规模化养殖场种鸭新城疫和A型流感病毒带毒监测研究

自2007年7月至2008年4月,从规模化肉用种鸭场固定鸭群共采集360份气管和泄殖腔棉拭子,每份样品尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚5枚,共有78份样品鸡胚尿囊液有血凝性.通过血凝抑制、Dot-ELISA和病毒中和试验对分离病毒鉴定结果表明,所有分离病毒均为新城疫病毒,没有A型流感病毒.监测结果显示,鸭群气管和泄殖腔样品病毒分离阳性率最高值均出现在2007年9月,分别为87.5%和100%,平均值分别为14.6%和21.7%.     

规模化肉种鸡场新城疫和禽流感带毒监测与抗体检测研究

为了了解规模化养殖模式下鸡群新城疫和禽流感带毒情况和抗体滴度,从2007年9月~2008年8月,对规模化养殖场肉种鸡定期进行新城疫和禽流感带毒监测和抗体检测。每月采集鸡群气管和泄殖腔棉拭子各30份（抽检率0.3%）进行新城疫和禽流感病毒监测,每2周采集30份血样（抽检率0.3%）进行新城疫和禽流感抗体检测。研究结果显示,监测鸡群从进雏到淘汰未发现新城疫和禽流感病毒感染;从6.5周龄开始,鸡群新城疫和禽流感(H9亚型)抗体一直维持在免疫保护临界值以上,比较之下,禽流感（H5亚型）抗体上升较慢,且滴度比H9低（2～4）log2。     

2006-2008年山东鸡传染性支气管炎病毒分离株S1与N基因的分子特征

为了调查2006-2008年山东省鸡传染性支气管炎的分子流行病学特征,应用RT-PCR方法分别扩增了14株传染性支气管炎病毒地方毒株S1基因和N基因,并进行了基因克隆与测序工作.对此14株病毒的S1基因序列利用限制性内切酶HaeⅢ进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析,结果显示可以将IBV毒株分为3种不同的基因型.其中11个毒株与LX4毒株有相同的RFLP分型,2株病毒属于Mass基因型,1个毒株有特异的RFLP分型.并将这些分离毒株与11个参考毒株分别进行了基因与氨基酸系统进化树关系分析.S1基因分析结果显示将这些毒株分成3个基因型,与RFLP分析的分型结果一致.11株病毒同属于LX4类型的毒株,分离毒株核苷酸序列相互之间有95.4%～99.7%的同源性.基因Ⅱ型与疫苗株H120和M41的同源性很高.属于基因Ⅲ型的1个毒株形成了独特的基因型.N基因分析结果表明:12株病毒与LX4属于同一基因型,有着较高的同源性.另2株病毒与疫苗株H120同源性很高.以上分析结果表明:山东省IBV分离株存在较为广泛的基因突变、插入和缺失,同时,IBV毒株间的基因重组也可能是山东省IBV变异株产生的另一主要原因.     

抗新城疫病毒HN蛋白单链抗体基因的克隆与序列分析

从分泌抗新城疫HN蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取纯化mRNA,经RT-PCR扩增抗体轻、重链可变区基因,然后与L inker连接组装成单链抗体基因(scFv),其排列方式为VL-linker-VH。结果,成功地构建了scFv基因,序列分析表明,scFv基因长为744 bp,其中VH基因长为366 bp,VL基因长为333 bp。单链抗体基因的构建为抗新城疫HN蛋白基因工程抗体的制备奠定了基础。     

肉鸡接种传染性法氏囊病活疫苗的抗体水平检测

为了确定肉鸡进行IBD活疫苗免疫的最佳日龄,90只肉鸡随机平均分成6组,分别于10、13、17日龄进行IBD活疫苗CH/80和法倍灵免疫接种,剂量为1.5羽份.免疫后10 d、21 d用IDEXX试剂盒检测ELISA抗体滴度.同时设对照组,分别于2、10、17、24、31、38日龄用IDEXX试剂盒检测ELISA抗体滴度.试验组和对照组均于38日龄时进行新城疫(ND)抗体检测.抗体检测发现,各试验组免疫接种后10d ELISA阳性率均小于50%,免疫接种后21 d检测发现,A组和B组ELISA抗体阳性率分别为71.4%和78.5%;C、D、E、F组ELISA抗体阳性率均为100%,而且抗体滴度明显高于A、B组;对照组IBD母源抗体逐渐下降,大约每7 d为1个半衰期,至31日龄鸡群IBD抗体均为阴性;试验组和对照组38日龄ND抗体滴度无显著差异(P>O.05).结果表明,试验用鸡于13日龄进行IBD活疫苗免疫接种效果较好,两种IBD活疫苗免疫接种效果没有显著差异.     

猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟混合感染的诊断与防制

2007年10月,山东某规模化养猪场保育仔猪发生以体温升高,耳部、眼周及四肢皮肤发绀,呼吸困难,共济失调、后躯麻痹、站立不稳,回盲口纽扣状溃疡和淋巴结坏死为主要症状的疾病。通过采集病猪的血清和淋巴结、脾、肺等组织,用ELISA法检测猪繁殖与呼吸综合征抗体,RT-PCR法检测猪瘟病毒,结合发病情况、临床症状和剖检病变最后确诊为猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟的混合感染。     

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV（A、B亚群）抗体检测。在572份血清样品中,除了一个8．1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13．3％和75％外,其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫,抗体阳性率均为100％。在212份血清样品中,REV抗体阳性率在16．7％～62．5％之间;ALV（A、B亚群）抗体阳性率在0％～75％之间。本研究结果表明,所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(JX0601)NSP2基因主要抗原区域的原核表达与纯化

本研究采用PCR方法从高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（JX0601）质粒扩增得到NSP2基因的主要抗原决定区域dNSP2,克隆目的基因连接到pGEM—TEasy,再将其亚克隆到pET-32a上,构建表达载体pET—dNSP2,然后转化大肠埃希菌BL-21（DE3）,分别用不同浓度的IPTG诱导表达,经SDS—PAGE电泳分析,所表达融合蛋白的分子质量约为38．3ku,用His Bind Purification Kit试剂盒纯化蛋白,Western blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。本试验为进一步研究PRRSV诊断试剂盒奠定了基础。     

鸭新城疫病毒分离株抗原表位和遗传演化分析

从规模化养殖场鸭群气管和泄殖腔试子分离到新城疫病毒(NDV)27株,用2株针对NDV HN单抗进行抗原表位分析,并选择4个分离株进行F基因高变区(374bp)和HN基因全长序列分析。抗原表位分析结果显示,27个鸭分离株均能与其中一株单抗C3-B7反应,而与另外一株单抗1E5反应为阴性。F基因(374bp)序列分析结果显示,4个鸭分离株均属于NDV ClassⅠ分支,分离株之间核苷酸同源性为99.2%～100%;分离株与NDV ClassⅡ毒株遗传距离为0.9%～9.9%,与NDV ClassⅠ毒株遗传距离为38.5%～41.7%。根据核苷酸序列推导的氨基酸序列表明,4个鸭NDV分离株F蛋白裂解位点氨基酸模式为:112-EROERL-117。HN基因序列分析结果显示,4个鸭NDV分离株HN基因全长1851bp,编码585个氨基酸;同源性比较发现4个鸭NDV分离株之间核苷酸同源性为99.7%～99.8%,与NDV ClassⅡ毒株核苷酸同源性为68.4%～70.5%,与NDV ClassⅠ毒株核苷酸同源性为95.8%～98.0%。本研究结果显示,鸭分离毒均属于NDV ClassⅠ弱毒,在抗原表位和基因序列上与广泛应用的NDV弱毒疫苗株(LaSota)不同,这些毒株的来源有待进一步深入研究。     

免疫程序对肉鸡新城疫·禽流感(H5亚型)HI抗体消长规律的影响

[目的]为制定商品肉鸡新城疫(ND)、禽流感(AI)的免疫程序提供理论依据。[方法]在调查不同规模化养殖场免疫程序的基础上,制定商品肉鸡的免疫程序,分析不同免疫程序下ND和AI(H5亚型)HI抗体消长规律。[结果]1~7日龄商品肉鸡ND和AI的母源抗体均维持在免疫保护临界值之上。用ND疫苗免疫后,鸡群抗体水平不断下降,各免疫组均在24日龄最低。使用ND活疫苗和灭活苗的免疫组中ND抗体滴度比其他免疫组高。非免疫组AI(H5亚型)抗体滴度均随日龄的增加而逐渐下降,而免疫组24日龄后缓慢上升,38日龄达到免疫保护临界值。[结论]禽流感(H5亚型)灭活苗对商品肉鸡的免疫效果较差,应从免疫佐剂、抗原浓缩等方面进行新型商品肉鸡禽流感疫苗研究。