抗体阳性率均为100％。在212份血清样品中,REV抗体阳性率在16．7％～62．5％之间;ALV（A、B亚群）抗体阳性率在0％～75％之间。本研究结果表明,所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染性引起的鸡群免疫抑制

1999年8月，江苏省泰安州市某AA肉用型鸡父母代种鸡群呈现生长缓慢，鸡新城疫疫苗免疫注射后HI效价不高及多发性腹膜炎，心包炎等免疫抑制性症状，55日龄时，随机从4只患鸡采集血浆样品接种鸡胚成纤维细胞，7d后在间接荧光抗体反应中均对网状内皮增生病病毒（REV）的单克隆抗体11A25呈强阳性反应，结果表明，该鸡各的免疫抑制状态主要由REV的早期感染及其持续发现毒血症所引起。     

鸡贫血病毒实验室检测方法研究进展

鸡贫血病毒不仅可引起鸡的传染性贫血,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。鸡传染性贫血是以雏鸡再生障碍性贫血和免疫抑制为主要特征的传染病,是导致许多疫苗免疫失败以及雏鸡死亡的主要原因之一。鸡贫血病毒在世界范围内广泛存在,是养鸡业潜藏的巨大威胁。本文主要阐述了该病毒的病毒分离鉴定、血清学方法和分子生物学方法等实验室检测方法,旨在为鸡传染性贫血病的诊断和防治提供参考。     

鸡传染性贫血病毒套式PCR检测方法的建立

本试验根据GenBank中登录的禽传染性贫血病毒(CAV)基因序列,设计合成2对引物,外引物的扩增片段大小为485 bp,内引物的扩增片段大小为297 bp,建立了适合CAV快速检测的套式PCR方法(nested PCR),并采用该方法对CAV阳性毒株及临床病料进行了检测。结果显示,该方法能扩增到297 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽网状内皮增生病病毒、减蛋综合征病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1步扩增的敏感性是100 pg,第2步PCR扩增的敏感性是1 fg,敏感性提高了10⁵倍。本研究建立的CAV套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于CAV的临床诊断和分子流行病学调查等。     

鸡传染性贫血病病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据鸡传染性贫血病病毒(chicken infectious anemia virus,CAV)基因组保守区域设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种快速检测CAV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,同时验证其特异性、灵敏性和重复性.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度可达1.8×10¹拷贝/μL,远高于常规PCR方法;并与禽类其他病毒性疾病无交叉反应,具有高特异性.用分离的病毒人工感染1日龄SPF雏鸡,14日龄剖检,对感染鸡体内各器官的病毒分布及载量进行检测,结果表明,在脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊和血清中均可检测到病毒,肝脏、胸腺病毒载量明显高于其他组织.本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可同时检测大量临床样品,适用于CAV的诊断与流行病学分析.